三氯殺螨醇農(nóng)殘檢測中成品茶葉樣品的前處理方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)殘檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種成品茶葉中農(nóng)殘檢測之前的樣品前處理方法，具體涉及一種快捷、高效、經(jīng)濟、環(huán)保的樣品前處理方法，可應(yīng)用于各類成品茶葉中的三氯殺螨醇農(nóng)殘分析。
【背景技術(shù)】
[0002]目前就茶葉農(nóng)殘限量，世界上已有18個國家和組織頒發(fā)了 349項農(nóng)藥允許殘留標(biāo)準(zhǔn)，并且一些茶葉主要進(jìn)口國還對茶葉中的農(nóng)藥殘留量制定了更為嚴(yán)格的限量法規(guī)，使我國茶葉出口面臨巨大壓力。在加大對我國茶葉進(jìn)口的檢查力度的同時，每年都制定了更為嚴(yán)格的農(nóng)藥最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)(MRL)、擴大茶葉檢驗項目，以及出臺技術(shù)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)和合格評定程序，實施貿(mào)易技術(shù)壁皇，使我國茶葉出口貿(mào)易遭受最高的技術(shù)性壁皇。
[0003]我國的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)等各類方法與限量的標(biāo)準(zhǔn)都是以成品茶葉，即干茶，作為對象而制定的。由于成品茶葉經(jīng)過制茶加工的復(fù)雜工序后，產(chǎn)生了大量的特有化學(xué)成分，如茶黃素、茶紅素、茶褐素等等色素類物質(zhì)；還有大量的茶多酚、咖啡堿、茶堿、茶氨酸、茶多糖等等特殊功效物質(zhì)，并且這些物質(zhì)隨著茶鮮葉的干燥失水而濃縮富集，故成品茶葉中有94%以上的物質(zhì)組成為種類繁多的干擾物質(zhì)(干燥后的水分一般控制在6%以下)。在進(jìn)行農(nóng)殘檢測過程中，上述大量的茶葉中化學(xué)成分就會作為共存雜質(zhì)而造成嚴(yán)重的響應(yīng)干擾，即“基質(zhì)效應(yīng)”，影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，甚至可能是假陽性結(jié)果。在國標(biāo)GB/T23204-2008中推薦的固相萃取小柱并非普通的SPE柱，而是TPT型號的茶葉專用柱，由此可見一斑。因此在茶葉的農(nóng)殘檢測過程中，較一般的蔬菜水果而言，需要進(jìn)行更為嚴(yán)格的樣品前處理操作，在有效脫去大量干擾物質(zhì)的同時富集“痕量”甚至是“超痕量”的殘留農(nóng)藥，以便準(zhǔn)確測定和分析。
[0004]農(nóng)藥殘留分析的全過程可以分為樣本采集、制備、貯藏、提取、凈化、濃縮和測定等步驟及對殘留農(nóng)藥的確證，而農(nóng)殘檢測方法主要包括:提取、凈化、濃縮、測定四個步驟，其中提取和凈化是目前樣品前處理的主要技術(shù)核心。目前針對茶葉樣品，國內(nèi)外常用的前處理技術(shù)主要有:固相萃取技術(shù)(SPE)、固相微萃取技術(shù)(SPME)、超臨界流體萃取技術(shù)(SFE)、基質(zhì)固相分散技術(shù)(MSPD)、凝膠滲透色譜技術(shù)(GPC)、快速溶劑萃取(ASE)等等。如現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)方法 GB/T 23205-2008、GB/T 23204-2008、GB/T 23376-2009、GB/T 23379-2009 等；我國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) SN/T 1117-2008、SN/T 1724-2009、SN/T 1747-2006、SN/T1950-2007、SN/T 1591-2005、SN/T 0711-2011 等；我國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) NY/T 1724-2009 等等。
[0005]但成品茶葉樣品的上述現(xiàn)有前處理方法存在如下缺陷:
