專利名稱：家蠶種成品檢疫方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蠶病防治方法。
家蠶微粒子病是蠶業(yè)生產(chǎn)上具有災(zāi)難性和毀滅性的蠶病。法國(guó)生物學(xué)家巴斯德于1865年創(chuàng)立了“母蛾檢疫淘汰蠶種法”，即以產(chǎn)卵母蛾為檢測(cè)對(duì)象，推知其所產(chǎn)蠶卵是否帶有微粒子病毒的方法。由此至今，母蛾檢疫方法便成為防除家蠶微粒子病害的唯一方法。在此之后，國(guó)內(nèi)外眾多專家學(xué)者對(duì)母蛾檢疫方法進(jìn)行了不斷研究總結(jié)，提出了多種改進(jìn)方案，如成都科技大學(xué)出版社出版的《家蠶微粒子病資料選編》一書中所載“蠶種的新法抽檢與集團(tuán)磨蛾檢查及其經(jīng)濟(jì)益分析”一文中所介紹的“新法抽檢”和“集團(tuán)磨蛾檢查法”等。但是，這些改進(jìn)方案依然沒(méi)有突破以母蛾作為檢測(cè)對(duì)象的母蛾檢疫方法和原理。與上述母蛾檢疫法相對(duì)應(yīng)，在現(xiàn)有的家蠶種制作過(guò)程中，通常是先采用母蛾檢疫方法對(duì)產(chǎn)卵母蛾進(jìn)行檢疫，如沒(méi)有發(fā)現(xiàn)微粒子病毒，再將其所產(chǎn)蠶卵加工為家蠶種成品。而對(duì)于加工制得的家蠶種成品來(lái)說(shuō)，則不再作更進(jìn)一步的檢疫。也即是說(shuō)，現(xiàn)有的家蠶種成品僅僅是在其為半成品時(shí)利用母蛾檢疫方法同接地進(jìn)行了一次檢疫，而在其真正成為成品之后，則并沒(méi)有對(duì)蠶種本身直接進(jìn)行檢疫。就上述僅僅利用母蛾檢疫方法檢驗(yàn)了其半成品的家蠶種來(lái)說(shuō)，由于是以母蛾為檢驗(yàn)對(duì)象，即通過(guò)檢驗(yàn)上代樣本，間接判定下代樣本，從而存在以下局限1、隨著生物的進(jìn)化，各種原蟲孢子在母蛾體內(nèi)不斷出現(xiàn)，加之對(duì)病原的檢驗(yàn)是在顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)識(shí)別，極難準(zhǔn)確判別微粒子的種群?？蒲泻蜕a(chǎn)部門在未弄清楚之前，很難科學(xué)地?cái)嘌院团卸ㄟ@些蠶種成品的合格性。
2、在母蛾批毒率相同時(shí)，不同的胚傳率也可造成下代病蟻率的較大差異，上述現(xiàn)有檢疫方法中以母蛾的批毒率推測(cè)下代病蟻率是不準(zhǔn)確的，有可能對(duì)蠶種成品造成錯(cuò)判。
3、在利用母蛾實(shí)施家蠶種半成品檢疫的過(guò)程中，如因監(jiān)管不嚴(yán)或經(jīng)營(yíng)思想不端正，造成母蛾抽樣裝盒無(wú)代表性或人為地用無(wú)病母蛾或殺毒處理過(guò)的母蛾配以有病蠶卵的弄虛作假現(xiàn)象，就會(huì)出現(xiàn)誤檢，造成不合格蠶種的發(fā)放使用。
4、如因管理疏忽，造成母蛾抽樣裝盒量不足，或因其它因素?fù)p失母蛾抽樣量，蛾體腐爛發(fā)霉，烘烤時(shí)間偏早，高溫烘烤使蛾體烘焦等情況，都會(huì)影響母蛾中微粒子孢子的檢出和蠶種合格性的判定，失去蠶種檢疫的真實(shí)性。
5、蠶種作為商品流通，通常是查看蠶種生產(chǎn)者的母蛾檢疫報(bào)表或聽(tīng)生產(chǎn)者的介紹。對(duì)使用者來(lái)說(shuō)，無(wú)法直接判定蠶種的合格性，由于聽(tīng)信生產(chǎn)方的一面之詞，結(jié)果往往造成蠶繭減收，產(chǎn)生諸多糾紛。
