一種泰地羅新含量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種泰地羅新含量檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]泰地羅新(Tildipirosin)是國(guó)外開(kāi)發(fā)的最新的動(dòng)物專用大環(huán)內(nèi)酯的半合成抗生 素，為泰樂(lè)菌素的衍生物，2011年3月8日，歐盟獸用藥品委員會(huì)(CVMP)準(zhǔn)許了英特威公司以 泰地羅新主要成分的無(wú)菌注射藥(商品名：Zuprero)市場(chǎng)許可證。隨后，將會(huì)在歐盟國(guó)家相 繼批準(zhǔn)上市。泰地羅新的CAS號(hào)為328898-40-4，分子式為，熔點(diǎn)為192°C，溶于極性 有機(jī)溶劑(如丙酮、甲醇等），水中微溶，結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] 目前，泰地羅新含量的檢測(cè)未見(jiàn)藥典收載方法，文獻(xiàn)報(bào)道了泰地羅新的殘留分析 研究，使用的檢測(cè)方法是固相萃取-質(zhì)譜連用(SPE-HPLC-MS/MS)，此方法的要求高，難度大， 在工業(yè)生產(chǎn)中進(jìn)行泰地羅新的質(zhì)量控制存在一定的難度。為了更好的控制該藥品的產(chǎn)品質(zhì) 量，建立反相色譜法測(cè)定泰地羅新的含量檢測(cè)方法。該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，經(jīng)驗(yàn)證適合獸藥 生產(chǎn)企業(yè)對(duì)泰地羅新的質(zhì)量控制與檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種方法簡(jiǎn)便，易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好的泰地羅新 含量檢測(cè)方法。
[0006] 為此，采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0007] -種泰地羅新含量檢測(cè)方法，其特征在于采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，然 后通過(guò)外標(biāo)法對(duì)泰地羅新含量進(jìn)行計(jì)算，其色譜條件為：
[0008] 色譜柱：以C8、C18為色譜柱，
[0009]檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器，
[0010] 流動(dòng)相：甲醇：乙腈:〇. 〇5mol/L磷酸二氫鉀溶液=30~40:20~30:30~40，
[0011] 流速:0.80~1.20ml/min，
[0012] 進(jìn)樣量：1〇 ~20ul，
[0013]檢測(cè)波長(zhǎng)：270 ~290nm，
[0014] 柱溫：30 ~40°C。
[0015] 優(yōu)選的，所述流動(dòng)相：甲醇：乙腈:0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液=40 : 20 :40，流速： 1 .Oml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm;進(jìn)樣量20ul;柱溫：30~40°C。
[0016] 所述檢測(cè)溶液濃度為0. lmg/ml-3.0mg/ml。
[0017] 本發(fā)明采用高效液色譜法對(duì)泰地羅新進(jìn)行含量測(cè)定，然后通過(guò)外標(biāo)法對(duì)樣品中泰 地羅新含量進(jìn)行定量，所述方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，靈敏度高，當(dāng)泰地羅新在〇. lmg/ml- 3. Omg/ml之間時(shí)，均有較好的線性關(guān)系，其線性相關(guān)系數(shù)為0.9995。經(jīng)驗(yàn)證適合獸藥生產(chǎn)企 業(yè)對(duì)泰地羅新的質(zhì)量控制與檢測(cè)。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1為泰地羅新的線性關(guān)系圖與回歸方程。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好的理解發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施方法對(duì) 本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0020] 實(shí)施例1
[0021 ]泰地羅新樣品的制備：
[0022]標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備:稱取泰地羅新標(biāo)準(zhǔn)品50mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加流 動(dòng)相溶解并定容至刻度，搖勻。用lml注射器取溶液經(jīng)0.45um的有機(jī)濾頭過(guò)濾，得標(biāo)準(zhǔn)品溶 液。
[0023]供試品溶液的制備:稱取泰地羅新樣品50mg，精密稱定，置于50ml容量瓶中，加流 動(dòng)相適量，溶解后定容至刻度，搖勻。用lml注射器取溶液經(jīng)0.45um的有機(jī)濾頭過(guò)濾，得供試 品溶液。
[0024]標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液各制得5份。
[0025]色譜分析條件：
