一種elisa用樣品稀釋液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種樣品稀釋液，具體的說是一種ELISA用樣品稀釋液及其制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前行業(yè)內(nèi)使用的樣品稀釋液基本都通用為PBST液，由十二水磷酸氫二鈉、磷酸 二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、吐溫20組成。優(yōu)點(diǎn)是生產(chǎn)成本低廉，缺點(diǎn)是僅有鹽緩沖液而無法 對樣本待測物進(jìn)行有效保護(hù)，且與血清環(huán)境有較大區(qū)別，基質(zhì)效應(yīng)明顯，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn) 確性和重復(fù)性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明目的是為解決上述技術(shù)問題的不足，提供一種ELISA用樣品稀釋液，使用 該稀釋液體對ELISA樣品進(jìn)行稀釋，降低了基質(zhì)效應(yīng)的干擾，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性及 穩(wěn)定性大大提尚。
[0004] 一種ELISA用樣品稀釋液，由血清蛋白、腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸、鹽緩沖液、液 體防腐劑和純化水組成，其各成份的質(zhì)量百分比為：1. 5%的血清白蛋白、0. 1%的腺苷二磷 酸、0. 3%的乙二胺四乙酸、0. 1%的鹽緩沖液和0. 2%的液體防腐劑，余量為純化水； 所述鹽緩沖液，每升鹽緩沖液中含0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉 和8. 2g氯化鈉，余量為純化水。
[0005]所述ELISA用樣品稀釋液的制備方法，包括以下步驟：以1升ELISA用樣品稀釋液 的制備為例，包括以下步驟： 步驟一、稱取0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉和8. 2g氯化鈉置于容 器中，量取1000ml純化水加入容器中，攪拌至完全溶解，得到鹽緩沖液； 步驟二、稱取15g的血清蛋白加入鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌3-5分鐘，得到溶液A; 步驟三、再向溶液A中加入1. 0g腺苷二磷酸、3. 0g乙二胺四乙酸和2ml液體防腐劑，攪 拌至完全溶解，最后加入純化水定容至1L，攪拌均勻后即為ELISA用樣品稀釋液。
[0006]所述液體防腐劑為ProClin300。
[0007]所述血清蛋白為牛血清白蛋白。
[0008] 有益效果是： 本發(fā)明的ELISA用樣品稀釋液，相比行業(yè)現(xiàn)通用的樣品稀釋液，本發(fā)明可以對樣品進(jìn) 行保護(hù)，有效降低基質(zhì)效應(yīng)的干擾，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。經(jīng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其 效果顯著，即采用本發(fā)明ELISA用樣品稀釋液直到稀釋512倍，即已經(jīng)達(dá)到檢測低限時(shí)，實(shí) 測值與理論值之間的偏差仍在40%內(nèi)。本發(fā)明的ELISA用樣品稀釋液，可在低溫下長期凍 存，且不影響檢測結(jié)果；解決了PBST溶液在性能不穩(wěn)定，不能長期保存的缺陷；本發(fā)明樣品 稀釋液，含有保護(hù)蛋白，尤其是牛血清白蛋白，同時(shí)加入了防腐劑、穩(wěn)定劑，不但可對待測樣 本進(jìn)行保護(hù)，而且可以模擬血清環(huán)境，可大大提高ELISA檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【具體實(shí)施方式】
[0009] -種ELISA用樣品稀釋液，由血清蛋白、腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸、鹽緩沖液、液 體防腐劑和純化水組成，其各成份的質(zhì)量百分比為：1. 5%的血清白蛋白、0. 1%的腺苷二磷 酸、0. 3%的乙二胺四乙酸、0. 1%的鹽緩沖液和0. 2%的液體防腐劑，余量為純化水； 所述鹽緩沖液，每升鹽緩沖液中含0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉 和8. 2g氯化鈉，余量為純化水。
