本發(fā)明涉及食品領(lǐng)域，具體是一種采用殼聚糖基cds和熒光開關(guān)法測定賴氨酸含量的方法。

背景技術(shù)：

食品，指各種供人食用或者飲用的成品和原料以及按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材的物品，但是不包括以治療為目的的物品。食品對人體的作用主要有兩大方面，即營養(yǎng)功能和感官功能，有的食品還具有調(diào)節(jié)作用。食品的營養(yǎng)功能是指食品能提供人體所需的營養(yǎng)素和能量，滿足人體的營養(yǎng)需要，它是食品的主要功能。食品的感官功能是指食品能滿足人們不同的嗜好要求，即對食物色、香、味、形和質(zhì)地的要求。食品的調(diào)節(jié)功能表示食品可對人體產(chǎn)生良好的調(diào)節(jié)作用，如調(diào)節(jié)人體生理節(jié)律，提高機體的免疫力，降血壓、降血脂、降血糖等功效。賴氨酸是人體需要的一種氨基酸，一種不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)，還是控制人體生長的抑長素中最重要的也是最必需的成份，它對人體的中樞神經(jīng)和周圍的神經(jīng)系統(tǒng)都起著非常重要的作用，測定食品中賴氨酸的含量就是食品領(lǐng)域常見的手段，但是現(xiàn)有的測定賴氨酸含量的方法靈敏度差，操作不便，這就為人們帶來了不便。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種采用殼聚糖基cds和熒光開關(guān)法測定賴氨酸含量的方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種采用殼聚糖基cds和熒光開關(guān)法測定賴氨酸含量的方法，具體步驟如下：

步驟一，將殼聚糖放至潔凈的小燒杯中，向小燒杯中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％的醋酸并且采用磁力攪拌器攪拌，直至殼聚糖全部溶解，再向其中加入5×10^-3mol·l^-1的cdcl2水溶液，蓋上表面皿，攪拌20-26小時，再向其中加入5×10^-3mol·l^-1的ch3csnh2水溶液，攪拌0.5-1小時后，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，定容，保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟二，在ph值10.5的b-r緩沖液中，加入步驟一制備的溶液，cu²⁺溶液和測定樣品溶液，利用熒光光度計測定熒光強度，即可得到樣品中賴氨酸的含量。

作為本發(fā)明進一步的方案：殼聚糖的分子量不大于3000，殼聚糖的質(zhì)量為0.5g，s^2-和cd²⁺的濃度之比為2∶1。

作為本發(fā)明進一步的方案：cds量子點的濃度是1.5×10^-7mol·l^-1，cu²⁺濃度為1.00×10^-4mol·l^-1。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用的方法操作簡單方便，靈敏度高，干擾離子對體系的影響小，選擇性強，采用的試樣量少，物理參數(shù)較多，回收率高，具有廣闊的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為采用殼聚糖基cds和熒光開關(guān)法測定賴氨酸含量的方法中cds量子點的熒光光譜圖。

圖2為采用殼聚糖基cds和熒光開關(guān)法測定賴氨酸含量的方法中cds量子點加cu²⁺和測定樣品體系的吸收光譜圖。

圖3為采用殼聚糖基cds和熒光開關(guān)法測定賴氨酸含量的方法中cds量子點加cu²⁺和測定樣品體系的激發(fā)和發(fā)射光譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式對本專利的技術(shù)方案作進一步詳細地說明。