[0026] 島津LC-20A液相色譜儀，Waters C18色譜柱（250*4.6,5um);
[0027] 流動(dòng)相：甲醇：乙腈:0 · 05mog/L磷酸二氫鉀溶液(pH7 · 00) = (40:20:40);
[0028] 流速：1 .Oml/min;
[0029] 檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm;
[0030] 進(jìn)樣量:20ul，
[0031] 檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器；
[0032]柱溫箱：35。(3。
[0033]按上述色譜條件，對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)品和供試品分別進(jìn)樣，如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)品溶液5個(gè)樣 品分別進(jìn)樣所得峰面積為11652175，RSD為0.11%;供試品溶液的5個(gè)樣品所得峰面積平均 值為 10246653，RSD為0 · 08%。
[0034]根據(jù)公式：
[0035] 泰地羅新的含量:8=4樣財(cái)示/^標(biāo)Μ樣*100%。
[0036] 采用外標(biāo)法將標(biāo)準(zhǔn)品和供試品平均代入即可得供試品泰地羅新的含量為 98.12%〇
[0037] 本發(fā)明實(shí)施例1所述檢測(cè)方法的方法學(xué)考察：
[0038] (1)精密度實(shí)驗(yàn)
[0039]稱取同一泰地羅新樣品，進(jìn)行6次重復(fù)試驗(yàn)，峰面積表1:
[0040] 表1泰地羅新重復(fù)試驗(yàn)的面積
[0041]
[0042]峰面積RSD為0.05%，結(jié)果表明，本方法檢測(cè)泰地羅新含量精密度高，重現(xiàn)性好。 [0043] (2)線性關(guān)系考察
[0044]根據(jù)發(fā)明所述方法，用50ml的容量瓶配制濃度為10mg/ml的儲(chǔ)備液，加流動(dòng)相分別 稀釋成〇 · lmg/ml、0 · 2mg/ml、0 · 5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml、3mg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本方法，對(duì) 樣品濃度(X)和峰面積(Y)進(jìn)行數(shù)據(jù)回歸分析，線性回歸方程為Y= 1.3867 X 107-46802，線 性關(guān)系如圖1所示，R = 0.9995,結(jié)果表明泰地羅新在0. lmg/ml-3.0mg/ml濃度范圍內(nèi)，峰面 積和濃度呈良好的線性關(guān)系。
[0045] (3)加樣回收實(shí)驗(yàn)
[0046]準(zhǔn)確稱取已知含量的泰地羅新適量，再分別精密加入一定量的泰地羅新樣品 80 %，100 %，120 %，使供試品溶液中的泰地羅新濃度在泰地羅新標(biāo)準(zhǔn)曲線的高、中、低區(qū)域 各3份，按照本發(fā)明項(xiàng)下的操作，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.2%，RSD為 0.58 %，表明該方法加樣回收率好。
[0047]綜上表明本發(fā)明所述含量檢測(cè)方法穩(wěn)定性好，精密度高，適合泰地羅新的含量測(cè) 定。
[0048] 實(shí)施例2
[0049] 樣品及標(biāo)準(zhǔn)品配制同實(shí)施例1。
[0050] 色譜分析條件：
[0051 ]島津LC-20A液相色譜儀，Waters C8色譜柱（150*4.6，3.5um);
[0052] 流動(dòng)相：甲醇：乙腈:0 · 05mog/L磷酸二氫鉀溶液(pH6 · 50) = (40:25:35);
[0053] 流速:0.8ml/min;
[0054] 檢測(cè)波長(zhǎng)：290nm;
[0055] 進(jìn)樣量：20ul;
[0056] 檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器；
[0057]柱溫箱：30。(3。
[0058]按上述色譜條件，對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)品和供試品分別進(jìn)樣，如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)品溶液5個(gè)樣 品分別進(jìn)樣所得峰面積為12545262，RSD為0.21 % ;供試品溶液的5個(gè)樣品所得峰面積平均 值為 10201259，RSD為0.22%。
[0059]根據(jù)公式：
[0060] 泰地羅新的含量:8=4樣財(cái)示/^標(biāo)Μ樣*100%。
[0061]采用外標(biāo)法將標(biāo)準(zhǔn)品和供試品平均代入即可得供試品泰地羅新的含量為 98.02%〇
[0062] 實(shí)施例3
[0063] 樣品及標(biāo)準(zhǔn)品配制同實(shí)施例1。
[0064] 色譜分析條件：島津LC-20A液相色譜儀，Waters C8色譜柱（150*4.6，3.5um);
[0065] 流動(dòng)相：甲醇：乙腈:0 · 05mog/L磷酸二氫鉀溶液(pH7 · 50) = (40:30:40);
[0066] 流速：1 · 2ml/min;
[0067] 檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm;
[0068] 進(jìn)樣量：10ul;
[0069] 檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器；
[0070] 柱溫箱:40。(3。
