本發(fā)明涉及食品安全快速檢測，特別涉及一種利用免疫膠體金法檢測新鮮蔬菜中重金屬鎘的方法。

背景技術(shù)：

1、鎘（cadmium，cd）是人體非必要的元素，也是毒性最強(qiáng)的重金屬元素之一，而且鎘元素具有蓄積性且不易消除；鎘可以通過空氣、水、食物等途徑進(jìn)入體內(nèi)，并可在人體骨骼、腎臟和肝臟等器官中蓄積，最終誘發(fā)骨科疾病，如骨軟化、骨質(zhì)疏松、肱骨疼痛等，還會誘發(fā)腎功能的減退或收到損害、貧血，嚴(yán)重時甚至?xí)鸢┳儭?/p>

2、目前重金屬鎘的檢測方法主要有原子熒光光譜法（afs）、原子吸收分光光度法(aas)、電感耦合等離子發(fā)射光譜法等等，其中，原子熒光光譜分析法具有很高的靈敏度，校正曲線的線性范圍寬，能進(jìn)行多元素同時測定；但是?原子熒光的強(qiáng)度較低?，需要用高強(qiáng)度的激發(fā)光源，才能得到測定所需的熒光強(qiáng)度；另外，由于熒光弱，導(dǎo)致雜散光對分析檢測過程中的影響較大?，使檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性降低。原子吸收分光光度法只能進(jìn)行無機(jī)元素的含量分析，不能直接用于有機(jī)化合物的含量分析和結(jié)構(gòu)分析；并且，常規(guī)原子吸收分光光度法每測一種元素，要更換一次空心陰極燈光源，不能同時進(jìn)行多元素分析。電感耦合等離子發(fā)射光譜法具有分析速度快，靈敏度高，準(zhǔn)確度精密度高，測定范圍廣的優(yōu)點，但是該方法對所采用的設(shè)備要求較高，且操作費用較高，另外，對標(biāo)準(zhǔn)參比組分要求也比較高。以上這些傳統(tǒng)的方法，所需儀器及檢測成本高昂，對操作人員、實驗環(huán)境、前處理均有較高的要求，不適合在基層現(xiàn)場實時在線檢測，無法滿足基層醫(yī)院、基層環(huán)境監(jiān)測機(jī)構(gòu)和食品檢測機(jī)構(gòu)的需求。

3、膠體金是一種由納米粒子組成的溶液，其表面容易吸附一些化合物或生物分子，形成所謂的“膠體金標(biāo)記物”。基于這個原理，免疫膠體金檢測法通過將特異性抗體等分子與膠體金顆粒共價結(jié)合，通過免疫反應(yīng)檢測樣本中的目標(biāo)物質(zhì)，使其形成肉眼可見顏色的納米顆粒聚集物，從而實現(xiàn)快速、靈敏、可視化地檢測某些生物分子。

4、目前免疫膠體金法不僅可以適用于乳制品中重金屬鉛元素的檢測，還能用于糧食等食用品中重金屬元素鎘殘留的快速定量檢測。然而，目前采用現(xiàn)有的免疫膠體金法檢測新鮮蔬菜中重金屬元素鎘的過程中，常常會出現(xiàn)以下問題：

5、1、新鮮蔬菜(葉菜蔬菜、豆類蔬菜、塊根和塊莖蔬菜、莖類蔬菜、黃花菜除外)的檢測結(jié)果不能與《gb2762?2022食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)?食品中污染物限量》所規(guī)定的檢出限統(tǒng)一，即檢測的靈敏度差；

6、2、同一檢出限的不同基質(zhì)檢測結(jié)果不同，即相同方法不同基質(zhì)檢測結(jié)果假陰、假陽率高，尤其是生姜，其檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽的概率非常高；

7、3、在酸性基質(zhì)檢測過程中會出現(xiàn)無效卡。

8、根據(jù)《gb2762?2022食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)-食品中污染物限量》中記載的內(nèi)容，蔬菜的檢出限具體見表1所示。

9、表1.不同種類蔬菜的檢出限度

10、

11、因此，急需研發(fā)一種能夠快速、便捷且適用于檢測新鮮蔬菜中是否殘留有重金屬元素鎘的方法。

12、本發(fā)明提供了一種利用免疫膠體金法檢測新鮮蔬菜中重金屬鎘的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的檢測方法，其靈敏度差、檢測結(jié)果出現(xiàn)假陰或假陽概率高以及出現(xiàn)無效檢測概率高等問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明目的是：本發(fā)明提供了一種利用免疫膠體金法檢測新鮮蔬菜中重金屬鎘的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的檢測方法的靈敏度差、檢測結(jié)果的假陰、假陽率高以及無效卡多、應(yīng)用范圍小的問題。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種利用免疫膠體金法檢測新鮮蔬菜中重金屬鎘的方法，包括：步驟一，配制待檢液體；步驟二，使用待用耗材檢測待檢液體；

