本發(fā)明屬于中藥制劑質(zhì)量控制領(lǐng)域，涉及一種安神寶顆粒的多成分含量測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：安神寶顆粒補(bǔ)腎益精，養(yǎng)心安神。用于失眠健忘，眩暈耳鳴，腰膝酸軟。是用于治療失眠健忘的草本植物組方中成藥,劑型為顆粒劑。本品精選邢臺(tái)地區(qū)的酸棗仁與枸杞、北合歡，組方科學(xué)、配伍合理。本制劑現(xiàn)行的檢測(cè)方法為安神寶制劑采用薄層鑒別、正丁醇提取物來(lái)進(jìn)行質(zhì)量控制，已經(jīng)不符合現(xiàn)階段藥品檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展。隨著我國(guó)藥品生產(chǎn)質(zhì)量控制水平的提高，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局提出“國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高行動(dòng)計(jì)劃”，以全面提升藥品的質(zhì)量控制水平。因此，建立一種能快速、準(zhǔn)確、全面控制安神寶顆粒質(zhì)量的方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)它物質(zhì)群的全面控制，具有重要的意義。枸杞的主要化學(xué)成分有枸杞多糖(LBP)、枸杞黃酮、甜菜堿(betaine)、類(lèi)胡蘿卜素及類(lèi)胡蘿卜素酯、維生素C、莨菪亭(scopoletin)、多種氨基酸及微量元素K、Na、Ca、Mg、Cu、Fe、Mn、Zn、P等成分[11]。此外，尚從枸杞中分離得到環(huán)肽(Cyclicpeptides)及枸杞素A—D[12]、腦甙脂類(lèi)[13]等。其中，枸杞多糖為枸杞主要活性成分，具有增強(qiáng)免疫作用；甜菜堿、玉蜀黍黃素及玉蜀黍黃素二棕櫚酸、腦甙脂類(lèi)對(duì)四氯化碳引起的肝損害有保護(hù)作用；枸杞素A和B有抑制血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶的活性[1。酸棗仁含生物堿：酸棗仁堿(sanjoinine)A、B、D、E、F、G1、G2、Ia、Ib、K，還含酸棗仁環(huán)肽(sanjoinenine)。還含三萜類(lèi)：白樺脂酸(betulinicacid)，白樺脂醇(betulin)，美洲茶酸(ceanothicacid)，麥珠子酸(alphitolicacid)，酸棗皂甙(jujuboside)A、B，以及胡蘿卜甙(daucosterol)。又含黃酮類(lèi)：斯皮諾素(spinosin)，酸棗黃素(zivulgarin)，6”'-芥子酰斯皮諾素(6”'-sinapoylspinosin)，6”'-阿魏酰斯皮諾素(6”'-feruloylspinosin)，6”'-對(duì)香豆酰斯皮諾素(6”'-p-coumaroylspinosin)，當(dāng)藥素(swer-tisin)，6，8-二-C-葡萄糖基芹菜素(viceninⅡ)，芹菜素-6-C-[(6-O-對(duì)羥基苯甲酰)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖甙[apigenin-6-C-[(6-O-p-hydroxybenzoyl)-β-D-glucopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside]等。還含蘇氨酸(threonine)，纈氨酸(valine)，蛋氨酸(methionine)，亮氨酸(leucine)，異亮氨酸(isoleucine)，賴(lài)氨酸(lysine)，苯丙氨酸(phenylalanine)等17種氨基酸和鉀、鈉、鈣、鋅、鐵、銅、錳等多種金屬元素。又含阿魏酸(ferulicacid)，維生素C及植物甾醇，環(huán)磷酸腺苷(cyclicadenosine3',5'-monophosphate)等。藤合歡，養(yǎng)心安神；和血止痛。主心悸失眠；健忘多夢(mèng)；牙痛；筋骨痛；腰腿麻木；跌打傷痛。主要化學(xué)成分為黃酮類(lèi)化合物，如槲皮素、蘆丁等。藥品檢驗(yàn)方法的選擇，應(yīng)根據(jù)"準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、快速"的原則，要強(qiáng)調(diào)方法的適用性，并注意吸收國(guó)內(nèi)科研成果和國(guó)外先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)；既要考慮當(dāng)前國(guó)內(nèi)實(shí)際條件，又要反應(yīng)新技術(shù)的應(yīng)用發(fā)展，進(jìn)一步完善和提高檢測(cè)水平。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明是為了提供一種安神寶顆粒的多成分含量測(cè)定方法。本發(fā)明針對(duì)安神寶顆?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未進(jìn)行含量控制，提出了安神寶顆粒同時(shí)進(jìn)行多成分的含量測(cè)定，將酸棗仁中具有安神功效的主要成分：酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B，枸杞中具有確切鎮(zhèn)靜功效的成分：東莨菪內(nèi)酯；藤合歡主要成分槲皮素作為含量測(cè)定參數(shù)，使安神寶顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更具有整體性、特征性、和穩(wěn)定性，并且對(duì)儀器、色譜柱、檢測(cè)器、檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜流動(dòng)相、柱溫進(jìn)行了反復(fù)研究、優(yōu)化，通過(guò)多指標(biāo)成分的定量控制，能夠綜合反映安神寶顆粒的內(nèi)在質(zhì)量，提升制劑的質(zhì)量控制水平，保證制劑多批次制劑的質(zhì)量穩(wěn)定一致性。本發(fā)明所述的多成分含量測(cè)定方法是在同一色譜條件下，同時(shí)對(duì)安神寶顆粒中所含的酸棗仁皂苷A、東莨菪內(nèi)酯、槲皮素三種化學(xué)成分進(jìn)行液相色譜含量測(cè)定。本發(fā)明所述的多成分含量測(cè)定方法由以下步驟組成：一、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：色譜柱：AgilentZorboxSBC184.6mm×150mm，5μ柱溫：柱溫35℃檢測(cè)：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)樣量：10μl流動(dòng)相梯度洗脫表：流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.5％冰醋酸二、對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱(chēng)取酸棗仁皂苷A、東莨菪內(nèi)酯、槲皮素對(duì)照品適量，分別置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0ml置于同一個(gè)20ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。三、供試品溶液的制備：取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約1g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加人70％乙醇50ml，稱(chēng)定重量，加熱回流6小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用70％乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25ml，置燒瓶中，濃縮至約lml，加3mol/L鹽酸溶液l0ml，水浴中加熱水解2小時(shí)，立即冷卻，移人分液漏斗中，用水10ml分次洗滌容器，并入分液漏斗中，加氯化鈉2g，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取5次，每次15m1,合并三氯甲烷液，加無(wú)水硫酸鈉2g，攪拌，濾過(guò)，容器用少量三氯甲烷洗滌，濾過(guò)，濾液合并，70℃以下濃縮至近干，立即加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。四、測(cè)定法：按照步驟(1)所述色譜條件測(cè)定，即得。本發(fā)明所述的多成分含量測(cè)定方法研究是經(jīng)過(guò)大量篩選試驗(yàn)得到的最佳方案，以下試驗(yàn)研究為本發(fā)明的優(yōu)選過(guò)程，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：安神寶顆粒配方為酸棗仁、枸杞、藤合歡，其中，酸棗仁中主要成分為酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B，枸杞主要成分為甜菜堿、東莨菪內(nèi)酯，藤合歡主要成分為黃酮類(lèi)成分，槲皮素、山奈酚等，為了減少試驗(yàn)操作，提高檢測(cè)的效率，我們針對(duì)主要成分進(jìn)行了研究，力圖同時(shí)測(cè)定上述主要成分。酸棗仁皂苷類(lèi)成分的化學(xué)研究和含量測(cè)定報(bào)道較多，歸納起來(lái)主要的分析方法有比色法、薄層掃描法和高效液相色譜法，其中以高效液相色譜法測(cè)定較為準(zhǔn)確，但由于酸棗仁皂苷A和B的紫外吸收很弱，因此，用常規(guī)的HPLC-UV方法雖有文獻(xiàn)報(bào)道，但檢測(cè)靈敏度很低。反相高效液相色譜——蒸發(fā)光散射檢測(cè)法(RP-HPLC-ELSD)是近年來(lái)常用的適合于沒(méi)有紫外吸收成分的檢測(cè)方法，同時(shí)對(duì)于有紫外吸收的成分同樣可以適用。甜菜堿含量測(cè)定有分光光度法、薄層掃描法、非水滴定法和高效液相色譜法等。高效液相色譜法作為一種現(xiàn)代分離分析技術(shù)，已逐漸應(yīng)用于中藥化學(xué)成分的分離分析和含量測(cè)定，在植物甜菜堿含量測(cè)定方面的應(yīng)用也日益廣泛，但由于甜菜堿結(jié)構(gòu)中無(wú)共軛體系，僅能用折射儀檢測(cè)或在低紫外吸收波長(zhǎng)(190～220nm)測(cè)定，條件要求較高，且靈敏度或選擇性均不夠理想。因此，一般采用的高效液相色譜法都是對(duì)甜菜堿提取物進(jìn)行柱前衍生后測(cè)定的，此法破壞了甜菜堿提取物的原始成分。Young等[31]報(bào)道采用NH2柱未經(jīng)衍生可直接測(cè)定北方枸杞甜菜堿的含量，方法快速、簡(jiǎn)便東莨菪內(nèi)酯不溶于水，在甲醇中溶解。通用方法是用乙醇提取出東莨菪苷，采用酸水解，再提取東莨菪內(nèi)酯進(jìn)行檢測(cè)，一般檢測(cè)波長(zhǎng)為298nm。槲皮素的檢測(cè)波長(zhǎng)大致在256nm，通常采用甲醇提取進(jìn)行檢測(cè)。1、檢測(cè)波長(zhǎng)的研究確定綜合幾個(gè)主要成分的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)各不相同，并且紫外檢測(cè)背景干擾比較大，為了更好同時(shí)適用多個(gè)成分的檢測(cè)，我們采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(HPLC-ELSD)，對(duì)紫外吸收沒(méi)有要求，適用于大多數(shù)的成分檢測(cè)。2、流動(dòng)相的研究對(duì)照品溶液的配制：分別精密稱(chēng)取酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、東莨菪內(nèi)酯、甜菜堿、槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇溶液分別配制成1.0mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。首先采用以下流動(dòng)相進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，色譜柱：AgilentZorboxSBC184.6mm×150mm，5μ，柱溫35℃，流速1.0ml/min，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè),結(jié)果如下：①流動(dòng)相為：0.5％冰醋酸-甲醇(32：68)，分別進(jìn)樣酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、東莨菪內(nèi)酯、甜菜堿、槲皮素對(duì)照品對(duì)照品溶液，檢出酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、東莨菪內(nèi)酯、槲皮素，東莨菪內(nèi)酯及槲皮素出峰時(shí)間過(guò)早無(wú)法分離。②流動(dòng)相為：水-甲醇-乙酸(45:50:5)，分別進(jìn)樣酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、東莨菪內(nèi)酯、甜菜堿、槲皮素對(duì)照品對(duì)照品溶液，檢出酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、東莨菪內(nèi)酯、槲皮素，槲皮素出峰時(shí)間過(guò)早無(wú)法分離，棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B出峰時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，峰形不符合要求。③流動(dòng)相為：甲醇-水-冰醋酸(32:68:0.16)，分別進(jìn)樣酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、東莨菪內(nèi)酯、甜菜堿、槲皮素對(duì)照品對(duì)照品溶液，檢出槲皮素、其他峰形不符合要求。根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)檢測(cè)多成分需要進(jìn)行梯度洗脫，分離各類(lèi)成分。3、流動(dòng)相梯度洗脫研究對(duì)照品溶液制備：分別精密稱(chēng)取酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、東莨菪內(nèi)酯、甜菜堿、槲皮素對(duì)照品適量，分別置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0ml置于同一個(gè)20ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。①預(yù)實(shí)驗(yàn)：流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.5％冰醋酸時(shí)間流動(dòng)相A％流動(dòng)相B％02987496121882152080222377323268423562509010梯度洗脫峰的存在時(shí)因?yàn)榱鲃?dòng)相比例在變化過(guò)程中有一個(gè)臨界比例，達(dá)到那個(gè)比例的時(shí)候流動(dòng)相的吸收值就會(huì)出現(xiàn)較大的變化，干擾樣品的檢測(cè)，幾個(gè)對(duì)照品的出峰均產(chǎn)生干擾。我們嘗試改變梯度斜率來(lái)讓它改變位置和峰型。②調(diào)整梯度系統(tǒng)梯度系統(tǒng)改為漸變系統(tǒng)，減少流動(dòng)相吸收值的突然變化對(duì)對(duì)照品出峰的干擾。時(shí)間流動(dòng)相A％流動(dòng)相B％0-52-1098-905-15109015-2510-2090-8025-35208035-4520-3080-7045-5030-3570-6550-709010峰形改善，其中酸棗仁皂苷A、槲皮素峰形良好，酸棗仁皂苷B、東莨菪內(nèi)酯、甜菜堿出峰時(shí)間處于流動(dòng)相梯度改變區(qū)間，達(dá)不到基線(xiàn)分離。繼續(xù)調(diào)整流動(dòng)相各區(qū)間的梯度。圖2③確定梯度系統(tǒng)時(shí)間流動(dòng)相A％流動(dòng)相B％0-52-1098-905-15109015-3010-3090-7030-40307040-5030-4570-5550-60455560-809010峰形改善，峰形改善，酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、東莨菪內(nèi)酯、甜菜堿、槲皮素出峰時(shí)間均處于流動(dòng)相配比穩(wěn)定區(qū)間，達(dá)到基線(xiàn)分離。圖34、供試品溶液制備研究梯度系統(tǒng)用對(duì)照品進(jìn)行研究，由于樣品中雜質(zhì)眾多，樣品精制方法決定了雜質(zhì)是否對(duì)待測(cè)成分產(chǎn)生干擾，我們進(jìn)行了供試品溶液精制方法研究。①精密秤取樣品2g至10ml的容量瓶中，超聲提取20min，放至室溫，用甲醇定容，充分搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，作為供試品溶液1。②精密秤取樣品2g于索氏提取器中，加50ml石油醚，水浴加熱提取2小時(shí)，棄取石油醚，再用50ml甲醇索氏提取3小時(shí)，收集甲醇提取液，回收甲醇并定量轉(zhuǎn)移至10ml的容量瓶中，用甲醇定容，充分搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，作為供試品溶液2。③取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約1g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加人70％乙醇50ml，稱(chēng)定重量，加熱回流6小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用70％乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25ml，置燒瓶中，濃縮至約lml，加3mol/L鹽酸溶液l0ml，水浴中加熱水解2小時(shí)，立即冷卻，移人分液漏斗中，用水10ml分次洗滌容器，并入分液漏斗中，加氯化鈉2g，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取5次，每次15m1,合并三氯甲烷液，加無(wú)水硫酸鈉2g，攪拌，濾過(guò)，容器用少量三氯甲烷洗滌，濾過(guò)，濾液合并，70℃以下濃縮至近干，立即加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液3。色譜條件：流動(dòng)相：流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.5％冰醋酸，流速1ml/min，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，進(jìn)樣量10μl。梯度洗脫：時(shí)間流動(dòng)相A％流動(dòng)相B％0-52-1098-905-15109015-3010-3090-7030-40307040-5030-4570-5550-60455560-809010結(jié)果：供試品溶液1由于無(wú)除雜步驟，雜質(zhì)峰對(duì)待測(cè)峰產(chǎn)生嚴(yán)重干擾。供試品溶液2除雜不完全，雜質(zhì)峰仍有干擾。供試品溶液3由于加入水解除雜步驟，甜菜堿無(wú)出峰，槲皮素、酸棗仁皂苷A、東莨菪內(nèi)酯出峰良好，無(wú)干擾，酸棗仁皂苷B出峰與雜質(zhì)峰部分重疊，達(dá)不到分離。調(diào)整梯度系統(tǒng)，增加30％A流動(dòng)相的沖洗時(shí)間。結(jié)果如上：甜菜堿無(wú)出峰，槲皮素、酸棗仁皂苷A、東莨菪內(nèi)酯出峰良好，無(wú)干擾，酸棗仁皂苷B出峰與雜質(zhì)峰部分重疊，達(dá)不到分離。綜上所述，安神寶顆粒多成分檢測(cè)方法確定為：一、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：色譜柱：AgilentZorboxSBC184.6mm×150mm，5μ柱溫：柱溫35℃檢測(cè)：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)樣量：10μ流動(dòng)相梯度洗脫表：流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.5％冰醋酸時(shí)間流動(dòng)相A％流動(dòng)相B％0-52-1098-905-15109015-3010-3090-7030-40307040-5530-4570-5555-65455565-809010二、對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱(chēng)取酸棗仁皂苷A、東莨菪內(nèi)酯、槲皮素對(duì)照品適量，分別置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0ml置于同一個(gè)20ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。三、供試品溶液的制備：取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約1g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加人70％乙醇50ml，稱(chēng)定重量，加熱回流6小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用70％乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25ml，置燒瓶中，濃縮至約lml，加3mol/L鹽酸溶液l0ml，水浴中加熱水解2小時(shí)，立即冷卻，移入分液漏斗中，用水10ml分次洗滌容器，并入分液漏斗中，加氯化鈉2g，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取5次，每次15m1,合并三氯甲烷液，加無(wú)水硫酸鈉2g，攪拌，濾過(guò)，容器用少量三氯甲烷洗滌，濾過(guò)，濾液合并，70℃以下濃縮至近干，立即加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。四、測(cè)定法：按照步驟(1)所述色譜條件測(cè)定，即得。圖4附圖說(shuō)明圖1：預(yù)實(shí)驗(yàn)一液相色譜圖圖2：預(yù)實(shí)驗(yàn)二液相色譜圖圖3：預(yù)實(shí)驗(yàn)三液相色譜圖圖4：確定實(shí)驗(yàn)條件液相色譜圖具體實(shí)施方式下面列舉實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，該實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而對(duì)本發(fā)明沒(méi)有限制。實(shí)施例1：安神寶顆粒中所含的酸棗仁皂苷A、東莨菪內(nèi)酯、槲皮素三種化合物的高效液相色譜含量測(cè)定。一、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：色譜柱：AgilentZorboxSBC184.6mm×150mm，5μ柱溫：柱溫35℃檢測(cè)：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)樣量：10μ流動(dòng)相梯度洗脫表：流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.5％冰醋酸時(shí)間流動(dòng)相A％流動(dòng)相B％0-52-1098-905-15109015-3010-3090-7030-40307040-5530-4570-5555-65455565-809010二、對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱(chēng)取酸棗仁皂苷A、東莨菪內(nèi)酯、槲皮素對(duì)照品適量，分別置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0ml置于同一個(gè)20ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。三、供試品溶液的制備：取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約1g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加人70％乙醇50ml，稱(chēng)定重量，加熱回流6小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用70％乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25ml，置燒瓶中，濃縮至約lml，加3mol/L鹽酸溶液l0ml，水浴中加熱水解2小時(shí)，立即冷卻，移入分液漏斗中，用水10ml分次洗滌容器，并入分液漏斗中，加氯化鈉2g，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取5次，每次15m1,合并三氯甲烷液，加無(wú)水硫酸鈉2g，攪拌，濾過(guò)，容器用少量三氯甲烷洗滌，濾過(guò)，濾液合并，70℃以下濃縮至近干，立即加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。四、測(cè)定法：按照步驟(1)所述色譜條件測(cè)定，即得。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3