一種白亮獨(dú)活的薄層檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及白亮獨(dú)活的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 藏醫(yī)用傘形科植物白亮獨(dú)活HeracleumcandicansWall,exDC.的根作珠嘎藥 用，白亮獨(dú)活植物形態(tài)與《晶珠本草》等書(shū)對(duì)珠嘎的敘述相符，白亮獨(dú)活為正品入藥。珠嘎 具有殺蟲(chóng)，止血，愈瘡癰，治麻風(fēng)等功效。因此對(duì)珠嘎進(jìn)行深入研究和開(kāi)發(fā)具有重大意義。
[0003] 但是，已有研究報(bào)道，白亮獨(dú)活很難從其性狀進(jìn)行鑒別。
[0004] 為解決上述問(wèn)題，高必興、蘭志瓊等人（白亮獨(dú)活的HPLC指紋圖譜，中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑 學(xué)雜志，2015年4月，第21卷第8期，61-63頁(yè)）報(bào)道了一種白亮獨(dú)活的HPLC指紋圖譜的 建立方法，可以有效鑒別出白亮獨(dú)活與其混偽品康定獨(dú)活。
[0005] 但是，HPLC指紋圖譜的建立工序繁瑣，時(shí)間較長(zhǎng)，且需要專業(yè)的人員和專業(yè)的儀 器。而白亮獨(dú)活多分布于西藏及青海、云南、四川等省的藏區(qū)，上述地區(qū)的人才條件和物質(zhì) 條件相對(duì)落后，在實(shí)際中難以有效建立HPLC的指紋圖譜。
[0006] 因此，目前亟需一種更為簡(jiǎn)便易行的白亮獨(dú)活檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種白亮獨(dú)活的薄層檢測(cè)方法，它包括以下步 驟：
[0008] a、制備供試品溶液：取待測(cè)樣品，加入甲醇或乙醇，超聲或回流提取，過(guò)濾，得供試 品溶液；
[0009] b、制備對(duì)照品洛液；
[0010] C、檢測(cè)供試品溶液和對(duì)照品溶液：分別將對(duì)照品溶液和供試品溶液在薄層板上點(diǎn) 樣，以體積比（1.5-4) :1的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)后取出檢視，將供試品溶液薄 層板上各斑點(diǎn)與對(duì)照品溶液上斑點(diǎn)進(jìn)行比對(duì)，可檢測(cè)出待測(cè)樣品的真?zhèn)位蚴琴|(zhì)量情況；
[0011] 所述對(duì)照品溶液選自白亮獨(dú)活對(duì)照品溶液或/和歐前胡素對(duì)照品溶液；
[0012] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述白亮獨(dú)活對(duì)照品溶液是按照下述步驟制備得到的：取白亮獨(dú) 活藥材，以步驟a的相同方法制備得到白亮獨(dú)活對(duì)照品溶液；
[0013] 所述歐前胡素對(duì)照品溶液是按照下述步驟制備得到的：取歐前胡素對(duì)照品，加入 與供試品溶液相同的溶劑，得歐前胡素對(duì)照品溶液。
[0014] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述步驟a包括以下步驟：
[0015] 取待測(cè)樣品，加入甲醇，待測(cè)樣品與甲醇的重量體積比為l:10g/mL，超聲提取，過(guò) 濾，即得供試品溶液；
[0016] 或步驟a包括以下步驟：
[0017] 取待測(cè)樣品，加入乙醇A，待測(cè)樣品與乙醇A的重量體積比為1:20g/mL，回流提取， 過(guò)濾，蒸干，殘?jiān)右掖糂溶解，待測(cè)樣品與乙醇B的重量體積比為1: 2g/mL，即得供試品溶 液；
[0018] 或步驟a包括以下步驟：
[0019] 待測(cè)樣品，加入無(wú)水乙醇C，待測(cè)樣品與無(wú)水乙醇C的重量體積比為l:20g/mL，超 聲提取，過(guò)濾，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇D溶解，待測(cè)樣品與無(wú)水乙醇D的重量體積比為1: 2g/ mL，即得供試品溶液；
[0020] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述展開(kāi)劑為體積比7:3的石油醚-乙酸乙酯。
[0021] 進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟c的點(diǎn)樣中，點(diǎn)樣的量為4yL。
[0022] 進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟c的展開(kāi)中，展距大于等于10cm。
[0023] 進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟c的展開(kāi)中，溫度為10°C。
[0024] 進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟c的檢視中，檢視波長(zhǎng)為365nm或254nm。
[0025] 進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟c的檢測(cè)中，所述薄層板為硅膠GF254板。
[0026] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述歐前胡素對(duì)照品溶液的制備中，歐前胡素對(duì)照品與溶劑的重 量體積比為lmg/mL。
[0027] 本發(fā)明薄層色譜檢測(cè)方法，簡(jiǎn)便易行，可以分離出白亮獨(dú)活中的多個(gè)成分，各成分 分離良好，可以有效區(qū)分白亮獨(dú)活與其近偽品康定獨(dú)活，為全面監(jiān)控白亮獨(dú)活的真?zhèn)魏唾|(zhì) 量提供了有效保障。
