專利名稱：檢測肝炎病毒免疫球蛋白m抗體的免疫膠體金試劑及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于采用免疫測定法檢測肝炎所用的試劑及方法技術(shù)領(lǐng)域。
目前在臨床上用于檢測肝炎病毒免疫球蛋白M類抗體所用的一種檢測儀器為γ計(jì)數(shù)儀，采用放射免疫測定法來檢測，該儀器所用的放射性同位素很容易污染環(huán)境，不利于操作人員的身體健康，而且這種儀器價格昂貴、操作復(fù)雜，不利于廣泛推廣使用。另外一種檢測儀器為酶聯(lián)檢測儀，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法來檢測，該儀器同樣價格昂貴、而且采用活性較好的酶進(jìn)行標(biāo)記，實(shí)驗(yàn)流程較長，做一次檢測需要2～24小時，操作復(fù)雜。上述兩種檢測儀器及檢測方法僅能在科研單位和較大型醫(yī)院使用，很難得到廣泛推廣使用。
本發(fā)明的目的在于克服上述兩種測試儀器及檢測方法的缺點(diǎn)，提供一種不需要測試儀器、簡單、快速、敏感性高、重復(fù)性好、操作簡單，能準(zhǔn)確快速地檢測肝炎病毒免疫球蛋白M類抗體所用的檢測試劑以及方法。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的解決方案是以下述配比的組分為原料制成的檢測試劑氯金酸0.01～1g抗人免疫球蛋白M 0.004～0.1g蒸餾水加至1000ml應(yīng)用上述試劑檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的方法按以下次序的幾個步驟進(jìn)行將甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒核心抗原、丙型肝炎病毒抗原分區(qū)滴在硝酸纖維或醋酸纖維或醋酸纖維與硝酸纖維混合物的微孔濾膜上，干燥后加血清1～15μl；經(jīng)滲濾，加本發(fā)明檢測試劑3～20μl；滲濾后，加磷酸鉀鹽或磷酸鈉鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液50～500μl，單項(xiàng)陽性者出現(xiàn)單個紅色斑點(diǎn)，多項(xiàng)陽性者出現(xiàn)多個紅色斑點(diǎn)，無色者為陰性。
采用本發(fā)明試劑及方法可在3至5分鐘內(nèi)同時檢測出甲型肝炎病毒免疫球蛋白M抗體、乙型肝炎病毒免疫球蛋白M核心抗體、丙型肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的結(jié)果，也可在3至5分鐘內(nèi)檢測出上述三項(xiàng)中任意一項(xiàng)或任意兩項(xiàng)的結(jié)果，所用的檢測樣本量比酶聯(lián)檢測儀少10～100倍，而檢測結(jié)果與酶聯(lián)檢測儀相當(dāng)。本發(fā)明與γ記數(shù)儀、與酶聯(lián)檢測儀，以及檢測方法相比，具有操作簡便、快速、特異敏感、重復(fù)性好、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，可在大小醫(yī)療單位廣泛推廣使用。
發(fā)明人給出了本發(fā)明第一個實(shí)施例(以生產(chǎn)本發(fā)明產(chǎn)品1000ml為例)所用的原料及其配比為氯金酸0.5g抗人免疫球蛋白M 0.05g蒸餾水 加至1000ml其制備工藝如下1、原材料預(yù)處理對已購買的氯金酸和抗人免疫球蛋白M的質(zhì)量進(jìn)行檢測，其中的有效成份含量均應(yīng)符合規(guī)定的范圍，按配比稱取各原料。
蒸餾水中應(yīng)無雜質(zhì)，用蒸餾水器將蒸餾水重新蒸餾一次，或用離子交換樹脂制成去離子水。
將氯金酸溶解于蒸餾水中，配制成0.05％的氯金酸水溶液，抗人免疫球蛋白M用蒸餾水配制成0.005g/ml的水溶液。
2、氯金酸膠體金溶液的制備采用檸檬酸三鈉還原法制備氯金酸膠體金溶液。取0.01％的氯金酸水溶液100ml，加溫至沸騰，加入4ml 1％的檸檬酸三鈉水溶液，用攪拌器充分?jǐn)嚢柚辆鶆蚧旌?，加溫煮沸，制成氯金酸膠體金溶液。
3、成品制作將已配制好的抗人免疫球蛋白M水溶液倒入已制備的氯金酸膠體金溶液，用攪拌器充分?jǐn)嚢柚辆鶆蚧旌?，倒入低速離心機(jī)，經(jīng)低速離心機(jī)旋轉(zhuǎn)分離后，取上清液，再倒入高速離心機(jī)，經(jīng)高速離心機(jī)旋轉(zhuǎn)分離后，去除上清液，取沉淀物，加入1％的小牛血清白蛋白1～5g，加蒸餾水至1000ml，制成本發(fā)明試劑，經(jīng)質(zhì)量檢查合格后，放入冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 發(fā)明人給出了本發(fā)明第二個實(shí)施例(以生產(chǎn)本發(fā)明產(chǎn)品1000ml為例)所用的原料及其配比為氯金酸 0.015g抗人免疫球蛋白M0.005g蒸餾水 加至1000ml其制備工藝與第一個實(shí)施例完全相同。
發(fā)明人給出了本發(fā)明第三個實(shí)施例(以生產(chǎn)本發(fā)明產(chǎn)品1000ml為例)所用的原料及其配比為氯金酸 0.8g抗人免疫球蛋白M 0.09g蒸餾水 加至1000ml其制備工藝與第一個實(shí)施例完全相同。
發(fā)明人給出了采用本發(fā)明試劑檢測病毒性肝炎免疫球蛋白M抗體的方法的一個實(shí)施例如下將甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒核心抗原、丙型肝炎病毒抗原分區(qū)滴在硝酸纖維素膜上，干燥后加血清8μl，經(jīng)滲濾，加本發(fā)明第一個實(shí)施例檢測試劑10μl，滲濾后，加磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液200μl，單項(xiàng)陽性者出現(xiàn)單個紅色斑點(diǎn)，多項(xiàng)陽性者出現(xiàn)多個紅色斑點(diǎn)，無色者為陰性。
