本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及一種舒筋活血丸的質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
：舒筋活血丸為土鱉蟲、桂枝、紅花、桃仁、骨碎補(bǔ)、牛膝、梔子、白芷、續(xù)斷、三七、大黃、赤芍、熟地黃、蘇木、乳香、兒茶、當(dāng)歸、馬錢子、冰片、自然銅等20味藥材粉碎成細(xì)粉后加入蜂蜜制備成的丸劑；味苦，澀。其功能主治為舒筋通絡(luò)，活血止痛。用于跌打損傷，閃腰岔氣，筋斷骨折，瘀血痛?，F(xiàn)舒筋活血丸在臨床上已經(jīng)廣泛應(yīng)用，但由于自然銅為舒筋活血丸處方中的主要成分，起到散瘀、接骨、止痛等作用，其主要成分為二硫化鐵(fes2)，另有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道自然銅中還含有鉛、砷、鎘、銅、砷等重金屬，因此考慮到廣大患者，為了更好地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，對舒筋活血丸中三七、骨碎補(bǔ)進(jìn)行了鑒別研究，對舒筋活血丸中鉛、鎘、砷、汞、銅五種重金屬含量進(jìn)行了含量檢測與限量控制。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種舒筋活血丸的質(zhì)量檢測方法，其具有專屬性強(qiáng)、分離度好等特點(diǎn)。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種舒筋活血丸的質(zhì)量檢測方法，包括對三七的鑒別、對骨碎補(bǔ)的鑒別以及重金屬的檢測，其中，三七的鑒別包括以下步驟：供試品溶液a的制備：取舒筋活血丸7g，剪碎加甲醇50ml加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過，將濾液蒸干，將殘?jiān)D(zhuǎn)移至分液漏斗中，先加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液；再加氨試液洗滌2次，每次20ml；再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，得供試品溶液a；對照品溶液a的制備：取人參皂苷rb1、人參皂苷rg1對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液a；吸取供試品溶液a、對照品溶液a各5μl分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃放置的下層溶液為展開劑，展開，顯色；骨碎補(bǔ)的鑒別包括以下步驟：供試品溶液b的制備：取舒筋活血丸30g，加硅藻土分散，加三氯甲烷150ml超聲提取2次，每次30分鐘，放冷，濾過，將濾液蒸干，得濾渣，向殘?jiān)屑右宜嵋阴?50ml，超聲30分鐘，濾過，蒸干濾液，向殘?jiān)蛹状?ml使溶解，得供試品溶液b；對照品溶液b的制備：取柚皮苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，得對照品溶液b；吸取對照品溶液b4μl，供試品溶液b10μl分別點(diǎn)于同一硅膠g預(yù)制薄層板上，條帶狀點(diǎn)樣，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1:12:2.5:3)上層溶液為展開劑，展開，顯色；重金屬的檢測包括以下步驟：供試品溶液c的制備：取供試品粉末0.1g，置凱氏燒瓶中，加硝酸-高氯酸混合溶液10ml，混勻，浸泡過夜；加熱消解，將消解液轉(zhuǎn)入50ml量瓶中，用2％硝酸溶液洗滌凱氏燒瓶，將洗液合并于量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液c；供試品溶液d的制備：取供試品粉末0.1g，置凱氏燒瓶中，加硝酸-高氯酸混合溶液10ml，混勻，浸泡過夜；加熱至完全消解，向消解液中加20％硫酸溶液10ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，在滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，轉(zhuǎn)入50ml量瓶中，用水洗滌開始燒瓶，洗液合并于量瓶中，用水稀釋至刻度，即得供試品溶液d。進(jìn)一步的，三七的鑒別步驟中，還包括陰性供試品溶液a的制備：按處方量，取除三七外的其它藥材粉，混勻，加煉蜜制成三七陰性樣品，按供試品溶液a的制備方法制成陰性對照溶液a。進(jìn)一步的，三七的鑒別步驟中，硅膠g薄層板晾干后，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。