[0028] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0029] 以下通過(guò)實(shí)施例形式的【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō) 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說(shuō)明】
[0030] 圖10-20中，最右的斑點(diǎn)為歐前胡素對(duì)照品斑點(diǎn)。
[0031] 圖1為三種提取方法的薄層色譜圖，1為方法1，2為方法2, 3為方法3。
[0032] 圖2為石油醚（60~90°C)_乙醚（8. 5:1. 5)展開(kāi)系統(tǒng)的薄層色譜圖。
[0033] 圖3為石油醚（60~90°C)-乙酸乙酯（7:3)展開(kāi)系統(tǒng)的薄層色譜圖。
[0034] 圖4為石油醚（60~90°C)-甲苯-乙酸乙酯（8:2:2)展開(kāi)系統(tǒng)的薄層色譜圖。
[0035] 圖5為石油醚（60~90°C)_乙酸乙酯（7:3)展開(kāi)系統(tǒng)的薄層色譜圖。
[0036] 圖6為石油醚（60~90°C)_乙酸乙酯（4:1)展開(kāi)系統(tǒng)的薄層色譜圖。
[0037] 圖7為石油醚（60~90°C)_乙酸乙酯（9:1)展開(kāi)系統(tǒng)的薄層色譜圖。
[0038] 圖8為石油醚（60~90°C)_乙酸乙酯（3:2)展開(kāi)系統(tǒng)的薄層色譜圖。
[0039] 圖9為不同點(diǎn)樣量下的薄層色譜圖，1-5的點(diǎn)樣量依次為2yL、4yL、6yL、8yL、 10yL〇
[0040] 圖10為展距8cm下的薄層色譜圖。
[0041] 圖11為展距10cm下的薄層色譜圖。
[0042] 圖12為展距12cm下的薄層色譜圖。
[0043] 圖13為展距14cm下的薄層色譜圖。
[0044] 圖14為302nm檢視下的薄層色譜圖。
[0045] 圖15為365nm檢視下的薄層色譜圖。
[0046] 圖16為丁 = 16°(：，冊(cè)=50%下的薄層色譜圖。
[0047] 圖17為T = 26°C，RH= 50%下的薄層色譜圖。
[0048] 圖18為丁 = 10°(：，冊(cè)=50%下的薄層色譜圖。
[0049] 圖19為丁 = 26°(：，冊(cè)=30%下的薄層色譜圖。
[0050] 圖20為1 = 26°(：，冊(cè)=80%下的薄層色譜圖。
[0051] 圖21為白亮獨(dú)活藥材1-8號(hào)樣品和9歐前胡素對(duì)照品的薄層色譜圖。
[0052] 圖22為白亮獨(dú)活藥材1-10號(hào)樣品和11歐前胡素對(duì)照品的薄層色譜圖。
[0053] 圖23為白亮獨(dú)活藥材樣品、康定獨(dú)活樣品以及歐前胡素對(duì)照品的薄層色譜圖：1 為歐前胡素，2為白亮獨(dú)活4號(hào)樣品，3為康定獨(dú)活6號(hào)樣品。
【具體實(shí)施方式】
[0054]材料：
[0055] 供實(shí)驗(yàn)所用的白亮獨(dú)活藥材10批，采自于四川省甘孜州，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先 明教授鑒定為傘形科植物白亮獨(dú)活Heracleum candicans Wall.ex DC.的干燥根，洗去泥 土及雜質(zhì)，晾干，備用。藥材來(lái)源見(jiàn)表1。
[0056] 表1白亮獨(dú)活藥材樣品產(chǎn)地
[0057]
[0058] 供實(shí)驗(yàn)用的康定獨(dú)活均經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先明教授鑒定為傘形科植物康定獨(dú) 活HeracleumsoulieideBoiss.Herb?的干燥根。10批康定獨(dú)活藥材來(lái)源如表2〇
[0059] 表2康定獨(dú)活藥材樣品產(chǎn)地
[0060]
[0061] 上述藥材均已過(guò)三號(hào)篩，備用。
[0062] 儀器與試劑：
[0063]萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)SartoriusBP121S)，十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó) SartoriusBP211D)，紫外分光光度計(jì)（日本島津UV-1600型），超聲波清洗器（昆山市超聲 儀器有限公司，KQ5200E型，功率200W，頻率40KHZ);歐前胡素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品 檢定所，批號(hào)110826-201214,純度99. 5% );其他試劑均為分析純。
[0064] 實(shí)施例1本發(fā)明方法工藝參數(shù)的篩選
[0065] 1、供試品制備方法考察
[0066] 方法1 :取白亮獨(dú)活粉末lg，加甲醇10mL后超聲15min，濾過(guò)。
[0067] 方法2:取本品粉末lg，加乙醇20mL后回流lh，濾過(guò)，水浴蒸干，加2mL的乙醇溶 解。
[0068] 方法3 :取本品粉末lg，加無(wú)水乙醇20mL后超聲30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú) 水乙醇2mL使溶解。
[0069] 三種提取分別點(diǎn)樣量4yL于薄層硅膠G板上，以展開(kāi)劑石油醚（60~90°C) _乙 酸乙酯（7:3)展開(kāi)，展距12cm，置于紫外光燈（365nm)下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖1。
[0070] 結(jié)果表明：三種方法展開(kāi)的點(diǎn)情況差異不大，分離出的清晰斑點(diǎn)較多。其中，方法 1提取簡(jiǎn)便，斑點(diǎn)圓潤(rùn)。故優(yōu)選方法1提取白亮獨(dú)活。
[0071] 2、展開(kāi)系統(tǒng)的考察
[0072]系統(tǒng) 1:石油醚（60 ~90°C)_ 乙醚（8. 5:1. 5);
[0073] 系統(tǒng)2:石油醚（60~90°C)_乙酸乙酯（7:3);
[0074] 系統(tǒng)3:石油醚（60~90°C)_甲苯-乙酸乙酯（8:2:2)。
[0075] 取上述方法1提取溶液，分別點(diǎn)樣量4yL于三塊薄層硅膠G