本發(fā)明涉及一種檢測(cè)奧希替尼含量及有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜法，屬于藥物分析領(lǐng)域。

技術(shù)背景

奧希替尼(結(jié)構(gòu)式見附圖1)分子式：c28h33n7o2·ch4o3s，黃色結(jié)晶性粉末。用于治療egfrt790m突變陽性的局部晚期或轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌的靶向藥物。它是一種口服的激酶抑制劑，用于既往經(jīng)表皮生長(zhǎng)因子受體(egfr)酪氨酸激酶抑制劑(tki)治療時(shí)或治療后出現(xiàn)的疾病進(jìn)展，并且經(jīng)檢測(cè)確認(rèn)存在egfrt790m突變陽性的局部晚期或轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞性肺癌(nsclc)成人患者的治療，并有研究在肺癌腦轉(zhuǎn)移中具有顯著治療。在我國(guó)，每年新發(fā)病的肺癌患者超過73萬人，是發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。目前關(guān)于檢測(cè)奧西替尼含量和有關(guān)物質(zhì)方面沒有研究。就此本發(fā)明采用高效液相法檢測(cè)奧西替尼的含量和有關(guān)物質(zhì)，以乙腈-磷酸緩沖液(6.8gkh2po4溶解于1l水中，h3po4調(diào)ph＝2.8)為流動(dòng)相，等度洗脫。該檢測(cè)方法簡(jiǎn)便高效，色譜峰分離度很好，分離度大于1.5，符合中國(guó)藥典2010版檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，并且色譜峰無拖尾無前延現(xiàn)象，拖尾因子t＝1.12，符合中國(guó)藥典2010版規(guī)定拖尾因子0.95～1.05。所以該檢測(cè)方法在奧希替尼含量控制和雜質(zhì)分析具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明經(jīng)多次精密試驗(yàn)提供一種更準(zhǔn)確、高效的測(cè)定奧希替尼含量和有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜法。為了達(dá)到目的，本發(fā)明用了如下技術(shù)方案:

本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，本發(fā)明采用agilent高效液相色譜儀測(cè)定奧希替尼的含量和有關(guān)物質(zhì)，以乙腈-磷酸緩沖液(6.8gkh2po4溶解于1l水中，h3po4調(diào)ph＝2.8)為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，并且經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，流動(dòng)相比例優(yōu)選27:73。

本發(fā)明又一個(gè)具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供agilenteclipseplus十八烷基鍵合硅膠色譜柱或者效能相當(dāng)?shù)纳V柱，經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明優(yōu)選agilenteclipseplus色譜柱，其分析色譜峰形較好，無拖尾峰無前延峰。

本發(fā)明另一個(gè)具體實(shí)施例中，十八烷基鍵合硅膠色譜填料顆粒為3-5μm，優(yōu)選5μm，色譜柱的長(zhǎng)度為150mm或250mm，優(yōu)選250mm。

本發(fā)明再一個(gè)具體實(shí)施例中，利用dad檢測(cè)器進(jìn)行190nm-400nm全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果奧希替尼在212nm、272nm、374nm處有最大吸收，且奧希替尼的有關(guān)物質(zhì)在272nm波長(zhǎng)下也有較好的吸收，因此優(yōu)選272nm作為奧希替尼含量和有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

本發(fā)明再一個(gè)具體實(shí)施例中，利用標(biāo)準(zhǔn)品溶液多次進(jìn)樣來確定進(jìn)樣量，進(jìn)樣精密度次數(shù)為5次，所得最佳進(jìn)樣量為5μl。

本發(fā)明還有一個(gè)具體實(shí)施例中，所述流動(dòng)相的流速為0.5～1.2ml/min，優(yōu)選1ml/min。

本發(fā)明提供一種hplc法測(cè)定奧希替尼含量和有關(guān)物質(zhì)的方法，其步驟如下：

標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制：取奧希替尼標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇溶解并定容，配制濃度為1.5mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

供試品溶液配制：取實(shí)驗(yàn)室的奧希替尼適量，用甲醇溶解并定容，配制濃度為1.5mg/ml的供試品溶液。

對(duì)照品溶液配制：取上述奧希替尼標(biāo)準(zhǔn)品溶液1ml置于25ml容量瓶，用甲醇稀釋并定容，配制濃度為0.06mg/ml的對(duì)照品溶液。

附圖說明

圖1為奧希替尼結(jié)構(gòu)式

圖2為奧希替尼供試品液相色譜圖

圖3為奧希替尼標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

圖4為奧希替尼對(duì)照品液相色譜圖

圖5為奧希替尼檢測(cè)波長(zhǎng)液相色譜圖

實(shí)施方式

色譜條件：

采用美國(guó)agilent高效液相色譜儀，agilenteclipseplus色譜柱c18(250×4.6mm5μm)，流動(dòng)相以乙腈-磷酸緩沖液(6.8gkh2po4溶解于1l水中，h3po4調(diào)ph＝2.8)＝27:73，檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm，流速為1ml/min，進(jìn)樣量為5μl。

分別取上述供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液，注入液相色譜儀，按照本發(fā)明的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，含量按如下公式1計(jì)算：

奧希替尼含量(％)＝(a1×c2)/(a2×c1)