由于上述局限性，使農(nóng)村絲繭育暴發(fā)微粒子病的事例不斷出現(xiàn)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，僅四川省1989年至1990年兩年間，因微粒子病害無(wú)繭可收的蠶種達(dá)17余萬(wàn)張，減收五成以上的蠶種50余萬(wàn)張，直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)1億元以上。這不僅造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失，而且還污染了環(huán)境，導(dǎo)致惡性循環(huán)，對(duì)蠶業(yè)生產(chǎn)和發(fā)展構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此，為了避免和減輕微粒子病的危害，僅僅采用母蛾檢疫方法對(duì)蠶種的半成品進(jìn)行檢疫是不完備的，有必要提供一種可直接檢疫家蠶種成品的家蠶種成品檢疫方法。
本發(fā)明的目的即是提供一種可直接檢疫家蠶種成品的家蠶種成品檢疫方法。
本發(fā)明的家蠶種成品檢疫方法按以下步驟進(jìn)行a、從相同產(chǎn)卵時(shí)間產(chǎn)下的一批蠶卵中隨機(jī)抽取部分蠶卵作為蠶卵卵樣；b、將所取蠶卵卵樣在溫度為25～31℃、相對(duì)濕度為80～98％的環(huán)境中孵化；c、以蠶卵卵樣中即將孵出蟻蠶的轉(zhuǎn)青卵或巳由蠶卵孵成蟻蠶、而又在溫度為25～31℃、相對(duì)濕度為80～98％的環(huán)境中絕食放置、自然死亡的死蟻及其卵殼為檢驗(yàn)對(duì)象；d、在轉(zhuǎn)青卵或死蟻及其卵殼中滴入KOH或NaOH液，并研磨均勻；e、用顯微鏡對(duì)經(jīng)上述步驟制得的制取物進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明方法的機(jī)理是當(dāng)蠶卵在上述溫度、濕度的環(huán)境中孵化時(shí)，微粒子孢子易于發(fā)育和增殖，從而易于檢出。通常情況下，以對(duì)在上述環(huán)境中死亡的死蟻及其卵殼進(jìn)行檢驗(yàn)效果最好。但在急于獲得初步檢驗(yàn)結(jié)果的情況下，也可對(duì)上述轉(zhuǎn)青卵進(jìn)行檢驗(yàn)。另外，在用顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)之前，在磨碎后的轉(zhuǎn)青卵或死蟻及其卵殼中滴入KOH或NaOH液并研磨均勻的目的是消除檢測(cè)物中的脂肪球，并讓轉(zhuǎn)青卵或死蟻及其卵殼充分磨細(xì)，使觀察微粒子孢子更為容易。通?？稍谀ニ榈?00粒轉(zhuǎn)青卵或100只死蟻及其卵殼中滴入0.5～3毫升2％KOH或NaOH液。在本發(fā)明中，為了讓所取蠶卵具有普遍性，提高檢疫的可靠性，在從蠶卵中提取蠶卵卵樣時(shí)，可以多個(gè)分離點(diǎn)作為取樣點(diǎn)提取卵樣。實(shí)際操作時(shí)，通?？稍诰嫉?個(gè)取樣點(diǎn)以上共隨機(jī)抽取蠶卵6～10克作為蠶卵卵樣。
本發(fā)明的方法與前述現(xiàn)有家蠶種檢疫方法相比，由于采用蠶卵作為檢疫材料，而不是通過(guò)檢驗(yàn)?zāi)付赀@一上代樣本來(lái)間接判定下代樣本，從而可對(duì)蠶種成品本身進(jìn)行檢疫，并使檢疫更為直接、準(zhǔn)確和真實(shí)，防止和避免蠶種檢疫中存在的弄虛作假現(xiàn)象等諸多弊端，確保蠶種成品的合格性。另外，本方法還可用于有爭(zhēng)議的蠶種的仲裁鑒定，以判別經(jīng)母蛾檢疫的蠶種是否有弄虛作假的現(xiàn)象。本發(fā)明的方法于1991年開(kāi)始在四川省部分地區(qū)試用，對(duì)該省省內(nèi)及調(diào)入該省使用的蠶種分季別、品種、批次進(jìn)行成品檢疫。