半胱氨酸檢測(cè)方法、檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種半胱氨酸檢測(cè)方法、檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用。所述試劑盒包含：用作過(guò)氧化物酶模擬物的金核鉑殼納米粒子；過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物；以及，輔助試劑，包含在以所述金核鉑殼納米粒子與半胱氨酸孵育時(shí)所用吐溫?20、磷酸鹽緩沖溶液和金核鉑殼納米粒子催化所述氧化特征底物時(shí)所需的檸檬酸鈉緩沖溶液。該檢測(cè)方法主要依據(jù)該試劑盒實(shí)施。利用本發(fā)明的試劑盒及檢測(cè)方法，可實(shí)現(xiàn)對(duì)于半胱氨酸的高靈敏檢測(cè)，例如，對(duì)半胱氨酸檢測(cè)的線(xiàn)性范圍為0.01?20uM，靈敏度可達(dá)到10nM，并具有簡(jiǎn)便快速、成本低，穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)，可應(yīng)用于生物、環(huán)境、食品等樣品中半胱氨酸的檢測(cè)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
半胱氨酸檢測(cè)方法、檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種半胱氨酸檢測(cè)方法，具體涉及一種基于納米模擬酶活性調(diào)控的半胱氨酸比色檢測(cè)方法，屬于靈敏分析技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]酶是一類(lèi)生物催化劑，是具有催化功能的蛋白質(zhì)?？梢栽谶m宜的環(huán)境中催化化學(xué)反應(yīng)，但是由于酶固有的特性，其應(yīng)用也受到了一些限制，比如蛋白酶容易變性和水解，而且高成本和嚴(yán)格的使用條件也限制了它們的應(yīng)用。因此，開(kāi)發(fā)一種具有類(lèi)似催化活性的模擬酶尤為重要。
[0003]納米模擬酶是一類(lèi)非蛋白、人工合成的納米結(jié)構(gòu)，具有與天然酶有相似的催化性能。自2007年閻錫蘊(yùn)等首次發(fā)現(xiàn)磁性四氧化三鐵納米粒子(Fe3O4NPs)具有內(nèi)在的過(guò)氧化物酶特性以來(lái)，納米粒子作為模擬酶的研究備受人們關(guān)注。與天然酶相比，納米模擬酶的制備、純化和儲(chǔ)存都比較容易，且價(jià)格低廉，能夠在比較苛刻的化學(xué)環(huán)境中使用。因此，納米模擬酶的開(kāi)發(fā)應(yīng)用具有很高的市場(chǎng)前景。其中，基于納米模擬酶如何實(shí)現(xiàn)半胱氨酸的檢測(cè)，也是業(yè)界研發(fā)人員關(guān)注的重點(diǎn)之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的之一在于提供一種半胱氨酸檢測(cè)方法，其方便快速、成本較低、靈敏度高、穩(wěn)定性高。
[0005]本發(fā)明的另一目的在于提供一種半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，其基于高效穩(wěn)定的納米材料模擬酶而構(gòu)建，并可以簡(jiǎn)單、靈敏、低成本地檢測(cè)半胱氨酸。
[0006]本發(fā)明的另一目的在于提供上述半胱氨酸檢測(cè)方法或半胱氨酸檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)半胱氨酸中的應(yīng)用。
[0007]為實(shí)現(xiàn)前述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案包括:
[0008]本發(fā)明實(shí)施例公開(kāi)了一種半胱氨酸檢測(cè)方法，包括如下步驟:
[0009](I)將金核鉑殼納米粒子和吐溫-20充分混合，然后和一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)半胱氨酸溶液與磷酸鹽緩沖溶液充分混合，孵育；
[0010](2)向步驟(I)的混合溶液中加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，測(cè)定各混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并獲得半胱氨酸濃度-吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
[0011](3)將金核鉑殼納米粒子和待測(cè)溶液及磷酸鹽緩沖溶液混合、孵育后，再加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，測(cè)定該混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照，從而測(cè)得待測(cè)溶液中的半胱氨酸濃度。
[0012]在一些較為優(yōu)選的實(shí)施方案之中，所述檢測(cè)方法可以包括如下步驟:
