本發(fā)明涉及食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和乙?；前匪徕浀臋z測(cè)方法。

背景技術(shù)：

食品添加劑在改善食品品質(zhì)和色、香、味等方面具有非常重要的作用，隨著食品工業(yè)的發(fā)展，其應(yīng)用也越來(lái)越廣泛，但是大部分食品添加劑對(duì)人體具有一定的危害性，有些超量或超范圍使用后甚至?xí)l(fā)癌癥，因而對(duì)各類食品進(jìn)行安全質(zhì)量控制尤為重要。GB 2760《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)食品添加劑的種類和使用范圍做了明確規(guī)定，防腐劑和甜味劑是較常見(jiàn)的食品添加劑，而苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、乙?；前匪徕?安賽蜜)是防腐劑和甜味劑中較為常見(jiàn)的種類。

目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、乙?；前匪徕浀臋z測(cè)方法較多，但是沒(méi)有同時(shí)測(cè)定這幾種添加劑的方法，只能檢測(cè)其中的一種或幾種，且不同基質(zhì)的樣品需用不同的前處理方法，實(shí)驗(yàn)過(guò)程較為繁瑣，當(dāng)大批量不同基質(zhì)的樣品同時(shí)檢測(cè)這幾個(gè)項(xiàng)目時(shí)不僅需要重復(fù)稱樣，還要針對(duì)不同的基質(zhì)選用不同的前處理方法，難度及強(qiáng)度較大，這樣不僅大大降低了實(shí)驗(yàn)效率，同時(shí)也增加了對(duì)前處理過(guò)程中各種輔助設(shè)備以及高效液相色譜儀的使用損耗，增加了試驗(yàn)成本。為實(shí)現(xiàn)大批量流程化同時(shí)檢測(cè)這四種物質(zhì)，提高工作效率、減少試驗(yàn)成本，建立這些添加劑同時(shí)檢測(cè)的方法顯得十分必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、乙?；前匪徕浀臋z測(cè)不能同時(shí)進(jìn)行以及不同基質(zhì)的樣品需要用不同的前處理方法進(jìn)行處理的上述缺陷，提供一種同時(shí)檢測(cè)苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和乙?；前匪徕浀姆椒?，針對(duì)不同的食品基質(zhì)可以采用相同的前處理方法，同時(shí)樣品提取液上機(jī)后四種物質(zhì)的數(shù)據(jù)同時(shí)采集分析，從而能夠快速、準(zhǔn)確地得出分析結(jié)果。

本發(fā)明是采用以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和乙?；前匪徕?安賽蜜)的快速檢測(cè)方法，包括以下步驟：

(1)色譜條件建立：

色譜柱：C₁₈ 150mm×4.6mm×5μm或C₁₈ 250mm×4.6mm×5μm；流動(dòng)相：甲醇+0.02mol/L乙酸銨＝(10-15)+(85-90)；流速：0.6-1.0mL/min；柱溫：30±5℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：苯甲酸、山梨酸、糖精鈉均為230nm，安賽蜜214nm；進(jìn)樣體積：10μL；

(2)測(cè)定步驟：

配制濃度為100mg/L，50mg/L,20mg/L，10mg/L，5mg/L，2mg/L的甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在方法設(shè)定的儀器條件下進(jìn)樣于高效液相色譜儀分析，各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)以峰面積對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

準(zhǔn)準(zhǔn)確稱取樣品5.0000g于50mL容量瓶中，加入20mL一級(jí)水溶解，渦旋混勻，并超聲提取30min，向容量瓶中分別加入5mL亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液，渦旋沉淀3min，用一級(jí)水定容，渦旋混勻，取適量溶液于50mL離心管中離心，過(guò)0.22μm水膜，進(jìn)樣至高效液相色譜儀，記錄色譜圖。

上述技術(shù)方案，進(jìn)一步地，所述流動(dòng)相：甲醇+0.02mol/L乙酸銨＝10+90；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃。

上述技術(shù)方案，進(jìn)一步地，所述0.02mol/L乙酸銨的制備方法為：準(zhǔn)確稱取1.54g乙酸銨，用適量一級(jí)水溶解后，向其中加入200μL的冰乙酸，并定容至1000mL，混勻。