從1992年至1995年，每年平均查出超毒不合格成品蠶種10萬(wàn)張，并及時(shí)給予了淘汰處理，為農(nóng)村絲繭育年挽回直接經(jīng)濟(jì)損失2000萬(wàn)元，減少環(huán)境凈化消毒費(fèi)300萬(wàn)元。同時(shí)，彌補(bǔ)了以母蛾檢疫法檢疫蠶種的蠶種場(chǎng)因母蛾抽樣不足或母蛾烘焦不能檢種的損失，年挽回合格蠶種15萬(wàn)張，直接經(jīng)濟(jì)效益300萬(wàn)元。另外，每年平均仲裁有爭(zhēng)議蠶種15萬(wàn)張，挽回直接經(jīng)濟(jì)損失100萬(wàn)元。
本發(fā)明的內(nèi)容結(jié)合以下實(shí)施例作更進(jìn)一步的說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容不僅限于實(shí)施例中所涉及的內(nèi)容。另外，在以下實(shí)施例中，判定蠶種成品是否合格可按附表1所列的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。在附表1中，“制種數(shù)量”一欄的盒數(shù)是指蠶卵盒數(shù)，每盒裝蠶卵25000粒；“集團(tuán)”是指以100粒蠶卵為一集團(tuán)。同時(shí)，判定過(guò)程還應(yīng)遵循下述規(guī)則a、在第一次檢查完畢后，如沒(méi)有檢出病卵集團(tuán)，則判定該蠶種成品為合格品；如檢出的病卵集團(tuán)數(shù)已達(dá)到表列不合格判定標(biāo)準(zhǔn)，則判定該蠶種成品為不合格品，亦不作第二次檢查。b、第一次檢出的病卵集團(tuán)個(gè)數(shù)未達(dá)到不合格判定標(biāo)準(zhǔn)，則作第二次檢查。c、兩次檢出的病卵集團(tuán)個(gè)數(shù)合并計(jì)算，如仍未達(dá)到不合格判定標(biāo)準(zhǔn)，則判該蠶種成品為合格品，達(dá)到者為不合格品。
實(shí)施例1在由相同產(chǎn)卵時(shí)間產(chǎn)下的一批蠶卵制得的家蠶種成品35盒中共隨機(jī)取蠶卵6克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵，并把小紙袋封貼在蠶連紙上，標(biāo)明場(chǎng)別、品種、季別、批號(hào)。將所取蠶卵卵樣在溫度為26℃、相對(duì)濕度為80％的環(huán)境中孵化12天后，得到即將孵出蟻蠶的轉(zhuǎn)青卵。此后，取小紙袋中的轉(zhuǎn)青卵3200粒，并將其分為每集團(tuán)100粒放置于乳缽中。在每100粒轉(zhuǎn)青卵中滴入1毫升2％KOH液，用乳棒磨碎。再按乳缽序號(hào)點(diǎn)板制片2套，送檢測(cè)員2人用顯微鏡輪流檢測(cè)，每點(diǎn)樣本看10個(gè)視野以上。檢測(cè)時(shí)未發(fā)現(xiàn)有微粒子孢子。根據(jù)判定規(guī)則，第一次檢測(cè)無(wú)微粒子孢子則僅進(jìn)行一次檢測(cè)，且判定此蠶種成品為合格品。
實(shí)施例2在由相同產(chǎn)卵時(shí)間產(chǎn)下的一批蠶卵制得的家蠶種成品50盒中從均布的5個(gè)取樣點(diǎn)共隨機(jī)取蠶卵8克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵，并將小紙袋封貼在蠶連紙上，標(biāo)明場(chǎng)別、品種、季別、批號(hào)。所取蠶卵卵樣在溫度為28℃、相對(duì)濕度為90％的環(huán)境中孵化10天后，得到即將孵出蟻蠶的轉(zhuǎn)青卵。此后，取小紙袋中的轉(zhuǎn)青卵3200粒，分為每集團(tuán)100粒放于乳缽中，在每100粒轉(zhuǎn)青卵中滴入2毫升2％KOH液并用乳棒磨碎。再按乳缽序號(hào)點(diǎn)板制片2套，送檢測(cè)員2人用顯微鏡輪流檢測(cè)，每點(diǎn)樣本看10個(gè)視野以上。檢測(cè)時(shí)未發(fā)現(xiàn)有微粒子孢子。根據(jù)判定規(guī)則，第一次檢測(cè)無(wú)微粒子孢子則不需進(jìn)行第二次檢測(cè)，且判定此蠶種成品為合格品。