進(jìn)一步的，骨碎補(bǔ)的鑒別步驟中，還包括陰性供試品溶液b的制備：按處方量，取除骨碎補(bǔ)外的其它藥材粉，混勻，加煉蜜制成骨碎補(bǔ)陰性樣品，按供試品溶液b的制備方法制成陰性對照溶液b。進(jìn)一步的，骨碎補(bǔ)的鑒別步驟中，硅膠g薄層板晾干后，噴以三氯化鋁試液，在365nm紫外燈下檢視。進(jìn)一步的，重金屬檢測步驟中，還包括鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鉛1μg的溶液。進(jìn)一步的，重金屬檢測步驟中，還包括鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鎘1μg的溶液。進(jìn)一步的，重金屬檢測步驟中，還包括砷標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含砷1μg的溶液。進(jìn)一步的，重金屬檢測步驟中，還包括汞標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含汞1μg的溶液。進(jìn)一步的，重金屬檢測步驟中，還包括銅標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含銅10μg的溶液。本發(fā)明的有益效果為：1.本發(fā)明的方法能夠有效對舒筋活血丸制劑進(jìn)行處理，采用甲醇、正丁醇飽和的水溶液提取，并用氨試液洗滌，不但操作簡單，而且能夠有效提取三七中人參皂苷rb1、人參皂苷rg1，同時(shí)排除其他成分的干擾；2.三七鑒別中采用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水體系，能夠使人參皂苷rb1、人參皂苷rg1兩個(gè)組分均有較好的溶質(zhì)遷移距離，獲得較為理想的比移值，同時(shí)能夠保證兩個(gè)成分之間良好的分離度，且背景無干擾；3.本發(fā)明的方法能夠有效對舒筋活血丸制劑進(jìn)行處理，采用硅藻土分散、三氯甲烷溶解提取，并依次使用乙酸乙酯、甲醇進(jìn)行提取溶解，不但操作簡單，而且能夠有效提取骨碎補(bǔ)中柚皮苷成分，同時(shí)排除其他成分的干擾；4.骨碎補(bǔ)鑒別中采用甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水體系，以其上層溶液為展開劑，獲得較為理想的比移值，同時(shí)背景無干擾；5.舒筋活血丸制劑中自然銅是該處方中的主要成分，起到散瘀，接骨，止痛的作用，自然銅中還含鉛、砷、鎘、銅、鎳、砷、銻等雜質(zhì)，從而致使舒筋活血丸(小蜜丸)中含有重金屬，因此，將重金屬檢測納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有重要意義；6.本發(fā)明的重金屬檢測方法，有效針對舒筋活血丸制劑，重復(fù)性、精密度、加樣回收率等結(jié)果均符合要求，因此，能夠準(zhǔn)確檢測制劑中重金屬的含量。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)的描述。顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動的前提下所得到的所有其它實(shí)施方式，都屬于本發(fā)明所保護(hù)的范圍。實(shí)施例1三七的鑒別1.進(jìn)行了藥材的鑒別：判定藥材中目標(biāo)成分的有無及方法的適用性。1.1對照品的制備人參皂苷rb1、人參皂苷re、人參皂苷rg1，加甲醇制備成每ml各含0.5mg的混合液，作為對照品溶液。1.2.三七藥材制備三七藥材粉末0.5g加水5滴攪勻，加水飽和正丁醇5ml振搖10分鐘，放置2h，離心，取上清液，加3倍量正丁醇飽和的水搖勻，放置使分層，取正丁醇層，蒸干殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為藥材試液。1.3點(diǎn)樣、展開分別吸取三七藥材供試品溶液和對照品溶液各1ul，點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開、取出、晾干，噴以硫酸溶液(1→10)于105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視。1.4.結(jié)果，在藥材色譜與對照品色譜在相同位置，有相同顏色斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)。2.舒筋活血丸成品中三七藥材的鑒別2.1供試品的制備(方法一)方法一、取舒筋活血丸樣品10g，加適量硅藻土分散，取200ml石油醚(30～60℃)超聲50分鐘，棄去石油醚液，藥渣揮干，加200ml三氯甲烷超聲30分鐘，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干，加100ml水飽和正丁醇超聲30分鐘，濾過，濾液加0.5％氫氧化鈉溶液振搖2次，每次100ml，用水洗滌至中性，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。2.2點(diǎn)樣、展開吸取對照品溶液5ul、藥材溶液5ul，供試品溶液分別5ul、10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開、取出、立即吹干，噴以10％硫酸溶液于110℃加熱至斑點(diǎn)清晰，分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視。2.3.結(jié)果，供試品色譜在與在藥材色譜及對照品色譜中與對照品rg1、re在相同位置，有相同顏色斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)，供試品在對照品rb1處無明顯斑點(diǎn)，考慮在去雜質(zhì)的過程中損失較多，因此需改變提取溶劑及去雜質(zhì)方式。2.4供試品的制備(方法二)：在方法一實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，去掉石油醚去雜質(zhì)，改用氨試液洗滌去雜質(zhì)。方法二、取舒筋活血丸樣品10g，剪碎，加甲醇50ml，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液蒸干，加水20ml使溶解，加水飽和正丁醇振搖提取3次，每次30ml，分取正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次200ml，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。2.5.點(diǎn)樣、展開取對照品、對照藥材、供試品溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視。比移值：rg1rf1＝7.5cm/12.2cm＝0.615rb1rf2＝2.2cm/12.2cm＝0.1802.6.按方法二對舒筋活血丸三七陰性樣品進(jìn)行提取制備及點(diǎn)樣展開，結(jié)果陰性無干擾，專屬性良好。因此選定第二種方法對舒筋活血丸中的三七進(jìn)行人參皂苷rg1及人參皂苷rb1的鑒別。實(shí)施例2骨碎補(bǔ)的鑒別1.進(jìn)行了藥材的鑒別：判定藥材中目標(biāo)成分的有無及方法的適用性1.1對照品的制備取柚皮苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。1.2.藥材的制備取柚皮苷藥材粉末0.5g，加甲醇30ml，加熱回流1h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為藥材溶液。1.3.點(diǎn)樣、展開(方法一)吸取上述藥材溶液及對照品溶液各4ul，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1:12:0.5:3)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。1.4.結(jié)果：藥材斑點(diǎn)分離效果不理想，考慮展開劑的極性及薄層板的性質(zhì)上進(jìn)行調(diào)整。1.5.點(diǎn)樣、展開(方法二)：在方法一的基礎(chǔ)上調(diào)整展開劑比例，并采用預(yù)制板。吸取上述藥材溶液及對照品溶液各4ul，分別點(diǎn)于同一硅膠g預(yù)制板上，條帶裝點(diǎn)樣，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1:12:2.5:3)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。1.6結(jié)果：藥材色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。2.進(jìn)行了舒筋活血丸中骨碎補(bǔ)的鑒別：將藥材調(diào)整后的方法直接應(yīng)用于成品中。2.1.供試品的制備取舒筋活血丸樣品40g，加適量硅藻土分散，加三氯甲烷超聲2次，每次30分鐘，每次150ml，濾過，棄去濾液，藥渣揮干，藥渣加乙酸乙酯150ml超聲30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。2.2.點(diǎn)樣、展開吸取藥材溶液、對照品溶液各4ul，供試品溶液10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠g預(yù)制板上，條帶裝點(diǎn)樣，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1:12:2.5:3)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。柚皮苷比移值：rf＝7.0cm/11.8cm＝0.5932.3.