上述技術(shù)方案，進(jìn)一步地，所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法為：分別精密稱取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜的標(biāo)準(zhǔn)品各10mg于10mL的容量瓶中，并分別加入0.5mL的濃度為20g/L的碳酸氫鈉溶液溶解，然后用一級(jí)水定容至刻度，混勻，配制成濃度均為1000mg/L的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液；分別取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液各1mL于10mL容量瓶中，用一級(jí)水稀釋并定容至刻線，混勻，配制成濃度為100mg/L的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；將上述100mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液用一級(jí)水依次稀釋成濃度為100mg/L，50mg/L,20mg/L，10mg/L，5mg/L，2mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液于進(jìn)樣小瓶中，在方法設(shè)定的儀器條件下于高效液相色譜儀分析，各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)以峰面積對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

上述技術(shù)方案，進(jìn)一步地，所述亞鐵氰化鉀溶液的配制方法為稱取106g亞鐵氰化鉀，用適量一級(jí)水溶解后，定容至1000mL，混勻。

上述技術(shù)方案，進(jìn)一步地，所述乙酸鋅溶液的配制方法為稱取220g乙酸鋅溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，并最終定容至1000mL，混勻。

上述技術(shù)方案，進(jìn)一步地，所述樣品為液體、固體或者半固體的食品。

本發(fā)明公開(kāi)的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和乙?；前匪徕浀耐瑫r(shí)分析法，實(shí)現(xiàn)了各類食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和乙?；前匪徕?安賽蜜)四種物質(zhì)的一齊檢測(cè)，不同食品基質(zhì)均可采用相同的前處理方法，在保證結(jié)果準(zhǔn)性的前提下，降低了處理大批量不同基質(zhì)樣品時(shí)的難度及強(qiáng)度，大大提高了提取的工作效率，減少了試驗(yàn)成本和時(shí)間，也減少了對(duì)環(huán)境的污染；同時(shí)樣品提取液上機(jī)后也可實(shí)現(xiàn)四種物質(zhì)的數(shù)據(jù)同時(shí)采集分析，提高了樣品上機(jī)數(shù)據(jù)采集分析的效率，同時(shí)也減少了儀器的使用損耗。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1濃度為2mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例1濃度為5mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例1濃度為10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖；

圖4是本發(fā)明實(shí)施例1濃度為20mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖；

圖5是本發(fā)明實(shí)施例1濃度為50mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖；

圖6是本發(fā)明實(shí)施例1濃度為100mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖；

圖7是本發(fā)明實(shí)施例1樣品溶液色譜圖；

圖8是本發(fā)明實(shí)施例1的四種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

具體實(shí)施方式

為了能夠更加清楚地理解本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)，下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。需要說(shuō)明的是，在不沖突的情況下，本申請(qǐng)的實(shí)施例及實(shí)施例中的特征可以相互組合。

在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明，但是，本發(fā)明還可以采用不同于在此描述的其他方式來(lái)實(shí)施，因此，本發(fā)明并不限于下面公開(kāi)的具體實(shí)施例。

實(shí)施例1

1.儀器與試劑：

儀器：Agilent1260高效液相色譜儀、超聲波清洗器、渦旋混合器、離心機(jī)、分析天平、食品粉碎機(jī)。

試劑：

甲醇：色譜純。

0.02mol/L乙酸銨溶液：準(zhǔn)確稱取1.54g乙酸銨，用適量一級(jí)水溶解后，向其中加入200μL的冰乙酸，并定容至1000mL，混勻。

乙酸鋅溶液：稱取220g乙酸鋅溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，并最終定容至1000mL，混勻。

亞鐵氰化鉀溶液：稱取106g亞鐵氰化鉀，用適量一級(jí)水溶解后，定容至1000mL，混勻。

碳酸氫鈉溶液：準(zhǔn)確稱取2g碳酸氫鈉(優(yōu)級(jí)純)，加水溶解后，用一級(jí)水定容至100mL，混勻。

2.色譜條件：

檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器

色譜柱：C₁₈ 150mm×4.6mm×5μm

流動(dòng)相：甲醇+0.02mol/L乙酸銨＝(10-15)+(85-90)

流速：1.0mL/min

柱溫：30℃

檢測(cè)波長(zhǎng)：苯甲酸、山梨酸、糖精鈉均為230nm，乙?；前匪徕?安賽蜜)214nm

進(jìn)樣體積：10μL

3.混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

分別精密稱取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜的標(biāo)準(zhǔn)品各10mg于10mL的容量瓶中，并分別加入0.5mL的濃度為20g/L的碳酸氫鈉溶液溶解，然后用一級(jí)水定容至刻度，混勻，配制成濃度均為1000mg/L的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液；

分別取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液各1mL于10mL容量瓶中，用一級(jí)水稀釋并定容至刻線，混勻，配制成濃度為100mg/L的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.樣品溶液的配制

本發(fā)明中的樣品可以是液體，如調(diào)味品(醬油、食醋、調(diào)味料酒等)、液體乳、飲料類(果、蔬汁飲料、蛋白飲料、碳酸飲料、茶飲料等)等；可以是固體的，如固體復(fù)合調(diào)味料、熟肉制品、薯類及膨化食品、糖果、堅(jiān)果炒貨食品、糕點(diǎn)、豆制品等；或者半固體的，如半固體復(fù)合調(diào)味料、老酸奶等。

本實(shí)施例采用餅干為樣品。具體處理方法如下：

準(zhǔn)確稱取樣品5.0000g于50mL容量瓶中，加入20mL一級(jí)水溶解，渦旋混勻，并超聲提取30min，向容量瓶中分別加入5mL亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液，渦旋沉淀3min，用一級(jí)水定容至50mL刻線處，并渦旋混勻。

不同類型食品中蛋白質(zhì)和脂肪含量的高低直接影響著檢測(cè)結(jié)果的可靠性，現(xiàn)有技術(shù)針對(duì)不同樣品應(yīng)用不同的前處理方法，當(dāng)大批量各種基質(zhì)的樣品同時(shí)檢測(cè)時(shí)檢測(cè)工作具有很大的難度及強(qiáng)度。本發(fā)明的前處理方法采用水提取，然后用沉淀蛋白試劑來(lái)沉淀蛋白及大分子雜質(zhì)，可以適用各種食品基質(zhì)，大大降低了處理大批量不同基質(zhì)樣品時(shí)的難度及強(qiáng)度，提高了提取的工作效率，減少了試驗(yàn)成本和時(shí)間；另外使用的試劑減少，減輕了環(huán)境壓力。

5.分析方法

將上述100mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液用一級(jí)水依次稀釋成濃度為100mg/L，50mg/L,20mg/L，10mg/L，5mg/L，2mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液于進(jìn)樣小瓶中，在方法設(shè)定的儀器條件下于高效液相色譜儀分析，各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)以峰面積對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)照樣品色譜圖如圖1-6所示。

取適量樣品溶液于50mL離心管中離心，過(guò)0.22μm水膜，進(jìn)樣至高效液相色譜儀。樣品色譜圖如圖7所示。

6.分析結(jié)果

(1)色譜圖

在上述色譜條件下，安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸和山梨酸四種物質(zhì)的出峰時(shí)間分別是4.0min左右、7.9min左右、9.7min左右和18.8min左右，四種物質(zhì)都與基線分離，分離度較好，分析一針樣品的時(shí)間為20min。與現(xiàn)有的分別進(jìn)樣分析的方法相比，在流動(dòng)相中加入了酸，調(diào)整了四種物質(zhì)的出峰順序，改善了四種物質(zhì)的分離度；減少了重復(fù)性勞動(dòng)，工作效率提高，能夠滿足快速檢測(cè)的需要，節(jié)省人力、物力。

(2)相關(guān)性

四種物質(zhì)的線性如圖8所示。線性相關(guān)系數(shù)均在0.9999以上，相關(guān)性較好。

(3)檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度

用同樣的餅干做樣品，分別做了樣品濃度為2mg/kg，20mg/kg和100mg/kg三個(gè)水平的加標(biāo)，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，加標(biāo)回收結(jié)果為：安賽蜜94.89％-98.05％，糖精鈉94.56％-97.66％，苯甲酸95.32％-97.30％，山梨酸鹽95.17％-97.34％。結(jié)果見(jiàn)下表1。

表1三個(gè)水平的樣品加標(biāo)回收情況

實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性較好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

以上所述的實(shí)施例僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍內(nèi)。