一種參芪扶正注射液中依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉的定量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種針對參芪扶正注射液安全性控制的方法及應(yīng)用，具體是一種通過 建立離子色譜法對參芪扶正注射液中添加的附加劑依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉進(jìn)行檢測及 應(yīng)用的方法，屬于藥物分析技術(shù)及安全性控制領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 參芪扶正注射液為國家中藥保護(hù)品種，保護(hù)品種號：ZYB2072004073,是由黃芪和 黨參經(jīng)提取制成的中藥大輸液，用于氣虛癥肺癌、胃癌的輔助治療，可提高機(jī)體的免疫功 能，并可治療心、腦血管疾病，具有扶正固本、益氣補(bǔ)虛、活血化瘀的功效。
[0003] 參芪扶正注射液成分復(fù)雜，根據(jù)ZL 201210436493.4中公開資料，其指紋圖譜中 僅特征峰就有18個(gè)之多；根據(jù)ZL 201310008395. 5,參芪扶正注射液鑒別出來的成分有 毛蕊異黃酮-7-0-β -D-葡萄糖苷，異微凸劍葉莎醇-7, 2 ^ -二-0-葡萄糖苷、鷹嘴豆芽 素-7-葡萄糖苷、9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-木糖葡萄糖苷、黃芪甲苷、5-羥甲基糠醛等， 諸多已知和未知的成分給參芪扶正注射液的質(zhì)量控制帶來了極大的困難。為了保持注射液 質(zhì)量的可控性和穩(wěn)定性，紅外光譜、核磁共振、高效液相色譜等高精度分析的方法都相繼被 應(yīng)用于監(jiān)測參芪扶正注射液中S峰（毛蕊異黃酮苷）和極性較大的水溶性成分、黃芪甲苷 含量、其負(fù)相關(guān)成分、皂苷類成分等。即使眾多先進(jìn)的分析檢測方法用于參芪扶正注射液質(zhì) 量控制，但是為了防微杜漸，增加臨床用藥安全性，對于參芪扶正注射液質(zhì)量控制的研究從 未間斷。
[0004] 雜的成分給參芪扶正注射液的質(zhì)量控制帶來很大難度的同時(shí)，也給生產(chǎn)造成了一 定的困擾。制備靜脈給藥輸液時(shí)，一般使用不銹鋼容器和管道，在加熱情況下，注射液與金 屬容器、管道、濾器等較長時(shí)間接觸后，注射液的組分會與金屬離子等物質(zhì)結(jié)合，生成有色 的金屬復(fù)合物，導(dǎo)致溶液顏色變深，為了防止主藥與金屬離子發(fā)生反應(yīng)，減少溶液變色，本 品中添加了適量的金屬絡(luò)合劑依地酸二鈉和抗氧化劑焦亞硫酸鈉，添加量大約為0. 2g/L 和 0. 5g/L。
[0005] 現(xiàn)在有研究表明，依地酸二鈉可與鈣離子結(jié)合成可溶的絡(luò)合物引起鈣的減少，靜 脈制劑中使用依地酸二鈉會導(dǎo)致血鈣下降，若添加過量會造成血鈣過低，惡心、頭痛、尿急、 血液凝固性降低等不良反應(yīng)；有文獻(xiàn)報(bào)道：如果人體大量攝入依地酸二鈉，依地酸二鈉會 與血液及骨骼中的鈣形成水溶性螯合物，被排出體外，引起低血鈣或骨鈣流失，導(dǎo)致抽搐甚 至死亡。另外，焦亞硫酸鈉在溶液中以SO 32和SO42的形式存在，儲存久了，還會釋放出S0 2。 SO2對皮膚、黏膜有明顯的刺激作用，可引起結(jié)膜、支氣管炎癥狀；其次亞硫酸鹽還會引發(fā)過 敏。參芪扶正注射液的適用人群是氣虛癥肺癌、胃癌患者，身體機(jī)能弱，免疫力下降，更容易 產(chǎn)生過敏、頭痛等不良反應(yīng)，因此需要更加嚴(yán)格的控制依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉使用量。雖 然參芪扶正注射液中添加了金屬絡(luò)合劑依地酸二鈉和抗氧化劑焦亞硫酸鈉，但是針對于附 加劑尚未建立公開的質(zhì)量控制方法。在生產(chǎn)過程中人員情緒不穩(wěn)定等不確定因素，可能會 導(dǎo)致投料量的偏差，帶來質(zhì)量和安全隱患。為了保證臨床用藥的安全，需要對依地酸二鈉和 焦亞硫酸鈉的建立質(zhì)量控制方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供一種離子色譜法定量分析控制參芪扶正注射液中附加劑依地酸二鈉 和焦亞硫酸鈉含量的方法，具體的涉及一種參芪扶正注射液中依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉的 定量檢測方法。
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供上述定量檢測方法的應(yīng)用。
[0008] 在一些文獻(xiàn)中，藥品注射液中微量離子用離子色譜法檢測時(shí)，將注射液直接注入 離子色譜柱內(nèi)進(jìn)行分析。參芪扶正注射液的成分復(fù)雜，如【背景技術(shù)】所述，其中含有氨基酸、 糖類（主要是單糖和寡糖）、有機(jī)酸、氯化鈉等諸多成分，各種不同的化學(xué)物質(zhì)多達(dá)18種以 上，而依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉2種附加劑的含量低，經(jīng)過試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)將注射液直接注入離 子色譜柱內(nèi)，結(jié)果色譜圖上顯示的氯離子峰面積過高，占全部成分峰面積的95%以上；同 時(shí)色譜柱柱效下降很快，保留時(shí)間波動大，導(dǎo)致得到的譜圖無法解讀，根本無法檢測到依地 酸二鈉和焦亞硫酸鈉。
[0009] 為了解決以上問題，發(fā)明人經(jīng)過多方面的摸索，發(fā)現(xiàn)將樣品進(jìn)行稀釋后，可以大幅 度降低氯離子的峰面積，但是稀釋后的參芪扶正注射液在檢測中色譜柱柱效仍然存在下降 快，保留時(shí)間波動大的問題。
