一種芽菜類蔬菜中708種農(nóng)藥殘留gc-q-tof/ms偵測技術(shù)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[00011本發(fā)明涉及農(nóng)殘檢測領(lǐng)域，特別涉及一種應(yīng)用GC-Q-T0F/MS篩查芽菜類蔬菜中708 種農(nóng)殘的偵測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 水果蔬菜與人們的生活息息相關(guān)，尤其是芽菜類蔬菜(綠豆芽、香椿芽和草頭等） 的營養(yǎng)價值備受消費(fèi)者的青睞。但是，目前在芽菜類蔬菜的種植，生長以及保藏過程中可能 使用的農(nóng)藥及化學(xué)品已超過1100種。然而，伴隨了農(nóng)藥的廣泛使用，其過量使用、濫用和誤 用等不規(guī)范行為也隨之產(chǎn)生，使得農(nóng)藥殘留于農(nóng)產(chǎn)品中，從而給人類健康造成潛在威脅，同 時也對農(nóng)產(chǎn)品的進(jìn)出口貿(mào)易產(chǎn)生了不利影響。
[0003] 早在1976年世界衛(wèi)生組織(WH0)、糧農(nóng)組織(FA0)和聯(lián)合國環(huán)境規(guī)劃署(UNEP)共同 建立了全球環(huán)境檢測系統(tǒng)/食品項目（Global Environment Monitoring System，GEMS/ Food)，旨在掌握會員國食品污染狀況，了解食品污染物攝入量，保護(hù)人體健康，促進(jìn)貿(mào)易發(fā) 展?，F(xiàn)在，世界各國都把食品安全提升到國家安全的戰(zhàn)略地位。農(nóng)藥殘留限量是食品安全標(biāo) 準(zhǔn)之一，也是國際貿(mào)易準(zhǔn)入門檻。同時，對農(nóng)藥殘留的要求呈現(xiàn)出品種越來越多，限量越來 越嚴(yán)格的發(fā)展趨勢，也就是國際貿(mào)易設(shè)立的農(nóng)藥殘留限量門檻越來越高?，F(xiàn)在歐盟已制定 了839種農(nóng)藥的162248項MRL標(biāo)準(zhǔn)，美國制定了351種農(nóng)藥的39147項MRL標(biāo)準(zhǔn)，日本制定了 579種農(nóng)藥的51600多項MRL標(biāo)準(zhǔn)，我國2014年發(fā)布了381種農(nóng)藥的3650項MRL標(biāo)準(zhǔn)。目前，國 際上普遍采用的一律標(biāo)準(zhǔn)限量為l〇yg/kg。因此，食品安全和國際貿(mào)易都呼喚高通量快速農(nóng) 藥殘留檢測技術(shù)，這無疑也給廣大農(nóng)藥殘留分析工作者提供了機(jī)遇和挑戰(zhàn)。在目前的眾多 農(nóng)藥殘留分析技術(shù)中，色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是實(shí)現(xiàn)高通量多殘留快速檢測的最佳分析手段。
[0004] 目前農(nóng)藥殘留分析多以氣相色譜、液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用技術(shù)為主。這些檢測技術(shù)都首先需要農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品對照進(jìn)行定性。例如，對100種農(nóng)藥的檢 測就需要準(zhǔn)備相應(yīng)的100種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品對照，而這100種之外的農(nóng)藥都會被漏檢。在農(nóng)獸藥 殘留實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際工作中，絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都不會儲備數(shù)百種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，其原因是農(nóng)藥 標(biāo)準(zhǔn)品不僅價格昂貴，而且有效期只有2-3年，需要重復(fù)投資。一般實(shí)驗(yàn)室常備農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品 只有幾十種，其日常監(jiān)測的農(nóng)藥品種也就只限于這幾十種，由此造成食品安全監(jiān)測漏洞。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了克服上述缺陷，本發(fā)明人團(tuán)隊經(jīng)過多年潛心研究，研發(fā)了708種農(nóng)藥的精確質(zhì) 量數(shù)據(jù)庫以及一種果蔬中708種農(nóng)藥殘留的GC-Q-T0F/MS偵測技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了不需標(biāo)準(zhǔn)品對 照、即可對芽菜類蔬菜中708種農(nóng)藥殘留進(jìn)行快速偵測檢測，滿足了當(dāng)前農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 高通量快速檢測的急需。
