異硫氰酸熒光素，4°C下振蕩混合1小時(shí)，進(jìn)行熒光標(biāo)記；標(biāo)記完成后，在外加磁場(chǎng)的輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，除去游離的異硫氰酸熒光素；采用1M醋酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至4.5，4°C下振蕩混合10分鐘，回收標(biāo)記抗體。
[0021]實(shí)施例3
[0022]取50mg待標(biāo)記的抗體溶于50mL孵育緩沖液(生理鹽水和0.5M pH 9的碳酸鈉緩沖液的體積比為9:1)，配制抗體溶液，與1.0g偶聯(lián)有4-巰乙基吡啶的磁性微球振蕩混合，4°C下，孵育8小時(shí)；測(cè)定吸附前后溶液中抗體的濃度，計(jì)算抗體吸附量為35mg/g，在外加磁場(chǎng)輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，洗去未吸附的抗體以及其他雜質(zhì)；加入700mg的異硫氰酸熒光素，4°C下振蕩混合1小時(shí)，進(jìn)行熒光標(biāo)記；標(biāo)記完成后，在外加磁場(chǎng)的輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，除去游離的異硫氰酸熒光素；采用1M醋酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至5.5，4°C下振蕩混合30分鐘，回收標(biāo)記抗體。
[0023]實(shí)施例4
[0024]取50mg待標(biāo)記的抗體溶于50mL孵育緩沖液(生理鹽水和0.5M pH 7.5的碳酸鈉緩沖液的體積比為9: 1)，配制抗體溶液，與1.0g偶聯(lián)有4-巰乙基吡啶的磁性微球振蕩混合，4°C下，孵育6小時(shí)；測(cè)定吸附前后溶液中抗體的濃度，計(jì)算抗體吸附量為46mg/g，在外加磁場(chǎng)輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，洗去未吸附的抗體以及其他雜質(zhì)；加入4.6mg的異硫氰酸熒光素，4°C下振蕩混合8小時(shí)，進(jìn)行熒光標(biāo)記；標(biāo)記完成后，在外加磁場(chǎng)的輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，除去游離的異硫氰酸熒光素；采用1M醋酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至4.5，4°C下振蕩混合20分鐘，回收標(biāo)記抗體。
[0025]實(shí)施例5
[0026]取50mg待標(biāo)記的抗體溶于50mL孵育緩沖液(生理鹽水和0.5M pH 7的碳酸鈉緩沖液的體積比為9:1)，配制抗體溶液，與1.0g偶聯(lián)有氨基咪唑的磁性微球振蕩混合，4°C下，孵育0.5小時(shí)；測(cè)定吸附前后溶液中抗體的濃度，計(jì)算抗體吸附量為48mg/g，在外加磁場(chǎng)輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，洗去未吸附的抗體以及其他雜質(zhì)；加入0.48mg的異硫氰酸熒光素，4°C下振蕩混合8小時(shí)，進(jìn)行熒光標(biāo)記；標(biāo)記完成后，在外加磁場(chǎng)的輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，除去游離的異硫氰酸熒光素；采用1M醋酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至4，4°C下振蕩混合5分鐘，回收標(biāo)記抗體。
[0027]實(shí)施例6
[0028]取50mg待標(biāo)記的抗體溶于50mL孵育緩沖液(生理鹽水和0.5M pH 9的碳酸鈉緩沖液的體積比為9:1)，配制抗體溶液，與1.0g偶聯(lián)有氨基咪唑的磁性微球振蕩混合，4°C下，孵育8小時(shí)；測(cè)定吸附前后溶液中抗體的濃度，計(jì)算抗體吸附量為30mg/g，在外加磁場(chǎng)輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，洗去未吸附的抗體以及其他雜質(zhì)；加入600mg的異硫氰酸熒光素，4°C下振蕩混合1小時(shí)，進(jìn)行熒光標(biāo)記；標(biāo)記完成后，在外加磁場(chǎng)的輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，除去游離的異硫氰酸熒光素；采用1M醋酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至5.5，4°C下振蕩混合30分鐘，回收標(biāo)記抗體。
[0029]實(shí)施例7