[0013](I)將金核鉑殼納米粒子和吐溫-20充分混合，然后和一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)半胱氨酸溶液與磷酸鹽緩沖溶液充分混合，室溫下孵育1min以上；
[0014](2)取步驟(I)最終所獲混合溶液，加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，反應(yīng)5min以上，再分別測(cè)定各混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并獲得半胱氨酸濃度-吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
[0015](3)將金核鉑殼納米粒子和吐溫-20充分混合，然后和待測(cè)溶液及磷酸鹽緩沖溶液混合、孵育后，再加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，測(cè)定該混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照，從而測(cè)得待測(cè)溶液中的半胱氨酸濃度。
[0016]本發(fā)明實(shí)施例還公開(kāi)了上述半胱氨酸檢測(cè)方法中所用的半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，包括:
[0017]用作過(guò)氧化物酶模擬物的金核鈾殼納米粒子；
[0018]過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，
[0019]以及，輔助試劑，包含在以所述金核鉑殼納米粒子與半胱氨酸孵育時(shí)所用磷酸鹽緩沖溶液、吐溫-20和金核鉑殼納米粒子催化所述特征底物時(shí)所需的檸檬酸鈉緩沖溶液。[°02°]優(yōu)選的，所述金核鈾殼納米粒子中金核的粒徑為15-30nm，鈾殼的厚度為3-5nm。[0021 ]更為優(yōu)選的，所述金核鉑殼納米粒子的粒徑為22-40nm。
[0022]優(yōu)選的，所述磷酸鹽緩沖溶液的濃度優(yōu)選為5-50mM，pH值為5.0-8.0；
[0023]和吐溫-20的濃度為0.005%-0.05%；
[0024]和/或所述檸檬酸鈉緩沖溶液的pH值為4.0-5.0。
[0025]進(jìn)一步的，所述特征底物的濃度為0.lmM-10.0mM。
[0026]更進(jìn)一步的，所述過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物可選自，但不限于3，4_二羥基苯乙酸，四甲基聯(lián)苯胺(TMB)，鄰苯二胺((PD)，2，2_聯(lián)氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽(ABTS)。
[0027]相應(yīng)地，本發(fā)明實(shí)施例還公開(kāi)了上述半胱氨酸檢測(cè)方法或半胱氨酸檢測(cè)試劑盒于檢測(cè)半胱氨酸中的應(yīng)用。
[0028]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)至少在于:
[0029](I)本發(fā)明通過(guò)將不同濃度的半胱氨酸與金核鉑殼納米粒子(AuOPtNPs)結(jié)合，不同程度地抑制金核鉑殼納米模擬過(guò)氧化物酶的催化活性，并基于此原理開(kāi)發(fā)了高靈敏的半胱氨酸檢測(cè)方法，其對(duì)半胱氨酸檢測(cè)的線(xiàn)性范圍為0.01-20uM，靈敏度可達(dá)到5.0nM。
[0030](2)本發(fā)明的半胱氨酸檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒具有簡(jiǎn)便快速、成本低，穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)，可應(yīng)用于環(huán)境、食品等樣品中半胱氨酸的檢測(cè)。
【附圖說(shuō)明】
[0031]圖1a-圖1b是本發(fā)明實(shí)施例1合成的金核鉑殼納米粒子的TEM圖；
[0032]圖2是本發(fā)明實(shí)施例1中金核鉑殼納米過(guò)氧化物模擬酶濃度與催化底物TMB和H2O2反應(yīng)的吸光值曲線(xiàn)圖；
[0033]圖3是本發(fā)明實(shí)施例1中所獲半胱氨酸濃度-吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖；
[0034]圖4是本發(fā)明實(shí)施例1中對(duì)于不同氨基酸的選擇性的測(cè)試圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0035]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。這些優(yōu)選實(shí)施方式的示例在附圖中進(jìn)行了例示。附圖中所示和根據(jù)附圖描述的本發(fā)明的實(shí)施方式僅僅是示例性的，并且本發(fā)明并不限于這些實(shí)施方式。
[0036]在此，還需要說(shuō)明的是，為了避免因不必要的細(xì)節(jié)而模糊了本發(fā)明，在附圖中僅僅示出了與根據(jù)本發(fā)明的方案密切相關(guān)的結(jié)構(gòu)和/或處理步驟，而省略了與本發(fā)明關(guān)系不大的其他細(xì)節(jié)。
