一種枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 枸櫞酸莫沙必利（Mosapride Citrate,商品名為Gasmotin)是由大日本制藥株式 會(huì)社開發(fā)的新型胃動(dòng)力藥物，它是強(qiáng)效選擇性5-HT4受體激動(dòng)劑，臨床用于治療慢性胃炎、 功能性消化不良、反流性食管炎及手術(shù)伴隨的一系列胃腸道癥狀的緩解。其于1998年12 月首次在日本上市，中文化學(xué)名稱：4-氨基-5-氯-2-乙氧基-N- {[4- (4-氟芐基）-2-嗎 啉基]甲基}苯甲酰胺枸櫞酸鹽；分子式=C21H25ClFN 3O3 · C6H8O7 · 2H20,分子量：650. 05,其 結(jié)構(gòu)式為：
[0004] 莫沙必利是強(qiáng)效選擇性5-HT4受體激動(dòng)劑，通過興奮肌間神經(jīng)叢的5-HT4受體，刺 激神經(jīng)末梢乙酰膽堿釋放，從而增強(qiáng)胃腸運(yùn)動(dòng)，但不影響胃酸分泌。其與類似結(jié)構(gòu)的胃動(dòng)力 藥物相比，副作用大大減少，其與中樞神經(jīng)原突觸膜上的多巴胺D 2, α ρδ-ΗΤΙ，和5-HT2受 體無親和力，因而沒有這些受體阻滯所引起的錐體外系綜合征。與其同為苯甲酰胺類胃動(dòng) 力藥物的西沙必利（cisapride)在高敏病人中可出現(xiàn)Q-T間期延長或?qū)е录舛伺まD(zhuǎn)性室 性心動(dòng)過速，但莫沙必利沒有與西沙必利相似的導(dǎo)致尖端扭轉(zhuǎn)性室性心動(dòng)過速的電生理特 性。同時(shí)，其選擇性作用于上消化道，對結(jié)腸運(yùn)動(dòng)無影響，可減少由于結(jié)腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)導(dǎo)致的 腹痛、排便次數(shù)增加、腹瀉和軟便等副作用，另外，電生理研究表明，其無延長離體心室肌和 蒲氏纖維動(dòng)作電位時(shí)程的作用，安全性更好。目前，國內(nèi)已有多家企業(yè)申報(bào)和生產(chǎn)該藥品。
[0005] 藥物的雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用或者影響藥物的穩(wěn)定性、療效，甚至對 人體的健康有害的物質(zhì)，在藥物生產(chǎn)過程中，雜質(zhì)的主要來源包括兩個(gè)方面：1、由于所用原 料不純或者原料反應(yīng)過程中反應(yīng)未完全，以及反應(yīng)的中間產(chǎn)物、反應(yīng)的副產(chǎn)物等造成藥品 原料中雜質(zhì)的存在；2、由于原料生產(chǎn)過程中反應(yīng)的溶媒、催化劑等溶劑的殘留所造成的藥 物的雜質(zhì)。而藥物的雜質(zhì)與藥品安全性的關(guān)系是一個(gè)受很多因素影響的復(fù)雜的關(guān)系，通常 藥物中的雜質(zhì)大多具有潛在的生物活性，有的甚至與藥物相互作用從而影響藥物的效能和 安全性，嚴(yán)重的可能產(chǎn)生毒性作用。藥物中的所有雜質(zhì)都會(huì)不同程度地影響藥物的穩(wěn)定性 和安全性，因此在藥物的研究、生產(chǎn)、貯存和臨床應(yīng)用等方面，必須保持藥物的純度，降低藥 物的雜質(zhì)，這樣才能保證藥物的有效性和安全性，藥物中的雜質(zhì)是影響藥物純度的主要因 素，如藥物中含有超過限量的雜質(zhì)，就有可能使理化常數(shù)變動(dòng)，外觀性狀產(chǎn)生變異，并影響 藥物的穩(wěn)定性；雜質(zhì)增多也必然使藥物的含量偏低或活性降低，毒副作用顯著增加。因此， 藥物的有關(guān)物質(zhì)檢查是控制藥物純度，保證藥物質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