[0071 ]按上述色譜條件，對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)品和供試品分別進(jìn)樣，如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)品溶液5個(gè)樣 品分別進(jìn)樣所得峰面積12135495為，RSD為0.10%;供試品溶液的5個(gè)樣品所得峰面積平均 值為 10594411，RSD 為 0.09%。
[0072]根據(jù)公式：
[0073] 泰地羅新的含量:&=六樣財(cái)示/^標(biāo)Μ樣*100%。
[0074] 采用外標(biāo)法將標(biāo)準(zhǔn)品和供試品平均代入即可得供試品泰地羅新的含量為 98.18%〇
[0075] 實(shí)施例4
[0076] 樣品及標(biāo)準(zhǔn)品配制同實(shí)施例1。
[0077] 色譜分析條件：島津LC-20A液相色譜儀，Waters C18色譜柱(250*4.6,5um);
[0078] 流動(dòng)相：甲醇：乙腈:0 · 05mog/L磷酸二氫鉀溶液(pH7 · 00) = (40:22:38);
[0079] 流速：1 · lml/min;
[0080] 檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm;
[0081] 進(jìn)樣量：10ul;
[0082] 檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器；
[0083] 柱溫箱:30°C。
[0084] 按上述色譜條件，對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)品和供試品分別進(jìn)樣，如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)品溶液5個(gè)樣 品分別進(jìn)樣所得峰面積12654512為，RSD為0.30%;供試品溶液的5個(gè)樣品所得峰面積平均 值為 10564689，RSD為0 · 17%。
[0085]根據(jù)公式：
[0086] 泰地羅新的含量:3=六樣財(cái)示/^標(biāo)Μ樣*100%。
[0087] 采用外標(biāo)法將標(biāo)準(zhǔn)品和供試品平均代入即可得供試品泰地羅新的含量為 97.89%〇
[0088] 上述參照【具體實(shí)施方式】對(duì)該一種泰地羅新含量檢測(cè)方法進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說(shuō)明 性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個(gè)實(shí)施例。因此在不脫離本發(fā)明總體 構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種泰地羅新含量檢測(cè)方法，其特征在于采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，然后 通過(guò)外標(biāo)法對(duì)泰地羅新含量進(jìn)行計(jì)算，其色譜條件為： 色譜柱：以C8、C18為色譜柱， 檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器， 流動(dòng)相：甲醇：乙腈:0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液=30~40:20~30:30~40， 流速:0.80~1.20ml/min， 進(jìn)樣量：1〇~20ul， 檢測(cè)波長(zhǎng):270~290nm， 柱溫：30~40°C。2. 按照權(quán)利要求1所述的泰地羅新含量檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相：甲醇：乙腈： 0 · 05mol/L磷酸二氫鉀溶液=40:20:40，流速：1 ·Oml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):280nm;進(jìn)樣量20ul;柱 溫：30 ~40°C。3.按照權(quán)利要求1所述的泰地羅新含量檢測(cè)方法，其特征在于檢測(cè)溶液濃度為O.lmg/ ml_3·Omg/ml〇
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種泰地羅新含量檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法是采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，然后通過(guò)外標(biāo)法對(duì)泰地羅新含量進(jìn)行計(jì)算。本發(fā)明采用高效液色譜法對(duì)泰地羅新進(jìn)行含量測(cè)定，然后通過(guò)外標(biāo)法對(duì)樣品中泰地羅新含量進(jìn)行定量，所述方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，靈敏度高，當(dāng)泰地羅新在0.1mg/ml-3.0mg/ml之間時(shí)，均有較好的線性關(guān)系，其線性相關(guān)系數(shù)為0.9995。經(jīng)驗(yàn)證適合獸藥生產(chǎn)企業(yè)對(duì)泰地羅新的質(zhì)量控制與檢測(cè)。
【IPC分類】G01N30/02
【公開(kāi)號(hào)】CN105467024
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510788310
【發(fā)明人】陳紅麗
【申請(qǐng)人】寧夏泰瑞制藥股份有限公司
【公開(kāi)日】2016年4月6日
【申請(qǐng)日】2015年11月17日