[0010] 所述ELISA用樣品稀釋液的制備方法，包括以下步驟：以1升ELISA用樣品稀釋液 的制備為例，包括以下步驟： 步驟一、稱取0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉和8. 2g氯化鈉置于容 器中，量取1000ml純化水加入容器中，攪拌至完全溶解，得到鹽緩沖液； 步驟二、稱取15g的血清蛋白加入鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌3-5分鐘，得到溶液A; 步驟三、再向溶液A中加入1. 0g腺苷二磷酸、3. 0g乙二胺四乙酸和2ml液體防腐劑，攪 拌至完全溶解，最后加入純化水定容至1L，攪拌均勻后即為ELISA用樣品稀釋液。
[0011] 所述液體防腐劑為ProClin300。
[0012] 所述血清蛋白為牛血清白蛋白。
[0013] 步驟四、在使用前，所有的將ELISA試劑盒的組份恢復(fù)到18-26°c;試劑應(yīng)輕輕旋 轉(zhuǎn)或震蕩混合；每個樣品使用一個單獨(dú)的吸頭；本發(fā)明樣品稀釋液在ELISA試劑盒中的具 體使用方法為： 1、取出包被板，在記錄表上記錄樣本的位置；將本發(fā)明樣品稀釋液稀釋樣品；然后在 相應(yīng)的孔中加入100yL已稀釋好的樣品；37°C條件下孵育30分鐘（±2分鐘)。將各孔的 液體棄入廢液筒，用大約300yL洗滌液洗滌板孔，共洗滌5次。每次洗滌后應(yīng)吸去孔內(nèi)的 液體。在最后一次洗滌液吸去后，將孔中殘留的洗滌液在吸水紙上拍干。每孔加入100UL 酶結(jié)合物。
[0014] 2、置于37°C條件下孵育30分鐘（±2分鐘）。
[0015] 3、重復(fù)將各孔的液體棄入廢液筒，用大約300yL洗滌液洗滌板孔，共洗滌5次。每 次洗滌后應(yīng)吸去孔內(nèi)的液體。在最后一次洗滌液吸去后，將孔中殘留的洗滌液在吸水紙上 拍干。
[0016] 4、每孔加入50yL顯色A液和50yL顯色B液(也可顯色A、B液等比例混勻后加 100yL) ; 37°C條件下孵育15分鐘（± 1分鐘）；每孔加入50yL終止液，終止反應(yīng)；測量并 且記錄樣本和對照的吸光值（0D450)。
[0017] 實(shí)施例1 一種ELISA用樣品稀釋液，由牛血清白蛋白、腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸、鹽緩沖液、液 體防腐劑和純化水組成，其各成份的質(zhì)量百分比為：1. 5%的血清白蛋白、0. 1%的腺苷二磷 酸、0. 3%的乙二胺四乙酸、0. 1%的鹽緩沖液和0. 2%的ProClin300,余量為純化水； 所述鹽緩沖液，每升鹽緩沖液中含0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉 和8. 2g氯化鈉，余量為純化水。
[0018] 所述ELISA用樣品稀釋液的制備方法，包括以下步驟：以1升ELISA用樣品稀釋液 的制備為例，包括以下步驟： 步驟一、稱取0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉和8. 2g氯化鈉置于容 器中，量取1000ml純化水加入容器中，攪拌至完全溶解，得到鹽緩沖液； 步驟二、稱取15g的牛血清白蛋白加入鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌5分鐘，得到溶液A; 步驟三、再向溶液A中加入1. 0g腺苷二磷酸、3. 0g乙二胺四乙酸和2mlPr〇Clin300， 攪拌至完全溶解，最后加入純化水定容至1L，攪拌均勻后即為ELISA用樣品稀釋液。
[0019] 實(shí)施例2 一種ELISA用樣品稀釋液，由血清蛋白、腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸、鹽緩沖液、液體防 腐劑和純化水組成，其各成份的質(zhì)量百分比為：1. 5%的血清白蛋白、0. 1%的腺苷二磷酸、 0. 3%的乙二胺四乙酸、0. 1%的鹽緩沖液和0. 2%的液體防腐劑，余量為純化水； 所述鹽緩沖液，每升鹽緩沖液中含0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉 和8. 2g氯化鈉，余量為純化水。
[0020] 所述ELISA用樣品稀釋液的制備方法，包括以下步驟：以1升ELISA用樣品稀釋液 的制備為例，包括以下步驟： 步驟一、稱取0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉和8. 2g氯化鈉置于容 器中，量取1000ml純化水加入容器中，攪拌至完全溶解，得到鹽緩沖液； 步驟二、稱取15g的血清蛋白加入鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌3分鐘，得到溶液A; 步驟三、再向溶液A中加入1. 0g腺苷二磷酸、3. 0g乙二胺四乙酸和2ml液體防腐劑，攪 拌至完全溶解，最后加入純化水定容至1L，攪拌均勻后即為ELISA用樣品稀釋液。