結(jié)果，供試品溶液色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰。實(shí)施例3重金屬的檢測1儀器及試藥1.1儀器島津aa-6800原子吸收分光光度計(jì)、石墨爐原子化器、自動進(jìn)樣器、空心陰極燈、熱解涂層石墨管、氫化發(fā)生器，恒溫水浴振蕩器，電熱板。1.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(國家有色金屬及材料分析測試中心gsb04-1742-2004)鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(國家有色金屬及材料分析測試中心gsb04-1721-2004)砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(國家有色金屬及材料分析測試中心gsb04-1714-2004)汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(國家有色金屬及材料分析測試中心gsb04-1729-2004)銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(國家有色金屬及材料分析測試中心gsb04-1725-2004)1.3試劑鹽酸為優(yōu)級純(天津耀華化學(xué)試劑有限公司，批號20121020)，硝酸為優(yōu)級純(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號20130906)，高氯酸優(yōu)級純(天津時(shí)刻繆化學(xué)試劑開發(fā)中心監(jiān)制，批號20110212)，硫酸(天津耀華化學(xué)試劑有限公司，批號20070921)，胃蛋白酶(中國惠世生化試劑有限公司，批號20120208)，鹽酸羥胺(汕頭市化學(xué)試劑廠,批號20090627)，抗壞血酸(天津市石英鐘廠霸州市化工分廠，批號20120429)。1.5樣品舒筋活血丸(小蜜丸)：規(guī)格為每10丸重2.0g；批號：20110401、20110402、20110403。2分析方法的研究2.1供試品溶液的制備2.1.1供試品中鉛、鎘、砷、銅的供試品溶液制備方法取供試品粉末0.1g，精密稱定，置凱氏燒瓶中，加硝酸-高氯酸(4:1)混合溶液10ml，混勻，瓶口加一小漏斗，浸泡過夜。置于電熱板上加熱消解，持續(xù)加熱至溶液澄明后升高溫度，繼續(xù)加熱至冒濃煙，直至白煙散盡，消解液呈無色透明或略帶黃色，放冷，轉(zhuǎn)入50ml量瓶中，用2％硝酸溶液洗滌容器，洗液合并于量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。2.1.2供試品中汞的供試品溶液制備方法取供試品粉末0.1g，精密稱定，置凱氏燒瓶中，加硝酸-高氯酸(4:1)混合溶液10ml，混勻，瓶口加一小漏斗，浸泡過夜。置于電熱板上，于120～140加熱消解，加熱消解直至完全消解，放冷，加20％硫酸溶液10ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，轉(zhuǎn)入50ml量瓶中，用水洗滌容器，洗液合并于量瓶中，用水稀釋至刻度。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備2.2.1鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鉛(pb)1μg的溶液，即得(0-5℃貯存)。2.2.2鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鎘(cd)1μg的溶液，即得(0-5℃貯存)。2.2.3砷標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含砷(as)1μg的溶液，即得(0-5℃貯存)。2.2.4汞標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含汞(hg)1μg的溶液，即得(0-5℃貯存)。2.2.51銅標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含銅(cμ)10μg的溶液，即得(0-5℃貯存)。2.3測定方法照《中國藥典》2010版鉛、鎘、砷、汞、銅測定法(附錄ⅸb原子吸收分光光度法)測定。3方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制測定法：照《中國藥典》2015版第四部鉛、鎘、砷、汞、銅測定法(2321)測定，即得。