[0030]取50mg待標(biāo)記的抗體溶于50mL孵育緩沖液(生理鹽水和0.5M pH 8的碳酸鈉緩沖液的體積比為9:1)，配制抗體溶液，與1.0g偶聯(lián)有氨基咪唑的磁性微球振蕩混合，4°C下，孵育2小時(shí)；測(cè)定吸附前后溶液中抗體的濃度，計(jì)算抗體吸附量為45mg/g，在外加磁場(chǎng)輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，洗去未吸附的抗體以及其他雜質(zhì)；加入22.5mg的異硫氰酸熒光素，4°C下振蕩混合6小時(shí)，進(jìn)行熒光標(biāo)記；標(biāo)記完成后，在外加磁場(chǎng)的輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，除去游離的異硫氰酸熒光素；采用1M醋酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至
4.5，4°C下振蕩混合15分鐘，回收標(biāo)記抗體。
[0031]實(shí)施例8
[0032]取50mg待標(biāo)記的抗體溶于50mL孵育緩沖液(生理鹽水和0.5M pH 9的碳酸鈉緩沖液的體積比為9:1)，配制抗體溶液，與1.0g偶聯(lián)有氨基咪唑的磁性微球振蕩混合，4°C下，孵育6小時(shí)；測(cè)定吸附前后溶液中抗體的濃度，計(jì)算抗體吸附量為30mg/g，在外加磁場(chǎng)輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，洗去未吸附的抗體以及其他雜質(zhì)；加入600mg的異硫氰酸熒光素，4°C下振蕩混合2小時(shí)，進(jìn)行熒光標(biāo)記；標(biāo)記完成后，在外加磁場(chǎng)的輔助下，用孵育緩沖液洗滌微球3次，除去游離的異硫氰酸熒光素；采用1M醋酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至
5.5，4°C下振蕩混合25分鐘，回收標(biāo)記抗體。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種基于疏水性電荷誘導(dǎo)微球的抗體熒光標(biāo)記新方法，其特征在于包括如下步驟: 1)取適量待標(biāo)記的抗體溶于由生理鹽水和0.5M pH 7-9的碳酸鈉緩沖液(9: 1)構(gòu)成的孵育緩沖液中，與具有疏水性電荷誘導(dǎo)效應(yīng)的磁性微球振蕩混合，4°C下，孵育0.5-8小時(shí)； 2)測(cè)定吸附前后溶液中抗體的濃度，計(jì)算抗體吸附量，在外加磁場(chǎng)輔助下，用孵育緩沖液洗滌3次，洗去未吸附的抗體以及其他雜質(zhì)； 3)根據(jù)計(jì)算的抗體吸附量，按照每毫克抗體加入0.01-20mg的異硫氰酸熒光素，將異硫氰酸熒光素緩慢添加至裝有磁性微球的三角瓶中，4°C下振蕩混合1-8小時(shí)，進(jìn)行熒光標(biāo)記； 4)標(biāo)記完成后，在外加磁場(chǎng)的輔助下，用孵育緩沖液洗滌3次，除去游離的異硫氰酸熒光素; 5)采用1M醋酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至4.0-5.5，4°C下振蕩混合5-30分鐘，回收標(biāo)記抗體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于疏水性電荷誘導(dǎo)微球的抗體熒光標(biāo)記新方法，其特征在于所述的具有疏水性電荷誘導(dǎo)效應(yīng)的磁性微球?yàn)榕悸?lián)有4-巰乙基吡啶或氨基咪唑的磁性瓊脂糖微球。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于疏水性電荷誘導(dǎo)微球的抗體熒光標(biāo)記新方法，其特征在于所述的孵育緩沖液為生理鹽水和0.5M pH 7-9的碳酸鈉緩沖液按照質(zhì)量比9: 1的比例混合的緩沖液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于疏水性電荷誘導(dǎo)微球的抗體熒光標(biāo)記新方法，其特征在于所述的洗脫pH值為4.0-5.5。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于疏水性電荷誘導(dǎo)磁性微球的抗體熒光標(biāo)記新方法。具體步驟如下：1)取適量待標(biāo)記的抗體溶于孵育緩沖液，并加入疏水性電荷誘導(dǎo)磁性微球進(jìn)行抗體的吸附。2)在外加磁場(chǎng)輔助下，用孵育緩沖液洗去未吸附的抗體，計(jì)算抗體的吸附量。3)根據(jù)抗體的吸附量，加入適量的異硫氰酸熒光素，將異硫氰酸熒光素與上述微球振蕩混合，進(jìn)行標(biāo)記。4)標(biāo)記完成后，在外加磁場(chǎng)的輔助下洗滌除去未反應(yīng)的異硫氰酸熒光素，調(diào)節(jié)溶液pH至酸性解吸同收已標(biāo)記的抗體。本發(fā)明所開發(fā)方法的特色在于設(shè)計(jì)了一種高效的抗體熒光標(biāo)記的新方法。
【IPC分類】G01N33/533
【公開號(hào)】CN105301230
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510866006
【發(fā)明人】顧佳黎, 童紅飛
【申請(qǐng)人】湖州師范學(xué)院
【公開日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2015年11月25日