[0006] 因?yàn)椴煌幬锏男再|(zhì)、生產(chǎn)方式和工藝條件不同，引入雜質(zhì)也隨著藥物的不同而 不同，由于特殊雜質(zhì)多種多樣，所以檢查方法和檢測條件也千差萬別，目前常用的有關(guān)物質(zhì) 檢查方法有：①物理分析法：根據(jù)藥物與雜質(zhì)在嗅、味、揮發(fā)性、顏色、溶解性及旋光性等方 面的差異，利用灰度檢查、旋光度檢查等方法檢測有關(guān)物質(zhì)是否符合雜質(zhì)限量規(guī)定。②化學(xué) 反應(yīng)法：一般包括容量分析法、重量分析法、比色法和比濁法等方法。③化學(xué)分析法：常用 的有紫外分光光度法、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法（CzE)、高效毛細(xì)管電泳法（HPCE)等。④色譜法： 包括薄層色譜層析法（TLC)、液相色譜法（PLC)、高效液相色譜法（HPLC)、超高效液相色譜 法（UPLC)、氣相色譜法（GC)等。其中色譜法是目前最常用也是最有效的藥物有關(guān)分析方 法，具有靈敏度高、準(zhǔn)確性好、簡單、易行、快速高效等特點(diǎn)，越來越多的被各國藥典用于控 制藥物的有關(guān)物質(zhì)，而色譜法中TLC通常只能作為一種半定量方法，同時(shí)由于靈敏度受操 作條件影響較大，所以有時(shí)難以滿足快速、準(zhǔn)確分析的需要。而高效液相色譜法（HPLC)作 為一種比較成熟的方法因其分離效能高、專屬性強(qiáng)和檢測靈敏等特點(diǎn)已被廣泛應(yīng)用于藥物 的雜質(zhì)檢查中。
[0007] 目前對于枸櫞酸莫沙必利的高效液相色譜檢測方法有一定報(bào)道，但是其僅能檢測 出部分雜質(zhì)，存在雜質(zhì)檢測不全的現(xiàn)象，且部分雜質(zhì)分離度不高，無法實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確檢測。因此 尋求一種能夠有效分離且盡可能多的檢出莫沙必利中有關(guān)物質(zhì)，對于枸櫞酸莫沙必利的進(jìn) 一步質(zhì)量控制具有十分重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種分離度好、檢出有關(guān)物質(zhì)多、檢測效率高的 枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其包含以下步驟：
[0009] 取枸櫞酸莫沙必利供試品溶液進(jìn)樣，按照液相色譜條件進(jìn)行檢測，其中所述高效 液相色譜測定條件為：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為體積比為75 :25 的磷酸二氫鈉溶液/乙腈的混合溶液，流動(dòng)相B為體積比為20:80磷酸二氫鈉溶液/乙腈 的混合溶液，采用梯度洗脫。
[0010] 本發(fā)明所提供枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其中所述梯度洗脫程序?yàn)椋?br>[0012] 本發(fā)明所提供枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其中所述高效液相色譜測定 條件中，磷酸二氫鈉溶液的濃度為〇· 001-0. lmol/L，優(yōu)選為0· 01-0. 05mol/L，進(jìn)一步優(yōu)選 為 0·01mol/L。
[0013] 本發(fā)明所提供枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其中所述高效液相色譜測定 條件中，磷酸二氫鈉溶液的pH值為2. 0-6. 0,優(yōu)選為3. 5 ;磷酸二氫鈉溶液的pH調(diào)節(jié)試劑優(yōu) 選為H3P04 ;
[0014] 本發(fā)明所提供枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其中所述高效液相色譜測 定條件中，檢測波長為210~360nm，優(yōu)選為220nm;柱溫：15-40°c，優(yōu)選為35°C ;流速： 0· 5-1. 5ml/min,優(yōu)選為 lml/min〇