實(shí)施例3在由相同產(chǎn)卵時(shí)間產(chǎn)下的一批蠶卵制得的家蠶種成品60盒中從均布的5個(gè)取樣點(diǎn)共隨機(jī)取蠶卵8克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵，并將小紙袋封貼在蠶連紙上，標(biāo)明場(chǎng)別、品種、季別、批號(hào)。并將所取蠶卵卵樣在溫度為30℃、相對(duì)濕度為95％的環(huán)境中孵化8天后，得到即將孵出蟻蠶的轉(zhuǎn)青卵。此后，取小紙袋中的轉(zhuǎn)青卵3200粒，分為每集團(tuán)約100粒放于乳缽中，在每100粒轉(zhuǎn)青卵中滴入3毫升2％NaOH液并用乳棒磨碎。此后，按乳缽序號(hào)點(diǎn)板制片2套，送檢測(cè)員2人用顯微鏡輪流檢測(cè)，每點(diǎn)樣本看10個(gè)視野以上。檢測(cè)時(shí)在一個(gè)集團(tuán)中發(fā)現(xiàn)有微粒子孢子，即病卵集團(tuán)數(shù)為1。根據(jù)判定規(guī)則，第一次檢測(cè)發(fā)現(xiàn)微粒子孢子則需進(jìn)行第二次檢測(cè)，即再取小紙袋中的轉(zhuǎn)青卵2200粒，分為每集團(tuán)100粒放于乳缽中，在每100粒轉(zhuǎn)青卵中滴入3毫升2％NaOH液并用乳棒磨碎，點(diǎn)盤制片檢測(cè)。經(jīng)檢測(cè)又發(fā)現(xiàn)二個(gè)集團(tuán)中有微粒子孢子，即經(jīng)兩次檢測(cè)共發(fā)現(xiàn)三個(gè)集團(tuán)有微粒子孢子，其病卵集團(tuán)數(shù)為3。按照附表1所列標(biāo)準(zhǔn)，判定此家蠶種成品為不合格品。
實(shí)施例4在由相同產(chǎn)卵時(shí)間產(chǎn)下的一批蠶卵制得的家蠶種成品75盒中從均布的5個(gè)取樣點(diǎn)共隨機(jī)取蠶卵8克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵，并將小紙袋封貼在蠶連紙上，標(biāo)明場(chǎng)別、品種、季別、批號(hào)。此后，將所取蠶卵卵樣在溫度為26℃、相對(duì)濕度為82％的環(huán)境中孵化至孵出蟻蠶，并使孵得的蟻蠶在溫度為26℃、相對(duì)濕度為82％的環(huán)境中絕食放置、自然死亡。在蟻蠶死亡后，取小紙袋中的死蟻及其卵殼3200只，分為每集團(tuán)100只放于乳缽中，在每100只死蟻及其卵殼中滴入1毫升2％KOH液并用乳棒磨碎。此后，按乳缽序號(hào)點(diǎn)板制片2套，送檢測(cè)員2人用顯微鏡檢測(cè)對(duì)檢，每點(diǎn)樣本看10個(gè)視野以上。檢測(cè)時(shí)未發(fā)現(xiàn)有微粒子孢子。根據(jù)判定規(guī)則，第一次檢測(cè)無(wú)微粒子孢子則不再進(jìn)行下一次檢測(cè)，且判定此蠶種成品為合格品。