[0037]本發(fā)明提供的金核鉑殼納米粒子(AuOPtNPs)具有很高的類(lèi)過(guò)氧化物酶的催化活性。與過(guò)氧化物酶相比，AuOPt NPs模擬酶對(duì)于TMB-H2O2等顯色體系具有更高的催化效率，對(duì)環(huán)境的耐受性更高。半胱氨酸是一種含有巰基的氨基酸，能夠和AuOPt NPs結(jié)合，并導(dǎo)致其類(lèi)過(guò)氧化物酶催化活性的下降；不同半胱氨酸濃度與AuOPt NPs作用，通過(guò)底物TMB-H2O2顯色，一定范圍內(nèi)的半胱氨酸濃度和反應(yīng)體系的吸光值呈負(fù)相關(guān)?；谝陨习l(fā)現(xiàn)，本案發(fā)明人建立了本發(fā)明的檢測(cè)半胱氨酸的比色檢測(cè)方法，該方法具有高靈敏，高選擇、低成本等優(yōu)點(diǎn)。
[0038]本發(fā)明實(shí)施例公開(kāi)了一種半胱氨酸檢測(cè)方法，包括如下步驟:
[0039](I)將金核鉑殼納米粒子和吐溫-20充分混合，然后和一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)半胱氨酸溶液與磷酸鹽緩沖溶液充分混合，孵育；
[0040](2)向步驟(I)的混合溶液中加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，測(cè)定各混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并獲得半胱氨酸濃度-吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
[0041](3)將金核鉑殼納米粒子和待測(cè)溶液及磷酸鹽緩沖溶液混合、孵育后，再加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，測(cè)定該混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照，從而測(cè)得待測(cè)溶液中的半胱氨酸濃度。
[0042]在一些較為優(yōu)選的實(shí)施方案之中，所述檢測(cè)方法可以包括如下步驟:
[0043](I)將金核鉑殼納米粒子和吐溫-20充分混合，然后和一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)半胱氨酸溶液與磷酸鹽緩沖溶液充分混合，室溫下孵育1min以上；
[0044](2)取步驟(I)最終所獲混合溶液，加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，反應(yīng)5min以上，再分別測(cè)定各混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并獲得半胱氨酸濃度-吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
[0045](3)將金核鉑殼納米粒子和吐溫-20充分混合，然后和待測(cè)溶液及磷酸鹽緩沖溶液混合、孵育后，再加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，測(cè)定該混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照，從而測(cè)得待測(cè)溶液中的半胱氨酸濃度。
[0046]本發(fā)明實(shí)施例還公開(kāi)了上述半胱氨酸檢測(cè)方法中所用的半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，包括:
[0047 ]金核鈾殼納米粒子，用作過(guò)氧化物酶模擬物；
[0048]過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，
[0049]以及，輔助試劑，包含在以所述金核鉑殼納米粒子與半胱氨酸孵育時(shí)所用磷酸鹽緩沖溶液、吐溫-20和金核鉑殼納米粒子催化所述特征底物時(shí)所需的檸檬酸鈉緩沖溶液。
[0050]本發(fā)明實(shí)施例還公開(kāi)了上述半胱氨酸檢測(cè)方法或半胱氨酸檢測(cè)試劑盒于檢測(cè)半胱氨酸中的應(yīng)用。
[0051]優(yōu)選的，所述金核鈾殼納米粒子中金核的粒徑為15-30nm，鈾殼的厚度為3-5nm。
[0052]更為優(yōu)選的，所述金核鈾殼納米粒子的粒徑為15-30nm。
[0053]優(yōu)選的，所述吐溫-20濃度為0.005%-0.05%；
[0054]磷酸鹽緩沖溶液的濃度優(yōu)選為5-50mM，pH值為5.0-8.0；
[0055]和/或所述檸檬酸鈉緩沖溶液的pH值為4.0-5.0。
[0056]進(jìn)一步的，所述特征底物的濃度為0.lmM-10.0mM。
[0057]更進(jìn)一步的，所述過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物可選自，但不限于3，4_二羥基苯乙酸，四甲基聯(lián)苯胺(TMB)，鄰苯二胺((PD)，2，2_聯(lián)氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽(ABTS)。
[0058]以下為具體實(shí)施例:
[0059]實(shí)施例1
