本發(fā)明涉及一種用于檢測澤蘭酮化合物的超高效液相色譜質譜聯(lián)用方法，可用于檢測草粉和飼料中澤蘭酮化合物的種類和含量。
背景技術：
9-羰基-10Hβ澤蘭酮和9-羰基-10，11去氫澤蘭酮是從紫莖澤蘭植株中獲得的兩種澤蘭酮化合物，它們都含有一個杜松烷倍半萜母體。研究證明它們是紫莖澤蘭植株的主要毒性成分，可造成大鼠肝中毒和膽汁淤滯，是紫莖澤蘭加工成草粉和飼料的工藝環(huán)節(jié)中必須嚴格控制的成分。目前，檢測這兩種澤蘭酮化合物的方法僅有高效液相色譜法，該方法完成一次色譜分析需要30min，而本法僅需5min，大大提高了工作效率，同時檢測的靈敏度和準確度方面也優(yōu)于高效液相色譜法。本法的建立對今后檢測紫莖澤蘭草粉原料及產品的質量和評價其毒性具有重要意義。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種簡便、準確、快速、可靠的澤蘭酮化合物的檢測方法。該方法準確、靈敏、簡便、前處理簡單、分析速度快，能滿足紫莖澤蘭草粉和飼料中兩種澤蘭酮化合物的定性和定量檢測。
根據(jù)本發(fā)明中用于檢測澤蘭酮化合物的方法，該方法包括以下步驟：
獲取超高效液相色譜中澤蘭酮化合物標準品的保留時間和質譜中澤蘭酮化合物標準品的特征碎片離子峰、以及澤蘭酮化合物標準品的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線性方程。
制備樣品溶液，進行超高效液相色譜檢測，得到樣品中各組分的保留時間，對各個組分進行質譜檢測，得到各個組分的特征碎片離子峰及特征碎片離子峰面積。
將各個組分的保留時間和特征碎片離子峰與所述澤蘭酮化合物標準品的保留時間和特征離子峰進行對比，從而確定所述樣品中含有的澤蘭酮化合物的種類，并根據(jù)所述特征碎片離子峰面積與濃度之間的線性方程進行計算，從而確定所述樣品中含有的澤蘭酮化合物的含量。
其特征在于，所述澤蘭酮化合物為9-羰基-10Hβ澤蘭酮和9-羰基-10，11去氫澤蘭酮中的一種或兩種。
所述液相色譜為超高效液相色譜，所述質譜檢測是通過串聯(lián)質譜法進行。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測澤蘭酮化合物的方法不僅具有分析速度快，還具有精密度和檢測靈敏度高的特點。具體地，根據(jù)該法可以在5分鐘內完成兩種澤蘭酮化合物的分析檢測，并且檢出限為0.005-0.022mg/L，在1.4-2.1mg/g的3個添加水平范圍內的平均回收率為88.85％-109.35％，精密度均小于12％。
附圖說明
圖1兩種澤蘭酮化合物的液質分析圖譜。
具體實施方式
下面結合附圖，對本發(fā)明的具體實施方式進行詳細描述，但應當理解本發(fā)明的保護范圍并不受具體實施方式的限制。
實施例1
(1)澤蘭酮化合物標準品溶液的制備
分別準確稱取適量澤蘭酮化合物標準品，用甲醇溶解并定容至100mL作為母液，使用時，用甲醇逐級稀釋作為標準工作液，9-羰基-10Hβ澤蘭酮濃度為0.87，1.392，1.74，2.61，3.48mg/L，9-羰基-10，11去氫澤蘭酮濃度為0.33，0.66，1.32，2.64，3.96mg/L。
(2)澤蘭酮化合物標準品溶液的超高效液相色譜和串聯(lián)質譜檢測
檢測儀器為ACQUITY UPLC-TQD超高效液相色譜質譜聯(lián)用系統(tǒng)。
超高效液相色譜分析的條件包括：色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1mmx100mm，填料粒徑為1.7μm)；流動相為甲醇和水；梯度洗脫程序為：0-0.5min，甲醇和水的體積比為10∶90；0.5-2.6min，甲醇和水的體積比為90∶10；2.6-5min，甲醇和水的體積比為10∶90；流動相的流速為0.3mL/min，柱溫為40℃，樣品室的溫度為18℃，進樣量3μL。