3、其中，所述配制待檢液體具體包括如下步驟：

4、s1、稱取待測的樣本并放置于離心管m中，向離心管m中緩慢加入試劑a，混合均勻之后，再加入試劑b，震蕩0.5-3min，混勻后靜置，形成澄清液體；

5、所述試劑a為酸性溶液；所述試劑b為螯合劑溶液；

6、s2、使用滴管吸取離心管m中的澄清液體至離心管n中，加入試劑c，混合均勻后，配制形成待檢液體；

7、所述試劑c為中和試劑；所述中和試劑為堿性溶液或中性緩沖液。

8、優(yōu)選的，所述酸性溶液為濃硫酸溶液、濃硝酸溶液、乙酸溶液、多元有機(jī)酸溶液、多元有機(jī)酸溶液與優(yōu)化試劑的混合液中的任意一種；所述多元有機(jī)酸溶液為檸檬酸溶液、酒石酸溶液、蘋果酸溶液中的任意一種；所述優(yōu)化試劑為超純水或無機(jī)弱堿鹽溶液。

9、優(yōu)選的，所述優(yōu)化試劑為無機(jī)弱堿鹽溶液；所述多元有機(jī)酸溶液與優(yōu)化試劑的混合液中，多元有機(jī)酸溶液與優(yōu)化試劑的體積比為（2.0-4.0）:1；

10、所述無機(jī)弱堿鹽溶液為磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉中任意一種或多種的水溶液。

11、優(yōu)選的，所述多元有機(jī)酸溶液與優(yōu)化試劑的混合液中，所述多元有機(jī)酸溶液的濃度為0.03-0.1mol/l，所述優(yōu)化試劑的濃度為0.05-0.4mol/l。

12、優(yōu)選的，所述螯合劑溶液為isothiocyanobenzyl-edta的dmso溶液或edtasolutinon和氫氧化鈉的水溶液。

13、優(yōu)選的，所述中和試劑為堿性溶液；所述堿性溶液為0.01-0.2mol/l的氫氧化鈉溶液、0.01-0.5mol/l的磷酸氫二鉀溶液、0.01-0.5mol/l的磷酸二氫鉀溶液、碳酸氫鈉飽和溶液、0.01-0.4mol/l的碳酸鉀溶液、0.01-0.4mol/l的碳酸鈉溶液中的任意一種。

14、優(yōu)選的，所述中和試劑為中性緩沖溶液；所述中性緩沖溶液由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、碳酸氫鈉、氯化鈉中的任意一種或者多種與表面活性劑、防腐劑共同組合而成。

15、優(yōu)選的，所述步驟s1中，加入的所述試劑a的體積為1-3ml，加入的試劑b的體積為20-500μl；

16、所述步驟s2中，吸取的所述澄清液體的體積為25-300μl；加入的所述試劑c的體積為0-1.5ml。

17、優(yōu)選的，所述步驟s2中，配制得到的所述待檢液體的ph值為6-7.5。

18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點是：

19、（1）本技術(shù)提供了一種利用免疫膠體金法檢測新鮮蔬菜中重金屬鎘的方法，該方法首先根據(jù)蔬菜的種類和特性采用適合的方案配制待測液體，然后使用鋁箔袋封裝的待用耗材對待測液體進(jìn)行檢測；該方法操作簡單，且不需要使用昂貴儀器，對操作人員、實驗環(huán)境等要求低，檢測成本低，適合在基層、現(xiàn)場實時實施檢測，應(yīng)用范圍更廣；同時，采用該方法檢測新鮮蔬菜中是否含有重金屬元素鎘時，其檢測結(jié)果的靈敏度高，誤差較小，出現(xiàn)假陽、假陰、無效檢測的概率極低，可以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的檢測方法，其靈敏度差、檢測結(jié)果出現(xiàn)假陰或假陽概率高以及出現(xiàn)無效檢測概率高的問題。

20、（2）本技術(shù)提供的一種利用免疫膠體金法檢測新鮮蔬菜中重金屬鎘的方法，該方法可以根據(jù)蔬菜的種類和特性，在配制待測液體時，通過選擇使用合適的試劑a、試劑b、試劑c，并通過調(diào)整試劑a、試劑b、試劑c的濃度以及調(diào)整試劑b、試劑c的添加量，來調(diào)控待檢液體中酸性物質(zhì)的濃度或試劑b的含量，使檢測結(jié)果的具有較高準(zhǔn)確性；提高檢測的靈敏度，降低檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽、假陰、無效檢測的概率；同時，實現(xiàn)同一檢出限的不同基質(zhì)的檢測結(jié)果基本一致，進(jìn)而使該方法具有優(yōu)異穩(wěn)定性。另外，該檢測方法還可以快速、便捷地檢測各種蔬菜中是否含有重金屬元素鎘，擴(kuò)大該檢測方法的應(yīng)用范圍。