實(shí)施例5在由相同產(chǎn)卵時(shí)間產(chǎn)下的一批蠶卵制得的家蠶種成品100盒中從均布的6個(gè)取樣點(diǎn)共隨機(jī)取蠶卵8克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵。將小紙袋封貼在蠶連紙上，標(biāo)明場(chǎng)別、品種、季別、批號(hào)。此后，將所取蠶卵卵樣在溫度為28℃、相對(duì)濕度為90％的環(huán)境中孵化至孵出蟻蠶，并使孵得的蟻蠶在溫度為28℃、相對(duì)濕度為90％的環(huán)境中絕食放置、自然死亡。蟻蠶死亡后，取小紙袋中的死蟻及其卵殼3400只，分為每集團(tuán)100只放于乳缽中，在每100只死蟻及其卵殼中滴入2毫升2％NaOH液并用乳棒磨碎。此后，按乳缽序號(hào)點(diǎn)板制片2套，送檢測(cè)員2人用顯微鏡輪流檢測(cè)，每點(diǎn)樣本看10個(gè)視野以上。檢測(cè)時(shí)在二個(gè)集團(tuán)中發(fā)現(xiàn)有微粒子孢子。根據(jù)判定規(guī)則，需進(jìn)行第二次檢測(cè)，即再取小紙袋中的死蟻及其卵殼4200只，分為每集團(tuán)100只放于乳缽中，在每100只死蟻及其卵殼中滴入2毫升2％NaOH液并用乳棒磨碎，點(diǎn)盤制片檢測(cè)。經(jīng)檢測(cè)又發(fā)現(xiàn)二個(gè)集團(tuán)中有微粒子孢子，即經(jīng)兩次檢測(cè)共發(fā)現(xiàn)四個(gè)集團(tuán)有微粒子孢子，其病卵集團(tuán)數(shù)為4。按照附表1所列標(biāo)準(zhǔn)，判定此家蠶種成品仍為合格品。
權(quán)利要求
1.一種家蠶種成品檢疫方法，其特征是按以下步驟進(jìn)行a、從相同產(chǎn)卵時(shí)間產(chǎn)下的一批蠶卵中隨機(jī)抽取部分蠶卵作為蠶卵卵樣；b、將所取蠶卵卵樣在溫度為25～31℃、相對(duì)濕度為80～98％的環(huán)境中孵化；c、以蠶卵卵樣中即將孵出蟻蠶的轉(zhuǎn)青卵或已由蠶卵孵成蟻蠶、而又在溫度為25～31℃、相對(duì)濕度為80～98％的環(huán)境中絕食放置、自然死亡的死蟻及其卵殼為檢驗(yàn)對(duì)象；d、在轉(zhuǎn)青卵或死蟻及其卵殼中滴入KOH或NaOH液，并研磨均勻；e、用顯微鏡對(duì)經(jīng)上述步驟制得的制取物進(jìn)行檢測(cè)。
2.如權(quán)利要求1所述的檢疫方法，其特征是從相同產(chǎn)卵時(shí)間產(chǎn)下的一批蠶卵中提取蠶卵卵樣時(shí)，是在均布的5個(gè)取樣點(diǎn)以上共隨機(jī)取蠶卵6～10克作為蠶卵卵樣。
3.如權(quán)利要求1或2所述的檢疫方法，其特征是在每100粒轉(zhuǎn)青卵或100只死蟻及其卵殼中滴入0.5～3毫升2％KOH或NaOH液。
全文摘要
一種家蠶種成品檢疫方法，按以下步驟進(jìn)行a.從相同產(chǎn)卵時(shí)間產(chǎn)下的一批蠶卵中隨機(jī)抽取部分蠶卵作為蠶卵卵樣；b.將所取蠶卵卵樣在溫度為25～31℃，相對(duì)濕度為80～98％的環(huán)境中孵化；c.以蠶卵卵樣中即將孵出蟻蠶的轉(zhuǎn)青卵或已由蠶卵孵成蟻蠶、而又在溫度為25～31℃，相對(duì)濕度為80～98％的環(huán)境中絕食放置，自然死亡的死蟻及其卵殼為檢驗(yàn)對(duì)象；d.在轉(zhuǎn)青卵或死蟻及其卵殼中滴入KOH或NaOH液，并研磨均勻；e.用顯微鏡對(duì)制取物進(jìn)行檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N33/48GK1162744SQ9611776
公開(kāi)日1997年10月22日 申請(qǐng)日期1996年11月1日 優(yōu)先權(quán)日1996年11月1日
發(fā)明者曾華明, 葉永林, 馮永德, 潘榮, 潘杰, 陳佑偉, 王升華, 鄧德菊 申請(qǐng)人:四川省蠶種管理總站