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一種基于負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法及應用與流程

文檔序號:12548764閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種基于負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法,其特征在于,步驟如下:

(1)將直徑為3 mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨,超純水清洗干凈;

(2)將上述電極置于質量分數為0.8% ~ 1.0%的HAuCl4溶液中,在-0.2V下掃描30s,在電極表面形成電沉積金基底,用超純水沖洗,晾干;

(3)繼續(xù)將6 μL、10 ~ 15 μg/mL的腫瘤標志物捕獲抗體滴加到電極表面,超純水沖洗,4℃冰箱中干燥;

(4)繼續(xù)將3 μL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的牛血清白蛋白溶液滴加到電極表面,超純水沖洗電極表面,4 ℃冰箱中晾干;

(5)滴加6 μL、0.0005 ~ 40 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標志物抗原溶液,超純水沖洗電極表面,4℃冰箱中干燥;

(6)將6 μL、3 ~ 5mg/mL的負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測抗體孵化物溶液,滴涂于電極表面上,置于4℃冰箱中晾干,制得一種基于負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器。

2.如權利要求1所述的一種基于負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法,所述金包覆十面體銀納米粒子的制備,步驟如下:

(1)十面體銀納米粒子溶液的制備

取13 ~ 15 mL的超純水加入到20 mL的燒杯中,依次緩慢加入0.05 mol/L 、0.5 mL檸檬酸鈉,0.05 mol/L、22.5 μL聚對苯乙烯磺酸鈉,0.05 mol/L、50μL精氨酸,0.05 mol/L、0.4mL硝酸銀,新配制的0.1mol/L 、0.1 ~ 0.3 mL硼氫化鈉,溶液由淡黃色變?yōu)榱咙S色;600rpm條件下持續(xù)攪拌45 min,加入0.2 ~ 0.4 mL、30% H2O2,繼續(xù)攪拌30 min,生成的溶液置于藍色的LED燈光下13 ~ 15 h,制得十面體銀納米粒子的溶液,置于4℃冰箱中保存,備用;

(2)金包覆十面體銀納米粒子的制備

將新配置的質量分數為0.1%、1.0 ~ 2.0 mL氯金酸水溶液緩慢加入到3.0 mL的十面體銀納米粒子的溶液中,震蕩至溶液由黃色變?yōu)榫萍t色,制得金包覆十面體銀納米粒子的溶液。

3. 如權利要求1所述的一種基于負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法,所述負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測抗體孵化物溶液的制備,步驟如下:

(1)負載TaC的石墨烯的制備

①石墨烯的制備

在冰水浴和攪拌條件下,將2.0 ~ 3.0g天然石墨粉緩緩地加入到45 ~ 60 mL濃硫酸中,持續(xù)攪拌15 ~ 25 min;邊攪拌邊依次加入10.0 ~ 15.0 g KMnO4和 5.0 ~ 7.5 g NaNO3,保持溶液溫度低于20℃,攪拌10 ~ 15 min,再升溫至40℃,持續(xù)攪拌30 ~ 40 min,加入50 ~ 75 mL的超純水,將溶液置于油浴鍋中,95℃下加熱30 ~ 40 min;將200mL的超純水和10 ~ 15 mL、30% 的H2O2加入到上述溶液中,反應至溶液由黑褐色變?yōu)辄S色,分別用1 mol/ L HCl和超純水洗滌三次;65℃真空干燥12 h備用;

②負載TaC的石墨烯的制備

將上述制備的0.1 ~ 0.2 g石墨烯分散在200 mL的超純水中,超聲2 h,加入0.05 ~ 0.1 g K2TaF7繼續(xù)超聲30 ~ 50 min,將混合液置于油浴鍋中, 90℃下攪拌,蒸發(fā)掉大部分的水,直至變?yōu)槟z狀;將凝膠狀液體置于表面皿中,在0℃下冷凍干燥12~ 16 h,得到疏松多孔海綿狀固體產物,將所得固體在氬氣保護、1200℃下煅燒2h,得到負載TaC的石墨烯;

(2)負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的制備

取5~ 7 mg 負載TaC的石墨烯加入到3.0 mL 金包覆十面體銀納米粒子的溶液中,超聲30 min,形成負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯溶液,離心;分別用無水乙醇及超純水洗滌三次、30℃真空干燥24 h,得到負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末;

(3)負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測抗體孵化物溶液的制備

將6 ~ 10 mg的負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末溶于1 mL的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液中,震蕩溶解,再加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的腫瘤標志物檢測抗體溶液和900 μL、50 mmol/L的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液,4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩,孵化12 h,制得負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測抗體孵化物溶液,4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

4.如權利要求1所述的制備方法制備的一種基于負載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器,用于腫瘤標志物的檢測,檢測步驟如下:

(1)使用電化學工作站以三電極體系進行測試,飽和甘汞電極為參比電極,鉑絲電極為輔助電極,所制備的傳感器為工作電極,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.0 ~ 8.0磷酸鹽緩沖溶液中進行測試;

(2)用時間-電流法對分析物進行檢測,輸入電壓為-0.4 V,取樣間隔 0.1 s,運行時間400 s;

(3)當背景電流趨于穩(wěn)定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol/L的雙氧水溶液,記錄電流變化。

5.如權利要求1、2、3所述的腫瘤標志物,其特征在于,所述腫瘤標志物選自下列之一: CA199、CA125。

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