本發(fā)明屬于化學(xué)檢測領(lǐng)域，尤其是一種ase-hplc法測定陳皮中橙皮苷含量的方法。
背景技術(shù)：
：《中國藥典》2015年版一部制備供試品方法：取本品粗粉約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80ml，加熱回流2～3小時(shí)，棄去石油醚，藥渣揮干，加甲醇80ml，再加熱回流至提取液無色，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。該方法回流時(shí)間較長，且對技術(shù)人員的專業(yè)水平要求較高。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對上述不足，本發(fā)明旨在提供一種ase-hplc法測定陳皮中橙皮苷含量的方法，該方法提取時(shí)間短、且檢測精度高。為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)效果，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種ase-hplc法測定陳皮中橙皮苷含量的方法，依次包括下述步驟：步驟1：采用ase法萃取陳皮粉末，并收集甲醇萃取液；步驟2：采用hplc法測定甲醇萃取液中橙皮苷的含量。優(yōu)選地，步驟1所述的萃取包括先用石油醚萃取，再用甲醇萃取。優(yōu)選地，所述的步驟1包括下述子步驟：步驟s1：將陳皮樣品粉碎，取1g與1g硅藻土混合；步驟s2：將步驟1所得的混合物裝于放有纖維濾膜的ase萃取池中，加硅藻土至與池口平行；步驟s3：先用石油醚萃取，棄去萃取液；再用甲醇作為萃取液萃取，萃取結(jié)束后，用甲醇將其定容至100ml，即可。優(yōu)選地，步驟s3所述的石油醚的使用溫度為60～90℃。優(yōu)選地，步驟s3所述的使用石油醚萃取的參數(shù)為：溫度為75℃，時(shí)間為3min，次數(shù)為1次，沖洗體積為60％，吹掃時(shí)間為60s；優(yōu)選地，步驟s3所述的使用甲醇萃取的參數(shù)為：溫度為100℃，時(shí)間為8min，次數(shù)為3次，沖洗體積為60％，吹掃時(shí)間為60s。優(yōu)選地，步驟1所述的hplc法的檢測參數(shù)為：色譜柱為ace,ultracoresuperc18；柱溫為40℃；流速為0.3ml/min；流動(dòng)相為甲醇-醋酸-水；檢測波長為283nm。優(yōu)選地，所述的色譜柱的規(guī)格為2.5μm，2.1*75mm。優(yōu)選地，所述的流動(dòng)相為體積比等于35:4:61的甲醇-醋酸-水。本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明參考藥典方法，先用石油醚(60～90℃)除雜，再用甲醇提取，獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本發(fā)明采用3因素3水平正交實(shí)驗(yàn)方案l9(33)安排實(shí)驗(yàn)，考察了采用甲醇作為萃取溶劑時(shí)萃取溫度、靜態(tài)萃取時(shí)間、循環(huán)次數(shù)，3個(gè)因素對加速溶劑萃取陳皮中橙皮苷的影響，確定從陳皮中提取橙皮苷的最佳快速溶劑萃取工藝。附圖說明圖1為以橙皮苷對照品進(jìn)樣的絕對量(mg)-峰面積進(jìn)行的線性回歸圖；圖2為橙皮苷對照品的色譜圖；圖3為采用ase法所得的供試品溶液的色譜圖；圖4為采用藥典方法所得的供試品溶液的色譜圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)所做的有限次修改，仍在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例11、儀器設(shè)備及試劑1.1儀器：電子分析天平(xa205du)、ase350快速溶劑萃取儀(美國dionex公司)、agilent1290液相色譜儀1.2試劑：水：符合gb/t6682規(guī)定的一級水；甲醇(ch4o)：色譜純(液相色譜用)。2、方法2.1對照品溶液的制備：取橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。2.2供試品溶液的制備2.2.1《中國藥典》2015年版一部制備供試品方法：取本品粗粉約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80ml，加熱回流2～3小時(shí)，棄去石油醚，藥渣揮干，加甲醇80ml，再加熱回流至提取液無色，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。2.2.2快速溶劑萃取法(ase)制備供試品方法：樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，取粗粉約1g，精密稱定，與約1g硅藻土混合均勻，待用，移入到預(yù)先放好纖維濾膜的ase10ml萃取池中再加入適量硅藻土，輕輕振搖使之與池口在同一水平線上，擰緊萃取池上蓋，放入快速萃取儀中進(jìn)行萃取。先用石油醚(60～90℃)萃取，棄去萃取液；再用甲醇作為萃取液萃取，萃取結(jié)束后，把萃取液轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。2.3ase萃取條件所述的第一次萃取步驟的參數(shù)為：溫度為75℃，時(shí)間為3min，次數(shù)為1次，沖洗體積為60％，吹掃時(shí)間為60s；所述的第二次萃取步驟的參數(shù)為：溫度為100℃，時(shí)間為8min，次數(shù)為3次，沖洗體積為60％，吹掃時(shí)間為60s。