[0060](I)利用檸檬酸鈉還原法合成平均粒徑為15nm的金納米粒子溶液，取30ml合成的金納米溶液(3nM)和1ml，1.0mM六氯鉑酸鉀(K2PtCl6)混合于潔凈的錐形瓶里置于磁力攪拌器上攪拌并加熱至800C，然后向混合溶液中緩慢加入1ml，5mM的還原劑-抗壞血酸，溶液顏色由酒紅色逐漸變?yōu)樽厣?，使混合溶液保?0°C繼續(xù)攪拌30min以保證溶液中的1(2?比16完全被還原，即得到粒徑約為22nm的金核鈾殼納米粒子，如圖1a-圖1b所示的TEM圖。
[0061](2)將步驟(I)中得到的金核鉑殼納米溶液稀釋100倍，與吐溫-20充分混合，使其濃度為0.005%，取1ul加入酶標(biāo)板中，再分別加入1ul，10mM的磷酸鹽緩沖液，以及80yL不同濃度(0-80uM)的半胱氨酸溶液室溫條件下震蕩孵育1?40min。
[0062](3)向步驟(2)中孵育好的混合溶液中依次加入52yL檸檬酸檬酸鈉緩沖溶液(0.04M，pH4.0)、29yL，1.0mM的TMB溶液、19yL，2.2M的H2O2溶液，震蕩均勻后測(cè)定反應(yīng)1min時(shí)650nm處的吸光值。由此方法獲得半胱氨酸的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖3所示，檢測(cè)靈敏度可達(dá)到5.0nM，檢測(cè)線(xiàn)性范圍為0.01-20uM。
[0063](4)血清中的半胱氨酸的檢測(cè):將人血清用超純水稀釋500倍，用0.22μπι微孔過(guò)濾膜過(guò)濾。參照上述步驟(I)和(2)方法測(cè)試樣品，參照步驟(3)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，可計(jì)算出血清中半胱氨酸的含量。
[0064]另外，參照步驟(1)-(3)的操作及基本相同的反應(yīng)條件，還對(duì)其它氨基酸進(jìn)行了比對(duì)性的檢測(cè)，其最終檢測(cè)結(jié)果可參閱圖4(其中半胱氨酸和同型半胱氨酸的濃度為1.ΟμΜ，谷胱甘肽和其它氨基酸的濃度為ΙΟμΜ)。
[0065]實(shí)施例2
[0066](I)利用檸檬酸鈉還原法合成平均粒徑為30nm的金納米粒子溶液，取30ml合成的金納米溶液(60pM)和1ml，1.0mM六氯鉑酸鉀(K2PtCl6)混合于潔凈的錐形瓶里置于磁力攪拌器上攪拌并加熱至80°C，然后向混合溶液中緩慢加入1ml，5mM的還原劑-抗壞血酸，溶液顏色由酒紅色逐漸變?yōu)樽厣够旌先芤罕３?0°C繼續(xù)攪拌30min以保證溶液中的1(2?比16完全被還原，即得到粒徑約為40nm的金核鈾殼納米粒子。
[0067](2)將步驟(I)中得到的金核鉑殼納米溶液稀釋200倍，與吐溫-20充分混合，使其濃度為0.05%，取1ul加入酶標(biāo)板中再分別加入1ul，10mM的磷酸鹽緩沖液，以及80yL不同濃度(0-80uM)的半胱氨酸溶液室溫條件下震蕩孵育1?40min。
[0068](3)向步驟(2)中孵育好的混合溶液中依次加入52yL檸檬酸檬酸鈉緩沖溶液(0.04]\1，？!14.0)、2941^，0.51111的1'冊(cè)溶液、1941^，1.1]\1的!1202溶液，震蕩均勻后測(cè)定反應(yīng)101^11時(shí)650nm處的吸光值。依據(jù)本實(shí)例所獲得半胱氨酸的檢測(cè)結(jié)果，亦可得出與實(shí)施例1相近之標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
[0069](3)血清中的半胱氨酸的檢測(cè):將人血清用超純水稀釋500倍，用0.22μπι微孔過(guò)濾膜過(guò)濾。參照上述步驟(I)和(2)方法測(cè)試樣品，參照步驟(3)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，可計(jì)算出血清中半胱氨酸的含量。
[0070]以上實(shí)施例1-2中，所涉及的原料，如金核鉑殼納米粒子的前驅(qū)體、及其它試劑均可通過(guò)市售途徑獲取。
[0071]本發(fā)明的各實(shí)施例中的納米粒子制備方法，在下述參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上改動(dòng):B1sensors and B1electronics 70(2015)194-201。
[0072]需要指出的是，上述實(shí)施例僅為說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種半胱氨酸檢測(cè)方法，其特征在于包括如下步驟: (1)將金核鉑殼納米粒子和吐溫-20充分混合，然后將一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)半胱氨酸溶液與磷酸鹽緩沖溶液充分混合，孵育； (2)向步驟(I)的混合溶液中加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，并測(cè)定各混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，獲得半胱氨酸濃度-吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)； (3)將金核鉑殼納米粒子和待測(cè)溶液及磷酸鹽緩沖溶液混合、孵育后，再加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，測(cè)定該混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照，從而測(cè)得待測(cè)溶液中的半胱氨酸濃度。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半胱氨酸檢測(cè)方法，其特征在于包括如下步驟: (1)將金核鉑殼納米粒子和吐溫-20充分混合，然后將一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)半胱氨酸溶液與磷酸鹽緩沖溶液充分混合，室溫下孵育1min以上； (2)取步驟(I)最終所獲混合溶液，加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，反應(yīng)5min以上，再分別測(cè)定各混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并獲得半胱氨酸濃度-吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)； (3)將金核鉑殼納米粒子和吐溫-20充分混合，然后和待測(cè)溶液及磷酸鹽緩沖溶液混合、孵育后，再加入檸檬酸鈉緩沖溶液和過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物，均勻混合形成混合反應(yīng)體系，測(cè)定該混合反應(yīng)體系在可見(jiàn)光波段的吸光值，并與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照，從而測(cè)得待測(cè)溶液中的半胱氨酸濃度。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的半胱氨酸檢測(cè)方法，其特征在于步驟(I)最終所獲得的混合溶液中所含吐溫-20的濃度為0.005%-0.05% ;磷酸鹽緩沖溶液的濃度為5-50mM，pH值為5.0-8.0； 和/或，所述檸檬酸鈉緩沖溶液的pH值為4.0-5.0。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的半胱氨酸檢測(cè)方法，其特征在于所述過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物包括3，4_二羥基苯乙酸、四甲基聯(lián)苯胺、鄰苯二胺或2，2_聯(lián)氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽中的任意一種或兩種以上的組合。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的半胱氨酸檢測(cè)方法，其特征在于步驟(2)或步驟(3)中所述混合反應(yīng)體系中所述特征底物的濃度為0.1mM-10.0mM。6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的半胱氨酸檢測(cè)方法中所用的半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括: 用作過(guò)氧化物酶模擬物的金核鈾殼納米粒子； 過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物， 以及，輔助試劑，包含在以所述吐溫-20、金核鉑殼納米粒子與半胱氨酸孵育時(shí)所用磷酸鹽緩沖溶液和金核鉑殼納米粒子催化所述特征底物時(shí)所需的檸檬酸鈉緩沖溶液。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述金核鉑殼納米粒子中金核的粒徑為15-30nm，鉑殼的厚度為3-5nm。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述金核鉑殼納米粒子的粒徑為22-40nm。9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述磷酸鹽緩沖溶液的pH值為 5.0-8.0; 吐溫-20的濃度為0.005%-0.05%； 和/或，所述檸檬酸鈉緩沖溶液的pH值為4.0-5.0。10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述過(guò)氧化物酶模擬物的特征底物包括3，4_ 二羥基苯乙酸、四甲基聯(lián)苯胺、鄰苯二胺或2，2_聯(lián)氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽中的一種或兩種以上的任意組合。11.由權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的半胱氨酸檢測(cè)方法或權(quán)利要求6-10中任意一項(xiàng)所述的半胱氨酸檢測(cè)試劑盒于檢測(cè)半胱氨酸中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK105823744SQ201610166067
【公開(kāi)日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年3月22日
【發(fā)明人】王麗英, 彭池方, 潘娜, 謝正軍
【申請(qǐng)人】江南大學(xué)