7)，主要原因可能是TBBPA有活潑酚羥基的存在，硅膠會與其牢固結(jié)合，導(dǎo)致洗 脫液不能將其有效地洗脫下來，因此方法1不能滿足分析需要。
[0051] 方法2手動填裝GPC柱凈化法：于燒杯中用甲苯將活化的SX3生物珠混勻震搖至 均一的糊狀，立即倒入干凈的玻璃管（50 mmX50 cm)中，再接著用甲苯將殘留的填料混勻 倒入玻璃管，如此重復(fù)多次，待填料沉淀下來與液相分層后，用環(huán)己烷：乙酸乙酯混合溶液 (1:1，v/v)置換出甲苯，備用。
[0052] 將提取好的樣品用環(huán)己烷：乙酸乙酯混合溶液（1:1，v/v)復(fù)溶，每次2-4 mL，滴 入GPC柱上部，如此重復(fù)清洗燒瓶3-4次，400 mL環(huán)己烷：乙酸乙酯（1:1，v/v)洗脫，收集 190~350 mL之間的洗脫液（之前的洗脫液中不含目標(biāo)物），旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶， 每次2~4 mL，重復(fù)清洗燒瓶3~4次，轉(zhuǎn)移至10 mL試管，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?00 y L甲醇，旋 渦振蕩lmin，經(jīng)0.2 ym有機(jī)濾膜過濾后上機(jī)測定。
[0053] 采用該方法時的試驗現(xiàn)象為接收液旋蒸后燒瓶內(nèi)仍有極少量粘稠油分，在氮吹干 過后粘稠現(xiàn)象更加明顯，該現(xiàn)象表明此方法不能完全除盡脂肪，需要進(jìn)行進(jìn)一步凈化才能 進(jìn)行后續(xù)測定。
[0054] 方法3濃硫酸處理凈化法：將提取好的樣品用正己烷復(fù)溶，每次2~4 mL，如此重 復(fù)清洗燒瓶3~4次，合并至50 mL帶刻度具塞離心管中，加入過量的濃硫酸，渦旋震蕩1 min，3000 rpm離心5 min，將上層有機(jī)層轉(zhuǎn)移至試管中，旋蒸至近干，再用正己燒復(fù)溶，每次 2~4 mL，重復(fù)清洗燒瓶3~4次，轉(zhuǎn)移至10 mL試管中，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?00 yL甲醇，旋渦振 蕩1 min，經(jīng)0. 2 ym有機(jī)濾膜過濾后上機(jī)測定。
[0055] 該方法試驗現(xiàn)象為加入濃硫酸充分搖勻并離心之后，上清液與濃硫酸層中間會有 一層橘黃色的乳狀物出現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)該乳化現(xiàn)象的嚴(yán)重程度與絕對回收率成負(fù)相關(guān)，采用加鹽 去乳化處理會與濃酸反應(yīng)釋放氣體，導(dǎo)致溶液噴出。分析其原因是由于油分遇到強(qiáng)酸會發(fā) 生乳化現(xiàn)象，導(dǎo)致部分有機(jī)層與濃硫酸層不能有效分離，而加鹽會與濃硫酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng) 釋放出氣體。雖然TBBPA和HB⑶s均對酸穩(wěn)定，能得到較好的回收率（40%~70%)(表7)，但 需考慮到不同樣品基質(zhì)復(fù)雜程度不同，若有些樣品遇強(qiáng)酸發(fā)生嚴(yán)重的乳化反應(yīng)，回收率就 不一定能滿足分析要求了，況且此方法要多次連續(xù)的進(jìn)行液液萃取操作，耗時費(fèi)力，強(qiáng)酸處 理也容易發(fā)生危險，所以此方法并不理想。
[0056] 方法4結(jié)合法：方法2 GPC之后油脂未完全除凈，繼續(xù)采用方法3,直至油脂完全 除凈。
[0057] 凝膠色譜分離法與濃硫酸法相結(jié)合除脂，先用凝膠色譜除去大量脂肪，接收液再 加入濃硫酸去除剩余脂肪，回收率在40°/『70%之間(表7)，結(jié)果較為理想，但操作復(fù)雜，費(fèi)時 費(fèi)力，不便于大量處理樣品。
[0058] 方法5改進(jìn)的酸化硅膠凈化法：將方法1中的二層硅膠去掉，從下往上依次為1 cm的無水硫酸鈉、15 g 44%酸化硅膠、1 cm的無水硫酸鈉。裝填過程同方法1。該方法借 鑒的是地方標(biāo)準(zhǔn)DBS 42/004-2014《動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚A的測定》。 該方法回收率在58°/『73%之間（表7)，結(jié)果較為理想，但脂肪不能完全去除，有污染超高效 液相色譜儀的風(fēng)險。
[0059] 方法6介孔二氧化鋯雜化柱凈化法：將方法1中的酸化硅膠柱替換為介孔二氧化 鋯雜化柱，裝填過程和使用同方法1。
