Hplc測(cè)定維生素e含量的色譜方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于維生素 E含量分析技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種HPLC測(cè)定維生素 E含量的色 譜方法，適用于含維生素 E的片劑、維生素 E類硬膠囊、維生素 E類粉劑、維生素 E類軟膠囊、維 生素 E類滴劑、維生素 E類丸劑、維生素 E類軟糖、維生素 E飲料，保健食品、藥品、普通食品或 預(yù)混料。
【背景技術(shù)】
[0002] 維生素 E(Vitamin E)是一種脂溶性維生素 ，其水解產(chǎn)物為生育酚，是最主要的抗 氧化劑之一。維生素 E能促進(jìn)生殖，提高生育能力，預(yù)防流產(chǎn)。其他功能方面還有，保護(hù)T淋巴 細(xì)胞、保護(hù)紅細(xì)胞、抗自由基氧化、抑制血小板聚集從而降低心肌梗死和腦梗塞的危險(xiǎn)性。 還對(duì)燒傷、凍傷、毛細(xì)血管出血、更年期綜合癥、美容等方面有很好的療效。還發(fā)現(xiàn)維生素 E 可抑制眼睛晶狀體內(nèi)的過氧化脂反應(yīng)，使末梢血管擴(kuò)張，改善血液循環(huán)。維生素 E可有效對(duì) 抗自由基，抑制過氧化脂質(zhì)生成，祛除黃褐斑;抑制酪氨酸酶的活性，從而減少黑色素生成。 酯化形式的維生素 E還能消除由紫外線、空氣污染等外界因素造成的過多的氧自由基，起到 延緩光老化、預(yù)防曬傷和抑制日曬紅斑生成等作用。
[0003] 在已知的維生素 E含量的測(cè)定方法中，主要是氣相色譜法，但氣相色譜法分析存在 很多局限性，首先檢測(cè)過程比較繁瑣，需內(nèi)標(biāo)物，其次很多固體制劑以及多組分制劑中VE含 量也很難得到很好的分離檢測(cè)。為了解決這一難題，本發(fā)明簡(jiǎn)化檢測(cè)過程，運(yùn)用高效液相色 譜法快速而準(zhǔn)確的分析維生素 E的含量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的要解決上述技術(shù)問題，通過建立合適的樣品處理過程以及色譜條 件，提供一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定維生素 E含量的HPLC法。
[0005] HPLC測(cè)定維生素 E含量的色譜方法，其特征在于:包括以下步驟： (1) 對(duì)照品溶液的配制，包括標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液配制和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制，其中標(biāo)準(zhǔn)貯備溶 液配制：分別精密稱取適量維生素 E對(duì)照品于棕色容量瓶中，立即用異丙醇溶解并稀釋成 10mg/ml的溶液； 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制:精密吸取1.0ml上述標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液于一個(gè)100ml棕色容量瓶中，立 即用異丙醇溶解并稀釋至刻度； (2) 樣品處理:精密稱取5mg維生素 E的樣品置于50ml棕色容量瓶中，加入15ml二甲亞 砜，最后加異丙醇的定容，兩者之間的體積比為1:3,即加大二甲亞砜和異丙醇的量，調(diào)整兩 者之間的體積比； (3) 液相色譜條件:色譜柱:C18柱；流動(dòng)相：甲醇:異丙醇:0.5mol/l醋酸；流速:0.8-1.2ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm;進(jìn)樣量：10-20μ1;柱溫：25-35°C。
[0006] 所述步驟(2)樣品處理過程中，加入15ml二甲亞砜，最后加異丙醇的定容，即兩者 之間的體積比為1:3,加大二甲亞砜和異丙醇的量，即調(diào)整兩者之間的體積比。
[0007] 所述步驟(2)樣品處理過程中，樣品溶液在超聲水浴機(jī)中超聲的溫度為55-65°C， 超聲的時(shí)間為20-30分鐘。
[0008] 所述步驟(2)樣品處理過程中，在離心機(jī)上進(jìn)行離心處理的參數(shù)為:4000-5000rmp 尚心20-30分鐘。
[0009] 所述步驟(3)液相色譜條件中，流動(dòng)相試劑甲醇：異丙醇:0.5mol/l醋酸的體積比 為96.1:3:0.9。