請參閱圖1-3，一種采用殼聚糖基cds和熒光開關(guān)法測定賴氨酸含量的方法，具體步驟如下：

步驟一，將殼聚糖放至潔凈的小燒杯中，向小燒杯中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％的醋酸并且采用磁力攪拌器攪拌，直至殼聚糖全部溶解，此時為均一的溶液或者溶膠，再向其中加入5×10^-3mol·l^-1的cdcl2水溶液，蓋上表面皿，攪拌20-26小時，再向其中加入5×10^-3mol·l^-1的ch3csnh2水溶液，攪拌0.5-1小時后，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，定容，保存?zhèn)溆?，對制備好的殼聚糖基cds量子點溶液進行光譜測定，以進一步優(yōu)化制備條件，在激發(fā)狹縫為10nm，發(fā)射狹縫為5nm下，cds量子點的熒光光譜見圖1，圖1中a為激發(fā)光譜，圖1中b為發(fā)射光譜，cds量子點的最大激發(fā)波長是339nm，最大發(fā)射波長是430nm，對所用殼聚糖分子量(分子量＜3000、＜10000、＜30000、＜50000)，用量(0.3000g、0.4000g、0.5000g、0.6000g)，s^2-和cd²⁺的濃度及配比進行了選擇，實驗結(jié)果證實最佳制備條件是：殼聚糖分子量＜3000，用量為0.5g，ccd2+＝7.5×10^-7mol·l^-1，cs2-/ccd2+＝2；

步驟二，在ph值10.5的b-r緩沖液中，加入步驟一制備的溶液，cu²⁺溶液和測定樣品溶液，利用熒光光度計測定熒光強度，即可得到樣品中賴氨酸的含量，圖2為體系的吸收光譜，圖2中a為cds量子點的吸收光譜，b為cds量子點加入cu²⁺溶液的吸收光譜，c為cds量子點加入cu²⁺和賴氨酸溶液的吸收光譜。圖3為體系的熒光光譜，圖3中a為cds量子點的發(fā)射光譜，b為cds量子點加入cu²⁺溶液的發(fā)射光譜，c為cds量子點加入cu²⁺和賴氨酸溶液的發(fā)射光譜，d為cds量子點的激發(fā)光譜，e為cds量子點加入cu²⁺溶液的激發(fā)光譜，f為cds量子點加入cu²⁺和賴氨酸溶液的激發(fā)光譜。圖3中可以看出cu²⁺對cds量子點的激發(fā)和發(fā)射的熒光強度均有猝滅作用，加入賴氨酸，對猝滅后的體系熒光強度有明顯恢復(fù)增強作用，而且體系熒光強度的增強與加入賴氨酸的量在一定的濃度范圍內(nèi)成正比，此方法可用于賴氨酸的定量測定。采用不同的ph值、cds量子點濃度和cu²⁺濃度進行測定賴氨酸的含量，結(jié)果表明，在ph值為10.5的b-r緩沖溶液，cds量子點濃度是1.5×10^-7mol·l^-1，cu²⁺濃度為1.00×10^-4mol·l^-1的條件下，賴氨酸測定靈敏度最高。測定體系在15分鐘內(nèi)達到穩(wěn)定，在3小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。在最佳實驗條件下，體系熒光強度增強和賴氨酸濃度呈線性關(guān)系，其線性方程為δf＝-27.01+5.2796c來表示，其中相關(guān)系數(shù)r＝0.9982。線性范圍是6.3×10^-6mol·l^-1-1.764×10^-3mol·l^-1。線性范圍較寬，線性相關(guān)關(guān)系較好，檢出限為4.36×10^-8mol·l^-1。

對賴氨酸含量測定的干擾情況進行了測定。實驗選取丙氨酸、白氨酸、半胱氨酸、組氨酸、脯氨酸、天門冬氨酸6種氨基酸和k⁺、na⁺、ca²⁺、al³⁺、fe³⁺、mg²⁺、co²⁺⁷種無機離子作為干擾離子研究的對象。賴氨酸濃度為1.26×10^-5mol·l^-1，各干擾離子對體系的影響如表1。

表1各干擾離子對體系熒光強度的影響

從表1中可以看出，各干擾物質(zhì)對體系的影響比較小。

用本方法對實際樣品賴氨酸片劑(營養(yǎng)保健品)和動物飼料中賴氨酸的含量進行了測定，測定結(jié)果平均回收率分別為98.34％和96.59％。

對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應(yīng)將權(quán)利要求中的任何附圖標(biāo)記視為限制所涉及的權(quán)利要求。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。