[0060] 介孔二氧化鋯雜化柱制備過程： $偽晶轉(zhuǎn)化的介孔二氧化硅的合成=200-300目的層析硅膠采用濃鹽酸/水(體 積比1/1)浸泡一晚后，純水洗滌至中性，160°C烘干，得到活化的硅膠。按照摩爾比 Si02:NaOH: CTAB:H20= 1:0. 25:0. 1:40的比例，混合反應(yīng)物后，倒入高壓釜中，130 °C反應(yīng) 24h后，產(chǎn)物用水和乙醇清洗，放入550 °C的馬弗爐中燒去模板CTAB (十六烷基溴化銨)，得 到偽晶轉(zhuǎn)化的介孔二氧化硅（mSi02)。
[0061] :：f Zr02/mSi0^合材料的制備：10 g的ZrOCl 2 ? 8H20加入到200 mL的水中，攪 拌溶解后加入50 g的偽晶轉(zhuǎn)化介孔二氧化硅（mSi02)，在60°C不斷攪拌至干燥，然后在100 °C下干燥6h。將ZrOCl 2負(fù)載的硅膠放置在14%的氨水溶液中，在60°C的水浴中反應(yīng)5h，過 濾，抽干，放入550 °C的馬弗爐中煅燒8h，即得到二氧化鋯涂覆的介孔二氧化硅材料（Zr02/ mSi02)〇
[0062] ③44%酸化硅膠的制備：稱取活化好的硅膠逐步加入濃硫酸（硅膠與硫酸質(zhì)量比 為44/56)，振搖過夜至無塊狀物。完成后裝入磨口試劑瓶中，干燥器中保存。
[0063] 介孔二氧化鋯雜化柱制備方式：取底部設(shè)有聚四氟乙烯活塞的玻璃層析柱，規(guī) 格為長350mm、內(nèi)徑20mm，先在其底部塞一小撮棉花，然后從下往上依次倒入2cm無水硫酸 鈉、5g二氧化鋯涂覆的介孔二氧化硅材料（Zr02/mSi02)、10g44%酸化硅膠、5g二氧化鋯涂 覆的介孔二氧化娃材料（Zr02/mSi02)、2cm無水硫酸鈉。試驗結(jié)果證明，采用這個凈化方法， 最大程度降低儀器被脂肪污染的風(fēng)險，HBCD和TBBPA也取得了高于其他5種方法的絕對回 收率（70%-90%)。
[0064] 表7各種凈化方法對應(yīng)的HB⑶和TBBPA絕對回收率(單位；％)
對比表7中6種方法的目標(biāo)化合物回收率，發(fā)現(xiàn)方法6簡單快捷，油脂可一步且完全 去除，能滿足后續(xù)液質(zhì)分析的需要，安全性高且目標(biāo)化合物絕對回收率最高，故采用介孔二 氧化鋯雜化柱進(jìn)行凈化處理。
[0065] 實施例3 Zr02/mSi02復(fù)合材料可重復(fù)性使用試驗 10g二氧化錯涂覆的介孔二氧化娃材料（Zr02/mSi02)材料依次用20mL丙酮/氨水(體 積比95:5)、20mL丙酮、20mL正己烷洗滌后，可重復(fù)使用5次，結(jié)果見圖5。
【主權(quán)項】
1. 一種可同時分離HBCDs和TBBPA的樣品凈化裝置，包括玻璃層析柱（1)，其特征在 于：所述玻璃層析柱（1)腔體內(nèi)設(shè)有棉花（2)，棉花的上方設(shè)有萃取層；所述萃取層為5層， 自下而上依次為：第一層：無水硫酸鈉層（3);第二層：介孔二氧化鋯微球?qū)樱?);第三層：酸 化硅膠層（5);第四層：介孔二氧化鋯微球?qū)樱?);第五層：無水硫酸鈉層（3)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可同時分離HBCDs和TBBPA的樣品凈化裝置，其特征在 于：所述玻璃層析柱（1)的內(nèi)徑為2. 5cm，柱長為35cm。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種可同時分離HBCDs和TBBPA的樣品凈化裝置，其特 征在于：所述玻璃層析柱（1)中各萃取層中的填充物依次為：第一層：2cm無水硫酸鈉；第 二層：5g介孔二氧化鋯微球；第三層：10g 44%酸化硅膠；第四層：5g介孔二氧化鋯微球；第 五層：2cm無水硫酸鈉。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項所述的一種可同時分離HBCDs和TBBPA的樣品凈化裝 置在測定魚類、肉類、蛋類、乳類、油脂類、土壤中HBCDs和TBBPA含量的應(yīng)用。
【專利摘要】一種可同時分離HBCDs和TBBPA的樣品凈化裝置，涉及一種固相萃取柱，包括玻璃層析柱，其特征在于：所述玻璃層析柱腔體內(nèi)設(shè)有棉花，棉花的上方設(shè)有萃取層；所述萃取層為5層，自下而上依次為無水硫酸鈉層、介孔二氧化鋯微球?qū)?、酸化硅膠層、介孔二氧化鋯微球?qū)雍蜔o水硫酸鈉層。采用該裝置進(jìn)行凈化，植物性油脂、魚、肉、蛋、奶等油脂類食品樣品中六溴環(huán)十二烷異構(gòu)體和四溴雙酚A回收率達(dá)87.5%-114.4%。
【IPC分類】G01N30/06
【公開號】CN104991012
【申請?zhí)枴緾N201510485321
【發(fā)明人】龔艷, 彭西甜, 聞勝, 彭立軍, 張興中
【申請人】湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年8月10日