1.復(fù)雜耗時。整個的樣品前處理步驟包括2-3次的溶劑提取、濃縮上樣、凈化洗脫、濃縮、定容、檢測，從樣品粉碎開始到儀器開始檢測結(jié)束，全過程的周期耗時在4小時以上，步驟繁瑣，工作量大，不能快速地給出準(zhǔn)確的結(jié)果。
[0006]2.成本高。其中很多技術(shù)都需要專門的設(shè)備和耗材，如SPE技術(shù)需要專門的SPE小柱，現(xiàn)市場價格在每支十幾到幾十元不等(填料類型和質(zhì)量決定價格)，如GB/T 23204-2008國標(biāo)方法中使用的Cleanert TPT 一般售價在100元/支左右；且這種SPE小柱為一次性耗材，不能重復(fù)使用；此外，該還需要配套的固相萃取裝置和加壓泵進(jìn)行加壓控速，一般最低售價在3000元/套以上，故一份樣品的實際消耗成本就在100元以上。
[0007]3.前處理過程中有毒有害的有機溶劑消耗較多(80-120毫升)，造成環(huán)境污染并威脅人員健康。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡便、效果良好、溶劑消耗量小、分析成本低的綠色環(huán)保的三氯殺螨醇農(nóng)殘檢測中成品茶葉樣品的前處理方法。
[0009]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種三氯殺螨醇農(nóng)殘檢測中成品茶葉樣品的前處理方法，該方法是取粉碎的干燥成品茶葉樣品，按Ig成品茶樣品加2-5ml水的比例，加水浸潤后，再加入為成品茶葉樣品重量1-2倍的三氯殺螨醇分子印跡聚合物，研磨，混勻，裝入預(yù)填有該三氯殺螨醇分子印跡聚合物的層析柱，先以去離子水洗滌，再以體積比為95:5的乙腈和冰醋酸混合溶劑為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，將洗脫液于30-50°C下濃縮干燥，以正己烷溶解定容；其中，上述去離子水的用量為每I克成品茶葉樣品用20-30ml的去離子水，乙腈和冰醋酸混合溶劑的用量為每I克成品茶葉樣品用30-40ml的混合溶劑。
[0010]上述方法的具體步驟如下:
A、將待測成品茶葉樣品干燥、粉碎，過20目篩；
B、取內(nèi)徑0.5-1.0厘米、高5-10厘米的層析柱，依次填入0.5-1.0厘米的脫脂棉和40-50毫克的上述三氯殺螨醇分子印跡聚合物，備用；
C、稱取0.1克待測成品茶葉粉樣品，用0.2-0.5毫升水浸潤30-60分鐘，加入0.1-0.2克的上述三氯殺螨醇分子印跡聚合物，混合，充分研磨5-10分鐘，攪勻，再將均勻分散的混合物轉(zhuǎn)移至上述層析柱中，輕敲填實，在混合物上端填入0.5-1.0厘米的脫脂棉，壓緊實；
D、于層析柱中加入2-3毫升的去離子水洗滌，之后再加入3-4毫升體積比為95:5的乙腈和冰醋酸混配溶劑，常溫下二聯(lián)球手動加壓洗脫，收集洗脫液，30-50°C下通氮氣吹干溶劑，以正己烷徹底溶解殘余物質(zhì)，并定容至I毫升。
[0011]上述三氯殺螨醇分子印跡聚合物是于30ml氯仿中加入2mmol的P, P'-滴滴涕和8mmol的甲基丙烯酸，于4°C反應(yīng)1-2小時后，再加入50mmol的二甲基丙烯酸乙二醇酯及240mg的偶氮二異丁腈，超聲5分鐘使二甲基丙烯酸乙二醇酯和偶氮二異丁腈完全溶解，得混合溶液；然后將該混合溶液逐滴加入到預(yù)先溶解了 3.0g聚乙烯吡咯烷酮的120ml水溶液中，50-60°C下振蕩反應(yīng)20-24小時，得到的聚合物沉淀先過0.45微米孔徑的尼龍濾膜(濾液廢棄)，再用300ml體積比為9:1的甲醇與冰醋酸的混合溶劑進(jìn)行索氏提取，重復(fù)提取4-6次，每次6-8小時，再依次用100-150ml的去離子水、甲醇超聲15-20分鐘洗滌，重復(fù)3_5次直至溶液為中性，最后40-60°C真空干燥成粉末，即得。
[0012]經(jīng)過上述方法處理過的成品茶葉樣品，能供GC-QQQ-MS/MS檢測其中的殘留農(nóng)藥二氯殺螨醇。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下:
1.采用簡單的研磨技術(shù)，在破碎茶葉樣品細(xì)胞的同時，充分吸附提取其中的殘留農(nóng)藥，避免使用大量有害的有機溶劑，對環(huán)境友好，人員健康有益。
[0014]2.研磨后的均勻分散相直接裝入層析柱，無需硅藻土、氧化鋁等農(nóng)殘分析常用吸附劑，也不需要專用的SPE裝置和SPE小柱，更避免使用專門的輔助萃取設(shè)備(如高速勻漿機、超聲波發(fā)生器等)，大大減少了分析檢測的成本。
[0015]3.該技術(shù)集樣品的提取、凈化于一體，避免了樣品均化