其中，a1是供試品峰面積

a2是標(biāo)準(zhǔn)品峰面積

c1是供試品濃度(mg/ml)

c2是標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/ml)。

分別取上述供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，按照本發(fā)明的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，供試品如有雜質(zhì)峰，雜質(zhì)按如下公式2計(jì)算：

奧希替尼有關(guān)物質(zhì)含量(％)＝(a×1×10×w2)/(b×10×200×w1)

其中，a是供試品溶液中雜質(zhì)峰的峰面積

b是對(duì)照品溶液中奧希替尼的峰面積

w1是配制奧希替尼供試品溶液稱重時(shí)的質(zhì)量

w2是配制奧希替尼對(duì)照品溶液稱重時(shí)的質(zhì)量。

實(shí)施例1

實(shí)驗(yàn)材料：本公司實(shí)驗(yàn)室已標(biāo)定奧希替尼供試品含量為99.2％，單雜為0.19％，總雜為0.36％，奧希替尼標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自美國(guó)sigma公司，含量為99.0％。

色譜條件：采用美國(guó)agilent高效液相色譜儀，agilenteclipseplus色譜柱c18(250×4.6mm5μm)，流動(dòng)相以乙腈-磷酸緩沖液(6.8gkh2po4溶解于1l水中，h3po4調(diào)ph＝2.8)＝27:73，檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm，流速為1ml/min，進(jìn)樣量為5μl。

實(shí)驗(yàn)步驟：

取本公司實(shí)驗(yàn)室奧希替尼適量，用甲醇溶解并定容，配制濃度為1.5mg/ml的奧希替尼供試品溶液，供試品溶液平行配制3次。

取藥檢所購(gòu)買的奧希替尼標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇溶液并定容，配制濃度為1.5mg/ml的奧希替尼標(biāo)準(zhǔn)品溶液，標(biāo)準(zhǔn)品溶液平行配制3次。

分別取上述供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，按照本發(fā)明色譜條件進(jìn)行檢測(cè)并記錄數(shù)據(jù)，其中同一標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)進(jìn)樣6次，供試品溶液和對(duì)照品溶液所得峰面積按上述含量計(jì)算公式1，計(jì)算供試品中奧希替尼的含量。

圖2是供試品奧希替尼的色譜圖，奧希替尼主峰保留時(shí)間是6.21min，供試品中分離出3個(gè)雜質(zhì)峰，保留時(shí)間為4.02min、4.38min和8.87min，3個(gè)雜質(zhì)峰的離度分別為1.63、6.1和7.6，分離效果良好(均大于1.5)符合2010版中國(guó)藥典的標(biāo)準(zhǔn)。其中4.38min的雜質(zhì)純度是0.035％，根據(jù)分析處理標(biāo)準(zhǔn)純度低于0.1％以下的，可忽略不計(jì)其含量。圖3是標(biāo)準(zhǔn)品奧希替尼的色譜圖，將標(biāo)準(zhǔn)品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次所得峰面積rsd值為0.36％，可見該檢測(cè)方法重復(fù)性良好。供試品和標(biāo)準(zhǔn)品3個(gè)樣品峰面積平均值分別為8092.66和8061.79，按上述含量計(jì)算公1計(jì)算本公司實(shí)驗(yàn)室奧希替尼含量為99.38％，計(jì)算結(jié)果如下表1。

表1供試品奧希替尼含量檢測(cè)結(jié)果如下表

結(jié)果表明檢測(cè)奧希替尼含量的方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、可用于奧希替尼原料藥或者丸劑含量檢測(cè)和雜質(zhì)分析。

實(shí)施例2

實(shí)驗(yàn)材料：本公司實(shí)驗(yàn)室已標(biāo)定奧希替尼供試品含量為99.2％，單雜為0.19％，總雜為0.36％，奧希替尼標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自美國(guó)sigma公司，含量為99.0％。

色譜條件：采用美國(guó)agilent高效液相色譜儀，agilenteclipseplus色譜柱c18(250×4.6mm5μm)，流動(dòng)相以乙腈-磷酸緩沖液(6.8gkh2po4溶解于1l水中，h3po4調(diào)ph＝2.8)＝27:73，檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm，流速為1ml/min，進(jìn)樣量為5μl。

實(shí)驗(yàn)步驟：

分別取實(shí)施例1中的供試品溶液和上述濃度為0.06mg/ml的對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀中，按照本發(fā)明色譜條件進(jìn)行測(cè)定并記錄供試品溶液中雜質(zhì)的峰面積，按上述計(jì)算公式2計(jì)算奧希替尼的雜質(zhì)含量。

圖4為對(duì)照品溶液色譜圖，其中供試品溶液雜質(zhì)峰面積分別為14.98和11.64，對(duì)照品溶液峰面積為304.51，將供試品溶液中雜質(zhì)峰面積與對(duì)照品峰面積代入公式計(jì)算，兩個(gè)雜質(zhì)含量分別為0.19％和0.15％，總雜為0.34％。

結(jié)果表明本發(fā)明提供奧希替尼有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、可用于奧希替尼原料藥或者丸劑的雜質(zhì)含量控制和雜質(zhì)分析。