[0006] 一方面，本發(fā)明提供了一種GC-Q-T0F/MS檢測芽菜類蔬菜中708種農(nóng)藥殘留的偵測 方法，其特征在于:建立708種農(nóng)藥T0F/MS數(shù)據(jù)庫，同時對芽菜類蔬菜中708種農(nóng)藥進(jìn)行定性 偵測與確證;該方法包括以下步驟：
[0007] (1)將農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品分別配制成l_5mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，設(shè)定條件下經(jīng)GC-QT0F/MS-級 模式全譜數(shù)據(jù)測定每種標(biāo)準(zhǔn)溶液的全譜數(shù)據(jù)，分別得到每種農(nóng)藥的化學(xué)分子式、保留時間、 碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、離子豐度比；
[0008] (2)將步驟(1)中獲得的一級模式全譜數(shù)據(jù)，經(jīng)核實(shí)后的碎片離子全掃描質(zhì)譜圖導(dǎo) 入PCDL軟件中，并與對應(yīng)的農(nóng)藥信息相關(guān)聯(lián)，建成T0F/MS精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫，用于數(shù)據(jù)檢索分 析；
[0009] (3)與步驟(1)相同的設(shè)定條件下芽菜類蔬菜的測定待測樣品中農(nóng)藥的全譜數(shù)據(jù)， 得到其含有的農(nóng)藥的化學(xué)分子式、保留時間、碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、離子豐度比；
[0010] (4)對樣品測定結(jié)果經(jīng)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫檢索，對符合鑒定依據(jù)的檢出農(nóng)藥進(jìn)行準(zhǔn) 確鑒定，從而獲得芽菜類蔬菜中的農(nóng)殘種類。
[0011]優(yōu)選的，通過對芽菜類蔬菜進(jìn)行前處理以獲得芽菜類蔬菜的測定待測樣品，所述 前處理方法包括以下程序：
[0012] 樣品制備:芽菜類蔬菜樣品經(jīng)0.5-5體積％醋酸乙腈勻漿提取，經(jīng)脫水和離心、濃 縮后，再經(jīng)Carbon/NH2柱凈化，乙腈+甲苯洗脫殘留農(nóng)藥，經(jīng)再濃縮、過濾后制成待測樣液a。
[0013] 本發(fā)明所具有的有益效果：
[0014] 1、本發(fā)明以高分辨碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、保留時間、離子豐度比等化合物信息為 識別標(biāo)準(zhǔn)，建立的708種農(nóng)藥偵測和確證技術(shù)方法，徹底改變了原有以化合物標(biāo)準(zhǔn)物為參比 的定性模式，是一種不需要標(biāo)準(zhǔn)物對照，快速、高通量、準(zhǔn)確可靠的農(nóng)藥殘留檢測新技術(shù)。
[0015] 2、本發(fā)明在不需標(biāo)準(zhǔn)物對照的前提下，實(shí)現(xiàn)了 708種農(nóng)藥殘留的定性偵測和確證， 可以大大節(jié)省購買標(biāo)準(zhǔn)物的成本，也更加環(huán)保、安全。
[0016] 3、本發(fā)明可在1小時內(nèi)完成708種農(nóng)藥偵測、定性與確證，與傳統(tǒng)檢測方法相比較， 可以提高工作效率數(shù)百倍。
[0017] 4、本發(fā)明能夠做到對芽菜類蔬菜樣品中708種農(nóng)藥殘留一次性提取凈化，一次進(jìn) 樣檢測，與傳統(tǒng)檢測方法相比較，可以節(jié)省檢測成本、提高工作效率數(shù)百倍。
[0018] 5、本發(fā)明可以測試的芽菜類蔬菜樣品中農(nóng)藥包括以下物質(zhì)中的一類或幾類:有機(jī) 磷類農(nóng)藥，氨基甲酸酯類農(nóng)藥，苯并咪唑類農(nóng)藥，磺酰脲類農(nóng)藥，煙堿類農(nóng)藥，除蟲菊酯類農(nóng) 藥及其他類型的農(nóng)藥及代謝物。
[0019] 6、本發(fā)明建立的GC-QT0F/MS偵測技術(shù)指標(biāo):掃描范圍50-600m/z;測定的精確質(zhì)量 可達(dá)O.OOOlm/ζ;質(zhì)量精度可控制在20ppm以內(nèi)；掃描速度在50-600m/z范圍為每秒5次。