質譜檢測條件為：電噴霧正離子電離，毛細管電壓為3.5kv，離子源溫度為150℃，去溶劑氣溫度為350℃，去溶劑氣流量為650L/h，錐孔氣流量為50L/h，碰撞氣體為氬氣，多離子反應監(jiān)測(MRM)。
澤蘭酮化合物標準品在超高效液相色譜中的保留時間，在串聯(lián)質譜中的準分子離子峰以及特征碎片離子峰如下表1所示。
表1
*：定量特征碎片離子；Δ：定性特征碎片離子
表1中，每種澤蘭酮化合物標準品都給出了兩個特征碎片離子，其中定量特征碎片離子的離子峰面積用于與濃度作圖，從而得出特征碎片離子峰面積與濃度之間的線性方程，定性特征碎片離子用于輔助定量特征碎片離子來確定澤蘭酮化合物的種類。
在上述超高效液相色譜條件和串聯(lián)質譜條件下，對具有不同濃度的澤蘭酮化合物標準品溶液進行檢測，確定特征碎片離子峰面積與濃度之間的線性方程，得到的線性方程、線性范圍和相關系數(shù)如表2所示。按3倍信噪比估算檢出限，10倍信噪比估算定量限。
表2
*：上述線性方程中的x對應于濃度，Y對應于特征碎片離子峰面積。
(3)方法的回收率和精密度
紫莖澤蘭草粉中分別添加1.4，1.7，2.1mg/g澤蘭酮化合物標準品，每個添加濃度設置4個平行樣，用本發(fā)明的用于檢測澤蘭酮化合物的方法進行測定，確定方法的回收率和精密度。澤蘭酮化合物的添加量、回收率和精密度結果見表3。
表3
表3中的數(shù)據(jù)表明，在高中低3個添加水平范圍內，澤蘭酮化合物的平均回收率為88.85％-109.35％，RSD小于11.83％，說明該方法的重現(xiàn)性良好，儀器穩(wěn)定。
實施例2
供試溶液的制備：準確稱取紫莖澤蘭草粉(葉片)0.100g，加入40mL甲醇進行超聲提取2次，每次30min，合并兩次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液過0.22μm微孔濾膜后，進行定性定量檢測。
按照實施例1中超高效液相色譜條件和串聯(lián)質譜條件進行檢測，并根據(jù)檢測結果確定該草粉含有9-羰基-10Hβ澤蘭酮和9-羰基-10，11去氫澤蘭酮，它們的含量分別為5.15mg/g和2.21mg/g。
實施例3
供試溶液的制備：準確稱取紫莖澤蘭草粉(莖)0.500g，加入40mL甲醇進行超聲提取2次，每次30min，合并兩次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液過0.22μm微孔濾膜后，進行定性定量檢測。
按照實施例1中超高效液相色譜條件和串聯(lián)質譜條件進行檢測，并根據(jù)檢測結果確定該草粉含有9-羰基-10，11去氫澤蘭酮，其含量為0.10mg/g，未檢測出9-羰基-10Hβ澤蘭酮。
實施例4
供試溶液的制備：準確稱取紫莖澤蘭草粉(根)0.500g，加入40mL甲醇進行超聲提取2次，每次30min，合并兩次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液過0.22μm微孔濾膜后，進行定性定量檢測。
按照實施例1中超高效液相色譜條件和串聯(lián)質譜條件進行檢測，并根據(jù)檢測結果確定該草粉含有9-羰基-10，11去氫澤蘭酮，其含量為0.28mg/g。
實施例5
供試溶液的制備：準確稱取紫莖澤蘭草粉(葉片粉碎后經微生物發(fā)酵脫毒)1.000g，加入40mL甲醇進行超聲提取2次，每次30min，合并兩次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液過0.22μm微孔濾膜后，進行定性定量檢測。
按照實施例1中超高效液相色譜條件和串聯(lián)質譜條件進行檢測，并根據(jù)檢測結果確定該草粉含有9-羰基-10，11去氫澤蘭酮，其含量為0.25mg/g。
以上公開的僅為本發(fā)明的具體實施例，但是，本發(fā)明并非局限于此，任何本領域的技術人員能思之的變化都應落入本發(fā)明的保護范圍。