發(fā)明人采用本發(fā)明第一個實(shí)施例制備的檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的免疫膠體金試劑，采用本發(fā)明檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的方法的一個實(shí)施例與用酶聯(lián)檢測儀采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法對肝炎病毒免疫球蛋白M抗體、進(jìn)行了對比檢測血清標(biāo)本156份，測試結(jié)果如下用酶聯(lián)檢測儀采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測得抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性32份、抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性15份、抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性7份，抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M、抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白M雙陽性4份，抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M、抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白M和抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白M三陽性2份。用本發(fā)明檢測試劑以及采用本發(fā)明檢測方法，除抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性31份、抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性16份外，其余結(jié)果均與酶聯(lián)檢測儀采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測得的結(jié)果相符。采用兩種檢測手段和兩種檢測方法的總符合率為99.6％，若以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法為標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明檢測方法的檢測靈敏度為98％、特異度為99％。隨機(jī)抽取28份陽性標(biāo)本經(jīng)2-巰基乙醇溶液做破壞性試驗(yàn)后，再用本發(fā)明檢測方法試驗(yàn)全轉(zhuǎn)為陰性；將這28份陽性標(biāo)本用本發(fā)明檢測方法重復(fù)試驗(yàn)4次，試驗(yàn)結(jié)果完全相符。
本發(fā)明檢測試劑以及檢測方法還可用于檢測其它的病原微生物特異性免疫球蛋白M(IgM)。
權(quán)利要求
1.一種檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的免疫膠體金試劑，其特征在于它是以下述配比的組分為原料制成的檢測試劑氯金酸 0.01～1g抗人免疫球蛋白M0.004～0.1g蒸餾水 加至1000ml
2.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述的試劑檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的方法，其特征在于它按以下次序的幾個步驟進(jìn)行將甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒核心抗原、丙型肝炎病毒抗原分區(qū)滴在硝酸纖維或醋酸纖維或醋酸纖維與硝酸纖維混合物的微孔濾膜上，干燥后加血清1～15μl；經(jīng)滲濾，加本發(fā)明檢測試劑3～20μl；滲濾后，加磷酸鉀鹽或磷酸鈉鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液50～500μl，單項(xiàng)陽性者出現(xiàn)單個紅色斑點(diǎn)，多項(xiàng)陽性者出現(xiàn)多個紅色斑點(diǎn)，無色者為陰性。
全文摘要
一種檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的免疫膠體金試劑，在1000ml試劑中含氯金酸0.01～1g，含抗人免疫球蛋白M 0.004～0.1g，用本試劑檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的方法為將肝炎病毒抗原分區(qū)滴在硝酸纖維或醋酸纖維的微孔濾膜上，干燥后加血清，經(jīng)滲濾，加本發(fā)明檢測試劑，滲濾后加磷酸鉀鹽或磷酸鈉鹽或三羥甲基氨基甲烷——鹽酸，出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)者為陽性，無色者為陰性，可同時檢測多型肝炎病毒特異性免疫球蛋白M抗體。
文檔編號G01N33/576GK1140259SQ9511360
公開日1997年1月15日 申請日期1995年7月5日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月5日
發(fā)明者肖樂義, 閻小君, 陳遠(yuǎn)鑫, 李陜區(qū) 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)