3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制表1鉛、鎘、砷、汞、銅的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制結(jié)果3.2供試品溶液制備方法的考察3.2.1不同制備方法方法一人工胃液法：a)鉛、砷、鎘、銅供試液的制備取供試品粉末0.5g，精密稱定，加入人工胃液(按《中國藥典》2010年版一部附錄?a制備)100ml，于37℃恒溫水浴振蕩提取1小時(shí)，離心(4000r·min-1)1小時(shí)，取上清液4ml置凱氏燒瓶中，加硝酸-高氯酸(4:1)混合溶液10ml，混勻，瓶口加一小漏斗，浸泡過夜。置于電熱板上加熱消解，持續(xù)加熱至溶液澄明后升高溫度，繼續(xù)加熱至冒濃煙，直至白煙散盡，消解液呈無色透明或略帶黃色，放冷，轉(zhuǎn)入50ml量瓶中，用2％硝酸溶液洗滌容器，洗液合并于量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。b)汞的供試品溶液制備取供試品粉末0.5g，精密稱定，加入人工胃液(按《中國藥典》2010年版一部附錄?a制備)100ml，于37℃恒溫水浴振蕩提取1小時(shí)，離心(4000r·min-1)1小時(shí)，取上清液4ml置凱氏燒瓶中，加硝酸-高氯酸(4:1)混合溶液10ml，混勻，瓶口加一小漏斗，浸泡過夜。置于電熱板上，于120～140加熱消解，加熱消解直至完全消解，放冷，加20％硫酸溶液10ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，轉(zhuǎn)入50ml量瓶中，用水洗滌容器，洗液合并于量瓶中，用水稀釋至刻度。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。方法二2010版《中國藥典》方法a)鉛、砷、鎘、銅供試液的制備取供試品粉末0.1g，精密稱定，置凱氏燒瓶中，加硝酸-高氯酸(4:1)混合溶液10ml，混勻，瓶口加一小漏斗，浸泡過夜。置于電熱板上加熱消解，持續(xù)加熱至溶液澄明后升高溫度，繼續(xù)加熱至冒濃煙，直至白煙散盡，消解液呈無色透明或略帶黃色，放冷，轉(zhuǎn)入50ml量瓶中，用2％硝酸溶液洗滌容器，洗液合并于量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。b)汞的供試品溶液制備取供試品粉末0.1g，精密稱定，置凱氏燒瓶中，加硝酸-高氯酸(4:1)混合溶液10ml，混勻，瓶口加一小漏斗，浸泡過夜。置于電熱板上，于120～140加熱消解，加熱消解直至完全消解，放冷，加20％硫酸溶液10ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，轉(zhuǎn)入50ml量瓶中，用水洗滌容器，洗液合并于量瓶中，用水稀釋至刻度。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。表2不同方法制備供試液的酸可溶性重金屬含量結(jié)果元素含量方法一方法二鉛10.13μg/g12.5μg/g鎘0.58μg/g1.0μg/g砷4.52μg/g5.06μg/g汞未檢出0.014μg/g銅未檢出11μg/g結(jié)論：從兩種方法測得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)上看，采用藥典方法重金屬測得值相對較大，且五種酸可溶性重金屬均可測出，而方法一是采用人工胃液模擬人體胃液環(huán)境，測得值相對小于方法二測得值，雖然此方法更符合人體所能吸收的程度，消解樣品用時(shí)亦較短，但供試品溶液不十分穩(wěn)定，放置后易滋生細(xì)菌，不便于生產(chǎn)實(shí)際過程中的檢驗(yàn)，且不能將五種重金屬全部檢出，因此，綜合考慮，選定方法二為供試品制備方法。3.2.2不同取樣量將舒筋活血丸成品粉碎，分別稱取0.1g、0.3g分別按照供試品制備方法制備成供試品溶液，測定酸可溶性重金屬含量，測定時(shí)發(fā)現(xiàn)，稱取樣品0.1g時(shí)，可以檢測出各元素含量，稱取樣品0.3g時(shí)，吸收度大，超出檢測限，故樣品取樣量0.1g較適宜。3.3精密度試驗(yàn)分別精密進(jìn)樣鉛、鎘、砷、汞、銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照各元素測定方法，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，各元素測定結(jié)果見下表。結(jié)果表明精密度較好。表3精密度試驗(yàn)結(jié)果3.4陰性樣品試驗(yàn)參照《中國藥典》2010年版及相關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)舒筋活血丸(小蜜丸)的處方組成成份，可知成品中酸可溶性重金屬主要來源于原料中的自然銅，自然銅為礦物藥，其主要成分為二硫化鐵(fes2)，另含有鐵、金、汞、鎘、砷、鉛等元素，因此，制備了不含自然銅的舒筋活血丸(小蜜丸)陰性樣品，并制備成供試液，進(jìn)行了酸可溶性重金屬的含量測定，同時(shí)對成品及2批自然銅原料進(jìn)行測定，結(jié)果見表。