[0015] 本發(fā)明所提供枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其中所述高效液相色譜測 定條件中，流動(dòng)相A、B中還含有三乙胺，所述三乙胺的體積濃度為0.01 % -1%，優(yōu)選為 0. 1% -0. 3%，進(jìn)一步優(yōu)選為 0. 1%。
[0016] 本發(fā)明所提供枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其中所述供試品溶液的制備 方法為，取適量枸櫞酸莫沙必利，精密稱定，加流動(dòng)相B溶解并稀釋制成每1ml約含Img的 溶液即得。
[0017] 本發(fā)明進(jìn)一步提供一種枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其包含以下步驟：
[0018] (a)供試品溶液的制備：
[0019] 取適量枸櫞酸莫沙必利，精密稱定，加流動(dòng)相B溶解并稀釋制成每1ml約含Img的 溶液即得；(b)色譜條件：色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A 為體積比為75 :25的磷酸二氫鈉溶液/乙腈的混合溶液，流動(dòng)相B為體積比為20:80的磷 酸二氫鈉溶液/乙腈的混合溶液，柱溫為350°C,流速為lml/min,檢測波長為220nm,所述梯 度洗脫程序?yàn)椋?br>[0021 ] 其中，所述流動(dòng)相A和流動(dòng)相B中的磷酸二氫鈉溶液中含有體積濃度為0. 1 %的三 乙胺，并用磷酸調(diào)PH值至3. 5。
[0022] (c)測定：吸取供試品溶液注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定。
[0023] 本發(fā)明中述梯度洗脫程序?yàn)椋?br>[0024] 0-30min時(shí)，流動(dòng)相A為100 %，流動(dòng)相B為0 % ;
[0025] 30-100min時(shí)，流動(dòng)相A從100 %到20 %，流動(dòng)相B從0 %到80 %。
[0026] 本申請發(fā)明人詳細(xì)考察了枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)檢測時(shí)的高效液相色譜檢測 條件，當(dāng)采用磷酸二氫鈉溶液：乙腈體積比為75 :25的混合溶液為流動(dòng)相A，磷酸二氫鈉 溶液：乙腈體積比為20:80的混合溶液為流動(dòng)相B，且采用上述梯度洗脫條件時(shí)，磷酸二 氫鈉溶液濃度大于〇. IM或小于0.0 OlM時(shí)，梯度洗脫基線波動(dòng)較大，當(dāng)磷酸二氫鈉溶液為 0. 001-0.1 M時(shí)，基線較為平穩(wěn)，當(dāng)磷酸二氫鈉溶液為0. 01-0. 03M時(shí)，基線較更加平穩(wěn)，且 峰形較好，當(dāng)磷酸二氫鈉溶液濃度為〇. OlM時(shí)，峰形優(yōu)異，分離度最好；對磷酸二氫鈉溶液 的PH值進(jìn)行考察發(fā)現(xiàn)，當(dāng)PH大于6. 0時(shí)，峰形不對稱，當(dāng)PH小于2. 0時(shí)，色譜柱耐受性 差、柱效下降，峰形不對稱PH為2. 0-6. 0時(shí)，峰形較好，PH為3. 5時(shí)，峰形最為對稱；當(dāng)向流 動(dòng)相中加入三乙胺〇. 01 %~1 %時(shí)，能夠有效改善檢測拖尾的現(xiàn)象，其中當(dāng)三乙胺濃度為 0. 1% -0. 3 %時(shí)，效果較優(yōu)，當(dāng)三乙胺濃度為0.1 %時(shí)，改善拖尾效果最好。通過考察二極管 陣列檢測器（DAD檢測器檢測）檢測枸櫞酸莫沙必利有關(guān)物質(zhì)的吸收