[0010] 在已經(jīng)公開的文獻(xiàn)資料中，ZL 201310756866. 0用核磁共振方法對參芪扶正注射 液進(jìn)行質(zhì)量控制時(shí)，參芪扶正注射液經(jīng)過了凍干處理；ZL201310008395. 5,參芪扶正注射液 經(jīng)0. 45 μ m微孔濾膜濾進(jìn)行處理；ZL 201210436493. 4采用0. 22um微孔濾膜濾過進(jìn)行處 理；ZL 200710136382. 0中，經(jīng)過大孔樹脂過濾，萃取等處理步驟。發(fā)明人將公開文獻(xiàn)中的 處理手段應(yīng)用到本發(fā)明中，都無法解決柱效下降快的技術(shù)問題。
[0011] 經(jīng)過艱苦的試驗(yàn)，我們驚喜的發(fā)現(xiàn)使用C18柱處理稀釋過的參芪扶正注射液，其 氯離子峰面積干擾被消除，且色譜柱柱效沒有明顯下降，保留時(shí)間的波動可控，可以精確定 量檢測到依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉。
[0012] 本發(fā)明一種參芪扶正注射液中依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉的定量檢測方法，包括以 下步驟：
[0013] (1)用離子色譜法檢測參芪扶正注射液中依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉的EDTA2、 SO32、SO42的離子濃度；
[0014] (2)依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉的計(jì)算：
[0015] 依地酸二鈉的計(jì)算：根據(jù)步驟（1)中所述EDTA2的濃度，按照依地酸二鈉和 EDTA2I : 1的摩爾比，折算出溶液中依地酸二鈉的濃度；
[0016] 焦亞硫酸鈉的計(jì)算：①通過峰面積歸一化法，利用繪制Na2S2O 5對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí) 不同濃度的工作對照溶液中SO32和SO 42的峰面積，算出Na 2S205溶液中SO 32和SO 42的比 例；②根據(jù)Na2S2OM照品溶液中，SO 32和SO 42的比例以及S元素守恒，按照Na 2S205分別與 SO32和SO42的摩爾比，通過三者的分子量折算，分別繪制SO 32和SO42的標(biāo)準(zhǔn)曲線；③根據(jù) 樣品溶液中SO 32和SO 42的峰面積，分別代入SO 32和SO 42的標(biāo)準(zhǔn)曲線，算出SO 32和SO 42濃 度，再根據(jù)分子量折算出SO32和SO 42的摩爾濃度；④依據(jù)溶液中S元素守恒，根據(jù)SO 32和 SO42的摩爾濃度，算出Na2S2O5的摩爾濃度，進(jìn)而根據(jù)分子量算出樣品中Na 2S2O5的濃度。
[0017] 步驟（1)中所述參芪扶正注射液先通過C18小柱純化，然后洗脫液稀釋50-400倍 后，再通過離子色譜柱。
[0018] 步驟（1)中所述參芪扶正注射液先通過C18小柱純化，然后洗脫液稀釋100-200 倍后，再通過離子色譜柱。
[0019] 步驟（1)中所述參芪扶正注射液先通過C18小柱純化，然后洗脫液稀釋200倍后， 再通過離子色譜柱。
[0020] 所述步驟（1)中還包括對照品溶液的制備，分別取依地酸二鈉、焦亞硫酸鈉對照 品適量，精密稱定，加水制成每ImL分別含依地酸二鈉、焦亞硫酸鈉 1 μ g的溶液。
[0021] 所述步驟⑴中離子色譜法的色譜條件為：色譜柱為IonPac ASll-HC(4X250mm)，淋洗液濃度為0~30min 15mmol/L的氫氧化鉀溶液，電導(dǎo)檢測器，流 速為lmL/min，進(jìn)樣量為25 μ L。
[0022] 本發(fā)明提供的依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉的控制方法能夠應(yīng)用于參芪扶正注射液 中附加劑的測定，能有效地對參芪扶正注射液的安全性進(jìn)行評價(jià)。
[0023] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0024] 參芪扶正注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其相關(guān)的研究資料中，尚未對其附加劑依地酸二鈉和 焦亞硫酸鈉進(jìn)行控制，而過量的依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉對人體有損傷，特別該品種為靜 脈注射劑，風(fēng)險(xiǎn)較大，隳需對附加劑的安全性進(jìn)行評價(jià)和控制。故本發(fā)明方法建立離子色 譜法檢測參芪扶正注射液中依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，通過定量分析Η)ΤΑ 2和 SO32、5042，能快速有效地監(jiān)控藥品附加劑的用量，除了在投料源頭嚴(yán)格管理人員的操作規(guī) 范外，還提供了一種投料后監(jiān)控藥品附加劑用量的途徑，雙重控制，保證藥品質(zhì)量安全。同 時(shí)本發(fā)明還可以實(shí)時(shí)定量測定m)TA 2、SO32和SO42的量，用于精確計(jì)算參芪扶正注射液產(chǎn) 品儲藏過程中依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉的剩余量，從而準(zhǔn)確評估焦依地酸二鈉和亞硫酸鈉 的投料量是否合理，最終精密調(diào)整依地酸二鈉和焦亞硫酸鈉的投料量，最大限度的達(dá)到用 最科學(xué)投料量、最有效質(zhì)量控制的結(jié)果，優(yōu)化藥品附加劑的使用，保證用藥安全。另外，本發(fā) 明