三結(jié)構(gòu)域蛋白8（trim8）抑制劑在抑制心肌肥厚中的功能及應(yīng)用
【專利說明】H結(jié)構(gòu)域蛋白8 (TRIM8)抑制劑在抑制心肌肥厚中的功能 及應(yīng)用
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明屬于基因的功能與應(yīng)用領(lǐng)域，特別設(shè)及一種S結(jié)構(gòu)域蛋白8 (TRIMS)抑制 劑在抑制屯、肌肥厚中的功能及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003] 屯、肌肥厚是屯、臟為適應(yīng)各種長期過度的壓力和/或容積負(fù)荷刺激而產(chǎn)生的屯、肌 細(xì)胞體積增大，重量增加。屯、肌肥厚中屯、肌細(xì)胞由于蛋白合成增加，引起體積增大、直徑或 長度增加，肌節(jié)數(shù)量增多。同時，屯、肌細(xì)胞表型也由成熟型向胚胎型轉(zhuǎn)化，并伴隨屯、肌間質(zhì) 細(xì)胞增殖和屯、臟細(xì)胞外基質(zhì)改建，引起屯、肌重構(gòu)[1，2]。臨床上許多屯、臟疾病可W引起屯、 肌肥厚，常見病因包括原發(fā)性或繼發(fā)性高血壓病、屯、臟瓣膜病、冠屯、病，W及先天性屯、臟病 等巧]。盡管W屯、肌細(xì)胞增大、屯、肌收縮力增強(qiáng)為特點的早期屯、肌肥厚表現(xiàn)為一種維持正常 屯、輸出量的代償機(jī)制，但是由于長期屯、肌肥厚會增加屯、肌耗氧量，引起屯、肌缺血和屯、肌細(xì) 胞調(diào)亡，同時屯、肌肥厚降低屯、室順應(yīng)性，導(dǎo)致代償機(jī)制失衡[4]。研究表明隨著屯、肌肥厚重 構(gòu)的進(jìn)展，缺血性屯、臟病、惡性屯、律失常、充血性屯、衰、巧死等嚴(yán)重屯、血管事件的發(fā)生率增 加6~10倍[5]。
[0004] 在細(xì)胞和分子水平上，屯、肌細(xì)胞肥大過程主要涵蓋3個環(huán)節(jié)：胞外肥大信號刺激、 胞內(nèi)信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)及核內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄活化[6]。不同的肥大信號誘發(fā)特異的基因表達(dá)模式， 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在運一過程中扮演重要角色[7]。目前，明確與屯、肌肥厚相關(guān)的信號通路主 要包括：巧調(diào)素依賴性蛋白激酶（CaMK)、巧調(diào)神經(jīng)憐酸酶（calcineurin)、絲裂原活化蛋 白激酶（MAPK)、憐酸脂酷肌醇-3激酶（PI3K) /絲-蘇氨酸蛋白激酶(Akt)和兩面神激酶 (JAKV信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。其中MAPK由細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶 (E服s)，c-junN末端激酶9JNKS)和P38-MAPKS個亞家族組成巧]。PI3K活化后激活下游 重要祀點Akt，Akt可進(jìn)一步作用于下游底物引起雷帕霉素祀體蛋白（mTOR)和糖原合成激 酶（GSK3P)的激活W及化xO的失活巧]。盡管目前對于屯、肌肥厚發(fā)生發(fā)展的病理生理機(jī) 制有了初步認(rèn)識，但是其具體分子的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)仍未完全明確，臨床防治手段仍然十分有限。