結(jié)果表明陰性成品(不含自然銅)中酸可溶性重金屬含量很低或未檢出。表4陰性成品酸可溶性重金屬含量測定結(jié)果元素鉛鎘砷汞銅陰性樣品1.277μg/g未檢出未檢出未檢出未檢出成品12.46μg/g0.1μg/g5.06μg/g0.014μg/g11μg/g自然銅原料140.39μg/g2.32μg/g71.25μg/g未檢出未檢出自然銅原料247.56μg/g2.12μg/g68.17μg/g未檢出未檢出3.5重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品6份，分別精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備成6份供試品溶液，分別進(jìn)樣，測定，并計(jì)算含量平均值及rsd(％)，結(jié)果見表。結(jié)果表明重復(fù)性良好。表5重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果3.6加樣回收率試驗(yàn)稱取已知含量的樣品6份，分別加入單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，按供試品溶液的制備方法制備成6份供試品溶液，進(jìn)樣，記錄結(jié)果，計(jì)算回收率及rsd(％)。結(jié)果見表。結(jié)果表明回收率良好。表6回收率試驗(yàn)結(jié)果4樣品測定4.1小試樣品的測定按照舒筋活血丸的處方比例，制備成品小樣500g，按“供試品溶液制備方法”制備成供試液，測定酸可溶性重金屬鉛、鎘、砷、汞、銅的含量，結(jié)果見表7。表7小試樣品測定結(jié)果(ppm)4.2三批中試樣品的測定分別取批號為20110401、20110402、20110403的舒筋活血丸(小蜜丸)成品0.1g，精密稱定，按“供試品溶液制備方法”制備成供試液，測定酸可溶性重金屬鉛、鎘、砷、汞、銅含量，結(jié)果見表8。表8三批成品酸可溶性重金屬含量測定結(jié)果(ppm)5研究的結(jié)論我公司根據(jù)國家局藥審中心第一次發(fā)補(bǔ)要求，進(jìn)行了重金屬、砷鹽的檢查，結(jié)果表明重金屬含量較高，我們建議暫不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中；根據(jù)國家局藥審中心第二次發(fā)補(bǔ)要求，我們對所申報(bào)的舒筋活血丸(小蜜丸)中的酸可溶性重金屬(鉛、鎘、砷、汞、銅)含量進(jìn)行了試驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該產(chǎn)品中重金屬含量相對較高，其原因在于此產(chǎn)品處方中含有礦物藥自然銅，通過對自然銅原料、不含自然銅的陰性樣品及舒筋活血丸(小蜜丸)的檢測，證明制劑中的酸可溶性重金屬主要來源于原料自然銅，而自然銅是該處方中的主要成分，起到散瘀，接骨，止痛的作用，其主要成分為主含二硫化鐵(fes2)，另據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，自然銅中還含鉛、砷、鎘、銅、鎳、砷、銻等雜質(zhì)，從而致使舒筋活血丸(小蜜丸)中含有重金屬，但試驗(yàn)結(jié)果表明，根據(jù)該藥品的用法用量，按每日最大服用量8g計(jì)，酸可溶性重金屬的量未超過每日人體攝入的限度規(guī)定。由于現(xiàn)行藥典中對中成藥中重金屬含量無明確規(guī)定，只用極少品種(紫蘇散、黃連上清片)中限定了重金屬含量，因此，我們結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果、參照《中國藥典》及相關(guān)文獻(xiàn)，并根據(jù)fao/who(jecfa)及《食品衛(wèi)生理化檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)手冊》推薦的有害元素限量標(biāo)準(zhǔn)中的限度要求及原料批次不同等綜合因素考慮，將舒筋活血丸(小蜜丸)中酸可溶性重金屬的含量測定規(guī)定為鉛不得過百萬分之二十五；鎘不得過百萬分之一；砷不得過百萬分之十；汞不得過千萬分之二；銅不得過百萬分之二十五。并已將檢測方法、限度要求列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。表9舒筋活血丸(小蜜丸)酸可溶性重金屬限度要求對比表注：1、日攝入限度為按成人體重60kg計(jì)算所得的數(shù)值；2、舒筋活血丸日攝入最大量是按照該產(chǎn)品的服用方法最大量，即日服用8g計(jì)算所得的數(shù)值。以上所述，僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)以所述權(quán)利要求的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁12