s/PSA固相萃取柱，當液面到達吸附劑的頂部時，將上述提取溶液轉(zhuǎn) 入柱中，用2mL乙臘洗涂試管，并將洗涂液移入SPE柱中，待溶液達到吸附劑頂部時，加入4mL 乙臘至柱子上進行洗脫，洗脫液全部接收到定量試管中，氮氣吹干后用體積比為1/1的丙 酬/正己燒混合溶劑定容至ImL，過0.22皿濾膜后，待GC-NCI-MS測定。
[0033] (2)標準工作溶液的配制 準確稱取25±0.1 mg標準品于25mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容得1000.Ojig/mL標準儲 備液;移取1. OmL標準儲備液置于IOOmL容量瓶中，用用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶 劑定容得到10.Oyg/mL標準中間液;將lOiig/mL標準溶液稀釋配成5、2、1、0.5、0.2、0.化g/mL 標準溶液。將不含氣挫菌酷胺的小麥空白樣品按上述前處理步驟處理，得樣品提取凈化殘 渣，在此殘渣中加入90化L體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑和10化L上述標準溶液，滿 旋混勻，配成10、20、50、100、200、500yg/L基質(zhì)標準工作溶液。
[0034] (3)氣相色譜-負化學離子源-質(zhì)譜法(GC-NCI-MS)測定 將不同濃度梯度的標準工作液分別注入GC-NCI-MS，W外標法進行氣挫菌酷胺含量的 定量分析，即W標準工作液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線； 在相同條件下將樣品提取液注入GC-NCI-MS進行測定，測得樣品液中氣挫菌酷胺的色譜峰 面積，代入標準工作曲線，得到樣品液中氣挫菌酷胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì) 量計算得到樣品中氣挫菌酷胺殘留量。
[00巧]其中色譜條件為：
[0036] 色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.25皿。
[0037] 進樣口溫度:250. (TC，進樣模式:不分流進樣，進樣量:化L。
[0038] 載氣:化，恒流模式，流速1. OmL/min。
[0039] 爐箱升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分 鐘2°C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin。
[0040] 傳輸線溫度:280°C。
[0041] 其中，質(zhì)譜參數(shù)為：
[0042] 電離模式:負化學電離，即NCI模式，能量70eV。
[0043] 離子源溫度：150°C ;四極桿溫度150°C。
[0044] 掃描方式:選擇離子監(jiān)測（SIM)模式;SIM監(jiān)測的離子為:361.1、362.1、362.9，定量 離子為361.1。
[0045] 定性鑒定:在相同的條件下，如果樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時間與標準溶液中相應 農(nóng)藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且離子 豐度比與標準溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運種農(nóng)藥;若上述兩個條件 不能同時滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0046] W標準工作液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線如表 Io 表1小麥空白基質(zhì)中氣挫菌醜胺的標準工作曲線
[0047] 加標回收率和重復性：
[004引在不含氣挫菌酷胺的小麥中加入10、20和20化g/kg3個濃度水平的氣挫菌酷胺標 準溶液，待農(nóng)藥添加30min后按上述處理步驟進行殘留量測定。將測定濃度與農(nóng)藥理論添加 濃度進行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個添加水平平行測定6次，得其相對標準偏差，測定 結(jié)果見表2。由表2可W看出，在3個加標水平上，氣挫菌酷胺的平均回收率為88.9%~ 104.7%，平均相對標準偏差(RSD)為4.2%~5.5 %，說明本發(fā)明方法的回收率較高，重復性 好。
[0049] 表2氣挫菌醜胺的回收率和重復性(n = 6)
[0050] 檢出限；
[0051 ]將不同濃度的氣挫菌酷胺基質(zhì)標準工作溶液注入GC-NCI-MS，W最低濃度基質(zhì)標 準溶液色譜峰的3倍信噪比和樣品處理過程的濃縮倍數(shù)(小麥的濃縮倍數(shù)為2.0倍)計算檢 出限，氣挫菌酷胺的檢出限為1.09iig/kg。
[0052]實施例2:豬肉中氣挫菌酷胺殘留量的檢測
[0化3] (I)樣品前處理
[0054] 提取 稱取經(jīng)充分混勻的5g豬肉樣品于50血離屯、管中，加入5mL水混勻，放置30min，準確加入 20mL乙臘，均質(zhì)提取2min，加入3g無水硫酸儀和2g氯化鋼，滿旋Imin后，7000;r/min離屯、 5min。離屯、后，取SmL乙臘提取液于40 °C旋蒸或氮氣吹至約ImL,待凈化。
[0化5] 凈化 用5mL乙臘預洗Cis/PSA固相萃取柱，當液面到達吸附劑的頂部時，將上述提取溶液轉(zhuǎn) 入柱中，用2mL乙臘洗涂試管，并將洗涂液移入SPE柱中，待溶液達到吸附劑頂部時，加入4mL 乙臘至柱子上進行洗脫，洗脫液全部接收到定量試管中，氮氣吹干后用體積比為1/1的丙 酬/正己燒混合溶劑定容至ImL，過0.22皿濾膜后，待GC-NCI-MS測定。
[0056] (2)標準工作溶液的配制 將lOOOiig/mL標準溶液用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑稀釋成lOiig/mL標準中 間液，將lOyg/mL標準溶液稀釋配成5、2、1、0.5、0.2、0. liig/mL標準溶液。將不含氣挫菌酷胺 的豬肉空白樣品按上述前處理步驟處理，得樣品提取凈化殘渣，在此殘渣中加入90化L體積 比為1 /1的丙酬/正己燒混合溶劑和100化上述標準溶液，滿旋混勻，配成10、20、50、100、 200、500iig/L基質(zhì)標準工作溶液。
[0057] (3)氣相色譜-負化學離子源-質(zhì)譜法(GC-NCI-MS)測定 操作步驟、色譜和質(zhì)譜條件與上述小麥樣品中氣挫菌酷胺的測定一致。
[005引定性鑒定：同上述小麥樣品中氣挫菌酷胺的測定一致。
[0化9]線性關系： W標準工作液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線為 Y = 249.73X-692.44，相關系數(shù)為0.9994。
[0060] 加標回收率和重復性：
[0061] 在不含氣挫菌酷胺的豬肉中加入10、20和20化g/kg 3個濃度水平的氣挫菌酷胺標 準溶液，待農(nóng)藥添加30min后按上述處理步驟進行殘留量測定，將測定濃度與農(nóng)藥理論添加 濃度進行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個添加水平平行測定6次，得其相對標準偏差，測定 結(jié)果見表3。由表3可W看出，在3個加標水平上，氣挫菌酷胺的平均回收率為93.6%~ 95.4 %，平均相對標準偏差(RSD)為5.0 %~7.5 %，說明本發(fā)明方法的回收率高，重復性好。
[0062] 表3氣挫菌酷胺的回收率和重復性(n = 6)
[0063] 檢出限；
[0064] 將不同濃度的氣挫菌酷胺基質(zhì)標準工作溶液注入GC-NCI-MS，W最低濃度基質(zhì)標 準溶液色譜峰的3倍信噪比和樣品處理過程的濃縮倍數(shù)(豬肉的濃縮倍數(shù)為2.0倍)計算檢 出限，氣挫菌酷胺的檢出限為〇.97yg/kg。
[0065] W上的實施例僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行描述，并非對本發(fā)明的范圍進行 限定，在不脫離本發(fā)明設計精神的前提下，本領域普通工程技術(shù)對本發(fā)明的技術(shù)方案作出 的各種變型和改進，均應落入本發(fā)明的權(quán)利要求書確定的保護范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種氟唑菌酰胺殘留量的GC-NCI-MS測定方法，其特征在于，所述方法包括以下步 驟： (1) 提取 稱取混勻樣品于具塞離心管中，加適量水后，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質(zhì)或 振蕩超聲提取后，加入氯化鈉或乙酸鈉中的一種和無水硫酸鎂，劇烈渦旋lmin后離心； (2) 凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至lmL左右，經(jīng)C18/PSA固相萃取柱凈化，乙腈洗脫，收集 洗脫液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相色 譜-負化學離子源-質(zhì)譜(GC-NCI-MS)檢測； (3) 標準工作溶液的配制 將不含氟唑菌酰胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 殘渣，加入適量溶劑和標準溶液，渦旋混勻，配制成至少3個濃度的氟唑菌酰胺系列標準工 作液； (4) 測定和結(jié)果計算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標準工作液進行GC-NCI-MS測定，以標準工作液的色譜峰 面積對其相應濃度進行回歸分析，得到基質(zhì)標準工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-NCI-MS進行測定，測得樣品液中氟唑菌酰胺的色譜峰面積，代入基質(zhì)標 準工作曲線，得到樣品液中氟唑菌酰胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計算得到 樣品中氟唑菌酰胺殘留量;若上機溶液中氟唑菌酰胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容 溶劑將上機溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟唑菌酰胺殘留量的GC-NCI-MS測定方法，其特征在于， 步驟(1)中樣品若為含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟唑菌酰胺殘留量的GC-NCI-MS測定方法，其特征在于， 步驟（1)中采用乙腈提取時需加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時需加入乙 酸鈉鹽析。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟唑菌酰胺殘留量的GC-NCI-MS測定方法，其特征在于， 步驟⑵中進行(WPSA固相萃取凈化，乙腈洗脫時，洗脫體積為6~8mL。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟唑菌酰胺殘留量的GC-NCI-MS測定方法，其特征在于， 步驟(4)中GC-NCI-MS分析條件為:色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，膜 厚0.25μπι;進樣口溫度250.0°C ;載氣:He，不分流模式進樣，進樣量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C ;電 離模式：負化學電離，即NCI模式，能量70eV;離子源溫度150°C;掃描方式：選擇離子監(jiān)測 (S頂)模式，監(jiān)測的離子為:監(jiān)測的離子為:361.1、362.1、362.9。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種氟唑菌酰胺殘留量的GC?NCI?MS測定方法，該方法主要用于測定糧谷、動物源性食品等復雜基質(zhì)食品農(nóng)產(chǎn)品中殘留的氟唑菌酰胺含量的方法。用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取樣品中殘留的氟唑菌酰胺，C18/PSA固相萃取柱凈化濃縮后，氣相色譜?負化學離子源?質(zhì)譜（GC?NCI?MS）檢測，采用不含待測農(nóng)藥的空白基質(zhì)溶液建立校正的標準工作曲線，外標法定量。本方法平均回收率為88.9%～104.7%，平均相對標準偏差（RSD）為4.2%～7.5%，檢出限低于1.09 μg/kg，具有操作簡便、快速、去雜效果好、靈敏度高、特征性強、重復性好、定性定量準確的優(yōu)點。能滿足美國、歐盟、日本等國家對相應產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全及對外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開號】CN105717213
【申請?zhí)枴緾N201610067305
【發(fā)明人】崔淑華
【申請人】崔淑華
【公開日】2016年6月29日
【申請日】2016年1月30日