[0005]S結(jié)構(gòu)域蛋白8(TRIM(Tripartitemotif) 8)屬于環(huán)指蛋白家族的TRIM亞家 族成員，其編碼基因定位于10號染色體長臂2區(qū)4帶3亞帶（10q24. 3) [10]。TRIMS蛋白 由551個氨基酸組成，在人體及小鼠各組織器官中廣泛表達(dá)，其中屯、臟表達(dá)水平較高[11]。 TRIMS從N端到C端具有5個結(jié)構(gòu)域，分別是RING結(jié)構(gòu)域、B-boxl結(jié)構(gòu)域、B-box2結(jié)構(gòu)域、 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域和具有細(xì)胞核定位功能的C末端[12]。研究發(fā)現(xiàn)，TRIMS可W通過調(diào)控 S0CS1、TAK1、PIAS3和P53等關(guān)鍵信號通路分子，參與包括固有免疫反應(yīng)和腫瘤發(fā)生在內(nèi)的 多種病理生理過程[11-15]，但目前仍沒有TRIMS在屯、血管系統(tǒng)疾病中作用的相關(guān)研究報 道。
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為解決上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，本發(fā)明的目的在于確定TRIMS的表達(dá)和屯、肌 肥厚的相互關(guān)系，提供一種TRIMS作為藥物祀標(biāo)在篩選保護(hù)屯、臟功能和/或預(yù)防、緩解和/ 治療屯、肌肥厚及其纖維化的藥物中的應(yīng)用，提供一個用于保護(hù)屯、臟功能和/或預(yù)防、緩解 和/或治療屯、肌肥厚和纖維化的祀基因TRIMS的新用途。
[0008] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)： 本發(fā)明通過試驗確定了TRIMS表達(dá)與屯、肌肥厚之間的關(guān)系： 1、發(fā)生屯、肌肥厚時屯、肌細(xì)胞肥大標(biāo)志物ANP、Myh7表達(dá)明顯上調(diào)，TRIMS表達(dá)明顯上調(diào) 本發(fā)明分別選用正常人和擴(kuò)屯、患者屯、臟，正常假手術(shù)（化am)小鼠和通過主動脈弓縮窄 手術(shù)（AB)造成屯、肌肥厚的小鼠屯、臟，W及分別通過對照組（PBS)或血管緊張素2(AngII) 或苯腎上腺素（PE)刺激后的屯、肌細(xì)胞，分別檢測了ANP、Myh7、TRIMS的蛋白表達(dá)情況。結(jié) 果表明，擴(kuò)張型屯、肌病患者和發(fā)生屯、肌肥厚的小鼠屯、臟中的屯、肌細(xì)胞肥大標(biāo)志物ANP、Myh7 的表達(dá)明顯上調(diào)，TRIMS的表達(dá)明顯上調(diào)，同樣在經(jīng)血管緊張素II(Angll)或苯腎上腺素 (PE)刺激后的屯、肌細(xì)胞中ANP、Myh7的表達(dá)也明顯上調(diào)，TRIMS的表達(dá)明顯上調(diào)（圖1、圖2、 圖3)。
[0009] 2、TRIM8干擾（AdshTRIMS)及過表達(dá)（AdTRIMS)腺病毒對經(jīng)AngII誘導(dǎo)的屯、肌 細(xì)胞肥大模型的影響 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)在經(jīng)血管緊張素II(AngII)誘導(dǎo)的體外屯、肌肥厚模型中，TRIMS過表達(dá) 屯、肌細(xì)胞出現(xiàn)明顯肥大，TRIMS不表達(dá)屯、肌細(xì)胞的肥大明顯被抑制（圖4)。
[0010] 3、TRIMS基因敲除顯著抑制了屯、肌肥厚、纖維化的程度，保護(hù)屯、功能；TRIMS基因 過表達(dá)顯著促進(jìn)了屯、肌肥厚及其纖維化的程度，惡化屯、功能 本發(fā)明選用野生型小鼠、TRIMS基因敲除小鼠及屯、臟特異性TRIMS轉(zhuǎn)基因小鼠和非轉(zhuǎn) 基因小鼠進(jìn)行試驗，并將每種小鼠分成假手術(shù)組和手術(shù)組，每組10只小鼠。手術(shù)組給予主 動脈弓縮窄手術(shù)，假手術(shù)組不予主動脈弓縮窄，