[0021] 實(shí)施例3 一種ELISA用樣品稀釋液，由血清蛋白、腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸、鹽緩沖液、液體防 腐劑和純化水組成，其各成份的質(zhì)量百分比為：1. 5%的血清白蛋白、0. 1%的腺苷二磷酸、 0. 3%的乙二胺四乙酸、0. 1%的鹽緩沖液和0. 2%的液體防腐劑，余量為純化水； 所述鹽緩沖液，每升鹽緩沖液中含0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉 和8. 2g氯化鈉，余量為純化水。
[0022] 所述ELISA用樣品稀釋液的制備方法，包括以下步驟：以1升ELISA用樣品稀釋液 的制備為例，包括以下步驟： 步驟一、稱取0. 386g二水磷酸二氫鈉、1. 93g十二水磷酸氫二鈉和8. 2g氯化鈉置于容 器中，量取1000ml純化水加入容器中，攪拌至完全溶解，得到鹽緩沖液； 步驟二、稱取15g的血清蛋白加入鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌4分鐘，得到溶液A; 步驟三、再向溶液A中加入1. 0g腺苷二磷酸、3. 0g乙二胺四乙酸和2ml液體防腐劑，攪 拌至完全溶解，最后加入純化水定容至1L，攪拌均勻后即為ELISA用樣品稀釋液。
[0023] 相關(guān)實(shí)驗(yàn)： 1、基質(zhì)效應(yīng)干擾驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：使用PBST稀釋液和本發(fā)明為ELISA用樣品稀釋液兩種稀釋 液，采用不同梯度稀釋同一份樣本，進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，檢測吸光值（0D450)，結(jié)果如見表1所 不〇
[0024]表 1 :
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種ELISA用樣品稀釋液，其特征在于：由血清蛋白、腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸、鹽 緩沖液、液體防腐劑和純化水組成，其各成份的質(zhì)量百分比為：1. 5%的血清蛋白、0. 1%的腺 苷二磷酸、〇. 3%的乙二胺四乙酸、0. 1%的鹽緩沖液和0. 2%的液體防腐劑，余量為純化水； 所述鹽緩沖液，每升鹽緩沖液中含0. 386g二水磷酸二氫鈉、I. 93g十二水磷酸氫二鈉 和8. 2g氯化鈉，余量為純化水。
2. 如權(quán)利要求1所述的ELISA用樣品稀釋液的制備方法，其特征在于： 每升ELISA用樣品稀釋液的制備包括以下步驟： 步驟一、稱取0. 386g二水磷酸二氫鈉、I. 93g十二水磷酸氫二鈉和8. 2g氯化鈉置于容 器中，量取1000 ml純化水加入容器中，攪拌至完全溶解，得到鹽緩沖液； 步驟二、稱取15g的血清蛋白加入鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌3-5分鐘，得到溶液A; 步驟三、再向溶液A中加入I.Og腺苷二磷酸、3.Og乙二胺四乙酸和2ml液體防腐劑，攪 拌至完全溶解，最后加入純化水定容至1L，攪拌均勻后即為ELISA用樣品稀釋液。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的ELISA用樣品稀釋液，其特征在于：所述液體防腐劑為 ProClin300〇
4. 如權(quán)利要求1或2所述的ELISA用樣品稀釋液，其特征在于：所述血清蛋白為牛血 清白蛋白。
【專利摘要】一種ELISA用樣品稀釋液，由血清蛋白、腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸、鹽緩沖液、液體防腐劑和純化水組成，制備方法為，先稱取二水磷酸二氫鈉十二水磷酸氫二鈉和氯化鈉置于容器中，量取純化水加入容器中拌至完全溶解，得到鹽緩沖液；稱取血清蛋白加入鹽緩沖液；再向加入腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸和液體防腐劑，攪拌至完全溶解，定容后即為ELISA用樣品稀釋液。本發(fā)明的ELISA用樣品稀釋液，相比行業(yè)現(xiàn)通用的樣品稀釋液，本發(fā)明可以對樣品進(jìn)行保護(hù)，有效降低基質(zhì)效應(yīng)的干擾，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，經(jīng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其效果顯著。
【IPC分類】G01N1-38
【公開號】CN104819888
【申請?zhí)枴緾N201510142825
【發(fā)明人】?；墼? 邵軍軍, 林彤, 趙付榮, 張永光, 王善普, 李秀梅, 孟曉梅, 趙韻祺
【申請人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所, 洛陽萊普生信息科技有限公司
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年3月30日