[0010] 所述步驟(3)液相色譜條件中，流速、波長(zhǎng)、進(jìn)樣量以及柱溫的選擇:（1)色譜柱:C18 柱；（2)流速:0·8-1 · 2ml/min，（3)檢測(cè)波長(zhǎng):280nm; (4)進(jìn)樣量：10-20μ1; (5)柱溫：25-35°C。
[0011] 本發(fā)明能替代傳統(tǒng)的GC測(cè)定維生素 E的方法，能通過對(duì)樣品處理過程的研究以及 色譜條件的選擇，提供了一種用HPLC法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確測(cè)定維生素 E含量的液相方法，推廣 應(yīng)用具有良好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
【附圖說明】
[0012]圖1為本發(fā)明的實(shí)施例一中標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定的結(jié)果。
[0013]圖2為本發(fā)明的實(shí)施例一中樣品測(cè)定的結(jié)果。
[0014]圖3為本發(fā)明的實(shí)施例二中標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定的結(jié)果。
[0015] 圖4為本發(fā)明的實(shí)施例二中樣品測(cè)定的結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制： HPLC測(cè)定維生素 E含量的色譜方法，其特征在于:包括以下步驟： (1) 對(duì)照品溶液的配制，包括標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液配制和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制，其中標(biāo)準(zhǔn)貯備溶 液配制：分別精密稱取適量維生素 E對(duì)照品于棕色容量瓶中，立即用異丙醇溶解并稀釋成 10mg/ml的溶液;標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制:精密吸取1.0ml上述標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液于一個(gè)100ml棕色容 量瓶中，立即用異丙醇溶解并稀釋至刻度； (2) 樣品處理:精密稱取5mg維生素 E的樣品置于50ml棕色容量瓶中，加15ml二甲亞砜， 于超聲水浴機(jī)中55-65°C超聲20-30分鐘，加入異丙醇定容，強(qiáng)烈振搖后，在離心機(jī)上4000-5000rmp離心20-30分鐘，取上清液，注入液相色譜儀； (3) 液相色譜條件： 色譜柱:Cis柱； 流動(dòng)相：甲醇:異丙醇:0· 5mol/l醋酸(96· 1:3:0·9); 流速:〇.8-1.〇1111/111；[11; 檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm; 進(jìn)樣量：10-20μ1; 柱溫：25-35°C; 所述步驟(2)樣品處理過程中，加入15ml二甲亞砜，最后加異丙醇的定容，兩者之間的 體積比為1:3,即加大二甲亞砜和異丙醇的量，調(diào)整兩者之間的體積比；所述步驟(2)樣品處 理過程中，樣品溶液在超聲水浴機(jī)中超聲的溫度為55-65°C，超聲的時(shí)間為20-30分鐘； 所述步驟(2)樣品處理過程中，在離心機(jī)上進(jìn)行離心處理的參數(shù)為:4000-5000rmp離心 20-30分鐘； 所述步驟（3)液相色譜條件中，流動(dòng)相試劑甲醇：異丙醇：0.5mol/l醋酸的體積比為 96.1:3:0.90
[0017] 所述步驟⑶液相色譜條件中，流速、波長(zhǎng)、進(jìn)樣量以及柱溫的選擇：⑴色譜柱:C18 柱；（2)流速:0·8-1 · 2ml/min，（3)檢測(cè)波長(zhǎng):280nm; (4)進(jìn)樣量：10-20μ1; (5)柱溫：25-35°C。
[0018] 具體實(shí)施時(shí)，本發(fā)明是以HPLC法測(cè)定維生素 E的含量，而且此HPLC法適用于任何劑 型(軟膠囊、片劑等）；以二甲基亞砜溶劑溶解樣品，本身就能很好的溶解脂溶性維生素 E，再 加以55-65°C超聲20-30分鐘，就能使樣品中VE-次性徹底溶解出來，再用異丙醇定容， 4000-5000rmp離心20-30分鐘即可;為了達(dá)到更好的分離，流動(dòng)相體積比定為甲醇:異丙醇： 0.5mol