2.4色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)a)儀器：agilent1290；b)色譜柱：ace,ultracoresuperc18，2.5μm，2.1*75mm；c)柱溫：40℃；d)流速：0.3ml/min；e)流動(dòng)相：：甲醇-醋酸-水(35:4:61)；f)檢測波長：283nm；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。2.5測定法照高效液相色譜法(通則0512)測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1μl，注入液相色譜儀，測定，即得。2.6標(biāo)準(zhǔn)限值要求本品按干燥品計(jì)算，含橙皮苷(c28h34o15)不得少于3.5％。2.7計(jì)算(外標(biāo)法)式中cr——對照品溶液濃度，單位為微克每升(mg/l)；ax——供試品的峰面積；ar——對照品峰面積。注意：使用前萃取池底部應(yīng)拆卸清理干凈，否則容易引起壓力不穩(wěn)；萃取池底部的濾紙應(yīng)在密封圈內(nèi)，否則引起滲漏；萃取池裝樣時(shí)松緊適中，太松容易導(dǎo)致提取液過多；開機(jī)前檢查氣瓶氣壓是否達(dá)到1mpa；使用結(jié)束后清理干凈，萃取池要及時(shí)晾干(容易生銹)。3、結(jié)果3.1線性關(guān)系取橙皮苷對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml約含0.4mg的溶液，即得，然后分別精密吸取該溶液0.2μl、0.5μl、0.8μl、1.0μl、1.5μl、2.0μl進(jìn)入lc測定，并依照上述方法測定，結(jié)果詳見表1。以進(jìn)樣絕對量(mg)-峰面積進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程：橙皮苷y＝4794.1314x+41.4331，r2＝1.0000,橙皮苷在0.0822～0.8215mg圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，詳見圖1。表1線性實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)樣絕對量(mg)第一針峰面積第二針峰面積平均峰面積0.0822421.79071437.20343429.497070.20541032.550291021.528691027.039490.32861622.848511629.015751625.932130.41082010.518432001.511602006.015020.61613003.706542998.187993000.947270.82153977.982183971.106453974.544323.2精密度和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取橙皮苷對照品溶液(0.3286mg/ml)，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，峰面積rsd為0.7％，表明儀器精密度良好。取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于0，2，4，6，8，12h依法測定。結(jié)果橙皮苷峰面積的rsd為0.3％，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。所測得的色譜圖詳見圖2至圖4，其中圖2為橙皮苷對照品的色譜圖，圖3為采用ase法所得的供試品溶液的色譜圖，圖4為采用藥典方法所得的供試品溶液的色譜圖。3.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取相同批號(批號20150801)的樣品1g，共9份，精密稱定，按上述ase提取方法提取供試品溶液，進(jìn)樣量為1μl，以上述的色譜條件平行試驗(yàn)，測得樣品中橙皮苷的含量見表2，rsd為1.9％，結(jié)果表明ase提取方法重復(fù)性良好。表2重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.4樣品不同儀器提取結(jié)果及與藥典方法結(jié)果比較(3批)表3不同ase儀的提取結(jié)果比較表4ase法與藥典方法的提取結(jié)果比較4、討論：4.1ase提取溶劑的選擇：本發(fā)明參考藥典方法，先用石油醚(60～90℃)除雜，再用甲醇提取，獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。4.2ase提取條件的優(yōu)化采用3因素3水平正交實(shí)驗(yàn)方案l9(33)安排實(shí)驗(yàn)，考察了采用甲醇作為萃取溶劑時(shí)萃取溫度、靜態(tài)萃取時(shí)間、循環(huán)次數(shù)，3個(gè)因素對加速溶劑萃取陳皮中橙皮苷的影響(見表5)。確定從陳皮中提取橙皮苷的最佳快速溶劑萃取工藝，結(jié)果見表6。表5因素水平表6正交實(shí)驗(yàn)極差分析結(jié)果由極差分析可以看出，提取溫度對橙皮苷的含量影響最大，其次是靜態(tài)萃取時(shí)間和提取次數(shù)。最終確定最佳提取工藝組合為提取溫度100℃，提取時(shí)間8min，提取次數(shù)3次。以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁12