本發(fā)明涉及一種飼料淀粉糊化度的檢測方法。
背景技術(shù)：
：淀粉糊化度也叫淀粉熟化度，其糊化程度越高，表示飼料在加工過程中經(jīng)過高溫和高壓的作用成熟的程度越高?，F(xiàn)在，很多飼料的生產(chǎn)采用膨化處理，飼料原料經(jīng)膨化處理后，糊化度和香味增加，適口性提高，能刺激動(dòng)物食欲。同時(shí)，使淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等有機(jī)物的長鏈結(jié)構(gòu)變?yōu)槎替溄Y(jié)構(gòu)的程度增加，故變得更易消化。目前，飼料中淀粉糊化度的測定主要是由美國大豆協(xié)會(huì)熊易強(qiáng)博士根據(jù)美國飼料工業(yè)界普遍采用的測定方法簡化而來（方法來源：熊易強(qiáng).飼料淀粉糊化度(熟化度)的測定[J].飼料工業(yè)，2000，21(3):30-31）。淀粉與水共熱后，體積膨大，粘度上升，成為非結(jié)晶性淀粉，該狀態(tài)下易被糖化酶水解成為葡萄糖，上述方法測定飼料淀粉糊化度就是利用了淀粉的這一特性。其中，水解后的葡萄糖用還原糖的方法測定，但是還原糖并非葡萄糖一種，所以有時(shí)候飼料中其它的還原糖會(huì)對結(jié)果造成影響。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種飼料淀粉糊化度的檢測方法，以消除其它還原糖對測定結(jié)果的影響，使結(jié)果更為準(zhǔn)確。為了達(dá)成上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種飼料淀粉糊化度的檢測方法，包含以下步驟：步驟（1），取樣：稱取兩份過40目篩質(zhì)量相同的飼料樣品，精確至0.0001g；步驟（2），稱取一定質(zhì)量的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，用100mL容量瓶加水定容，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液；步驟（3），樣品處理：分別將兩份步驟（1）中的樣品置于加入50mL無水乙酸鈉-乙酸緩沖液的150mL錐形瓶中，取其中一份樣品于水浴鍋中沸水浴加熱40min±4min，然后用自來水沖淋冷卻，即為全糊化樣品，另外一份為不完全糊化樣品；分別向兩個(gè)錐形瓶中加入2mL糖化酶溶液，于40℃水浴鍋中加熱40min±4min，然后分別加入2mL硫酸溶液，搖勻后依次加入2mL鎢酸鈉溶液，再次搖勻；將兩個(gè)錐形瓶中的液體分別轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中加水定容后用濾紙過濾，收集濾液，得到兩份待測溶液；步驟（4），將標(biāo)準(zhǔn)溶液和兩份待測溶液利用液相色譜進(jìn)行檢測，得到葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品及待測溶液中各組分的保留時(shí)間及峰面積；飼料樣品的淀粉糊化度即為：(不完全糊化樣品葡萄糖峰面積/完全糊化樣品葡萄糖峰面積）×100%。其中，步驟（1）中飼料樣品稱樣量控制在0.4-1g之間為宜，另外，本方法同樣適用于飼料原料（如膨化玉米）淀粉糊化度的測定。其中，步驟（2）中葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品稱樣量為0.0500-0.1000g，精確至0.0001g，為判定待測樣中葡萄糖出峰時(shí)間所用，僅通過葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖來判斷飼料樣品中葡萄糖的出峰位置。其中，本發(fā)明所用水（即所有試劑配制及流動(dòng)相使用的水）均為去離子水。其中，步驟（3）中無水乙酸鈉-乙酸緩沖液配制方法如下：取4.1g無水乙酸鈉溶于200mL水中，加3.7mL乙酸，用水定容至1000mL，溶液pH在4.4-4.7之間即可。其中，步驟（3）中硫酸溶液和鎢酸鈉溶液為蛋白沉淀劑，可除去試樣中的蛋白。硫酸溶液配制方法：將10mL濃硫酸用水稀釋至100mL；鎢酸鈉溶液配制方法：取12.0g鎢酸鈉溶于100mL水中。其中，步驟（3）中所使用的糖化酶酶活為12000U/g。酶溶液配制方法如下：取1g復(fù)合淀粉酶溶于10mL步驟（3）中無水乙酸鈉-乙酸緩沖液，反復(fù)震蕩后，過濾，取濾液，現(xiàn)用現(xiàn)配。如按照本發(fā)明操作時(shí)，可根據(jù)所使用糖化酶實(shí)際酶活進(jìn)行計(jì)算，配制的酶溶液酶活以不低于本發(fā)明為準(zhǔn)。其中，步驟（4）所述的液相色譜以水為流動(dòng)相，所述液相色譜采用等度洗脫方式。采用上述方法后，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在以下幾方面：（1）可以消除其它還原糖對測定結(jié)果的干擾；（2）使用液相色譜測儀測定可以處理更多的樣品，一定程度上提高了工作效率；（3）測定結(jié)果計(jì)算公式簡單，只需葡萄糖峰面積比即可得出結(jié)果?？傊景l(fā)明將待測飼料樣品用糖化酶水解后，利用液相色譜對葡萄糖進(jìn)行測定（葡萄糖峰面積反映樣品中葡萄糖的含量），可以有效消除其它還原糖對測定結(jié)果的影響，從而使結(jié)果更為準(zhǔn)確。附圖說明圖1為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；圖2為不完全糊化樣品色譜圖；圖3為完全糊化樣品色譜圖。具體實(shí)施方式下面對本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例1本實(shí)施例采用的儀器及色譜條件如下：1.儀器設(shè)備電子天平（精確至0.0001g），實(shí)驗(yàn)室常規(guī)玻璃器皿，0.22μm微孔過濾膜，溶劑過濾器，帶時(shí)差遮光檢測器的高效液相色譜。2.色譜條件色譜柱：agilentHi-PlexH（8μm，7.7mm×300mm）柱溫：70℃流動(dòng)相：水進(jìn)樣量：20μL一種淀粉糊化度的檢測方法，包括以下步驟：（1）稱取兩份過40目篩質(zhì)量相同的配合飼料樣品0.8000g。（2）稱取0.1000g的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，用100mL容量瓶加水定容，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液過0.22μm針頭有機(jī)微孔濾膜后按色譜條件進(jìn)行上機(jī)檢測。得到的色譜圖如圖1所示。由圖1可知葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間為9.552min。（3）分別將兩份步驟（1）中的樣品置于加入50mL無水乙酸鈉-乙酸緩沖液的150mL錐形瓶中，取其中一份樣品于水浴鍋中沸水浴加熱40min左右，然后用自來水沖淋冷卻，即為全糊化樣品；另外一份為不完全糊化樣品；分別向兩個(gè)錐形瓶中加入2mL糖化酶溶液，于40℃水浴鍋中加熱40min左右，然后分別加入2mL硫酸溶液，搖勻后依次加入2mL鎢酸鈉溶液，再次搖勻；將兩個(gè)錐形瓶中的液體分別轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中加水定容后用濾紙過濾，收集濾液，得到兩份待測溶液。兩份待測溶液分別過0.22μm針頭有機(jī)微孔濾膜后按色譜條件進(jìn)行上機(jī)檢測。得到的色譜圖如圖2和圖3所示。待測溶液中葡萄糖保留時(shí)間及峰面積如表1所示。表1配合飼料待測溶液中葡萄糖保留時(shí)間及峰面積項(xiàng)目保留時(shí)間（min）峰面積不完全糊化樣品9.553562013.7完全糊化樣品9.5521030528.1該配合飼料樣品的淀粉糊化度=（562013.7/1030528.1）×100%=54.53%實(shí)施例2使用膨化玉米作為樣品，采用與實(shí)施例1完全相同的操作步驟，所得的最終結(jié)果如表2所示。表2膨化玉米待測溶液中葡萄糖保留時(shí)間及峰面積項(xiàng)目保留時(shí)間（min）峰面積不完全糊化樣品9.5561315061.5完全糊化樣品9.5591542413.2該膨化玉米樣品的淀粉糊化度=（1315061.5/1542413.2）×100%=85.26%試驗(yàn)例1以現(xiàn)有的分光光度計(jì)測定方法為對照組對上述配合飼料樣品和膨化玉米樣品進(jìn)行測定，同一樣品兩種方法的測定結(jié)果如表3所示：表3淀粉糊化度的測定結(jié)果樣品對照組實(shí)驗(yàn)組配合飼料60.52%54.51%膨化玉米86.14%85.26%本發(fā)明使用的配合飼料生產(chǎn)過程中加入了少量乳清粉，而乳清粉中的乳糖是還原糖的一種，對照組采用的分光光度計(jì)法是一種測定還原糖的方法，其結(jié)果測定了包含葡萄糖、乳糖及其它種類的還原糖，正是因?yàn)檫@個(gè)原因，由表3可知，其結(jié)果較本發(fā)明偏高。膨化玉米是一種飼料原料，不含有乳糖等其它種類的還原糖，所以，膨化玉米樣品對照組與實(shí)驗(yàn)組的結(jié)果更為接近。本發(fā)明通過液相色譜測定飼料的淀粉糊化度，排除了葡萄糖以外還原糖對結(jié)果的干擾，所以，結(jié)果更為準(zhǔn)確。同時(shí)液相色譜儀的使用可以測定更多的樣品，這樣有利于提高工作效率。當(dāng)前第1頁1 2 3