[0020] 7、本發(fā)明提供的一種應(yīng)用氣相色譜四級桿飛行時間質(zhì)譜(GC-Q-T0F/MS)快速篩查 芽菜類蔬菜中708種農(nóng)藥殘留的高分辨質(zhì)譜偵測技術(shù)在7個農(nóng)藥殘留分析實(shí)驗(yàn)室得到了推 廣和應(yīng)用，經(jīng)過對30多個省市多個市售芽菜類蔬菜樣品的偵測驗(yàn)證，取得了重要的殘留偵 測數(shù)據(jù)。
[0021] 8、同時偵測的708種農(nóng)藥中，偵測靈敏度一律低于標(biāo)準(zhǔn)10微克/千克，滿足各國農(nóng) 藥殘留MRL水平篩查的要求。
[0022] 本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】部分予以詳細(xì)說明。
【附圖說明】
[0023]附圖是用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具 體實(shí)施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：
[0024] 圖1是石家莊地區(qū)市售綠豆芽樣品GC-Q-T0F/MS技術(shù)檢出頻次最高農(nóng)藥(毒死蜱） 結(jié)果示例。
[0025] 圖2是石家莊地區(qū)市售綠豆芽樣品GC-Q-T0F/MS技術(shù)檢出的頻次最高農(nóng)藥(毒死 蜱)的質(zhì)譜信息與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對的結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 以下對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體 實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0027]本發(fā)明提供了一種GC-Q-T0F/MS檢測芽菜類蔬菜中708種農(nóng)藥殘留的偵測方法，其 特征在于：建立708種農(nóng)藥T0F/MS數(shù)據(jù)庫，同時對芽菜類蔬菜中708種農(nóng)藥進(jìn)行定性偵測與 確證;該方法包括以下步驟：
[0028] (1)將農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品分別配制成l_5mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，設(shè)定條件下經(jīng)GC-QT0F/MS-級 模式全譜數(shù)據(jù)測定每種標(biāo)準(zhǔn)溶液的全譜數(shù)據(jù)，分別得到每種農(nóng)藥的化學(xué)分子式、保留時間、 碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、離子豐度比；
[0029] (2)將步驟(1)中獲得的一級模式全譜數(shù)據(jù)，經(jīng)核實(shí)后的碎片離子全掃描質(zhì)譜圖導(dǎo) 入PCDL軟件中，并與對應(yīng)的農(nóng)藥信息相關(guān)聯(lián)，建成T0F/MS精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫，用于數(shù)據(jù)檢索分 析；
[0030] (3)與步驟(1)相同的設(shè)定條件下芽菜類蔬菜的測定待測樣品中農(nóng)藥的全譜數(shù)據(jù)， 得到其含有的農(nóng)藥的化學(xué)分子式、保留時間、碎片離子精確質(zhì)量數(shù)、離子豐度比；
[0031] (4)對樣品測定結(jié)果經(jīng)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫檢索，對符合鑒定依據(jù)的檢出農(nóng)藥進(jìn)行準(zhǔn) 確鑒定，從而獲得芽菜類蔬菜中的農(nóng)殘種類。
[0032] 具體的，以稻豐散(Phenthoate)為例說明本發(fā)明的GC-QT0F/MS數(shù)據(jù)庫通過如下的 方法進(jìn)行建立：
[0033] 1)在數(shù)據(jù)采集界面，對稻豐散(Phenthoate)標(biāo)準(zhǔn)物（l_5mg/L)在指定色譜質(zhì)譜條 件下經(jīng)GC-QT0F/MS-級模式進(jìn)行碎片離子全掃描質(zhì)譜圖采集。
[0034]色譜條件為：色譜柱：VF-1701MS(30mX0.25mmX0.25um)(J&W Scientific， Folsom，CA);色譜柱升溫程序:30-50°C保持0 · 5-5min，然后以再以3-10°C/min升溫至200-280 °C，然后以 20-50 °C/min 升溫至 110-150 °C，再以 3-10°C/min 升溫至 200-280 °C，隨后以 5-15°C/min 升溫至 250-320 °C，保持 3-10mi