1.檢測(cè)復(fù)方阿膠制劑中阿膠含量的組合物,其特征在于:所述組合物由多肽I、多肽II、多肽III以及對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)組成,其中,所述多肽I的氨基酸序列為Ser-Gly-Gln-Pro-Gly-Thr-Val-Gly-Pro-Ala-Gly-Val-Arg,多肽II的氨基酸序列為His-Gly-His-Arg,多肽III的氨基酸序列為Gly-Val-Val-Gly-Pro-Gln-Gly-Ala-Arg,對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)為魚(yú)皮膠。
2.含有權(quán)利要求1所述組合物的檢測(cè)試劑盒。
3.一種使用權(quán)利要求1所述的組合物檢測(cè)復(fù)方阿膠制劑中阿膠含量的方法,其特征在于,包括如下步驟:
1)對(duì)照品溶液的制備:
對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)粉碎后,稱(chēng)取一定量的對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)于量瓶中,加入NH4HCO3溶液,超聲使樣品完全溶解,得到基質(zhì)溶液,用配制得到的基質(zhì)溶液溶解稱(chēng)量好的多肽I、多肽II和多肽III,搖勻,得到對(duì)照品母液,采用分步稀釋的方法,以基質(zhì)溶液為溶劑,將對(duì)照品母液稀釋500-105倍,微孔濾膜過(guò)濾,續(xù)濾液中加胰蛋白酶溶液,酶解;
2)復(fù)方阿膠制劑樣品溶液的制備:
取待檢測(cè)復(fù)方阿膠制劑樣品于量瓶中,重量記為M1,加水溶解后,加入三氯乙酸溶液,超聲,離心后去除上清液,沉淀用丙酮洗滌、干燥后稱(chēng)重,重量記為M2;稱(chēng)取一定量沉淀干燥物于量瓶中,加入NH4HCO3溶液稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過(guò)濾,續(xù)濾液中加入胰蛋白酶溶液,酶解;
3)將對(duì)照品溶液、待檢測(cè)復(fù)方阿膠制劑樣品溶液分別放入液質(zhì)聯(lián)用儀,選擇m/z592.2→756.4、655.4、499.3,m/z253.8→312.2、369.2,m/z421.0→684.4、528.3作為檢測(cè)離子對(duì)進(jìn)行MRM掃描,其中選擇m/z592.2→756.4、m/z253.8→312.2、m/z421.0→684.4分別作為多肽I、多肽II和多肽III的定量離子對(duì),待檢測(cè)阿膠樣品中多肽I的含量記為N1、多肽II的含量記為N2、多肽III的含量記為N3;
4)按下式計(jì)算出樣品中阿膠的含量:
復(fù)方阿膠制劑中阿膠的含量(%)=(N1/1182.3–N2/505.5)×840/N3×M2/M1×100%。
4.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述的NH4HCO3溶液為1%(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液。
5.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述的對(duì)照品溶液的制備包括以下步驟:
1)基質(zhì)溶液的制備:對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)粉碎后,稱(chēng)取0.50g的對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)于250ml量瓶中,加少量1%(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液,超聲使樣品完全溶解,用1%(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液稀釋至刻度,搖勻;
2)稱(chēng)取23.1mg的多肽I、9.9mg的多肽II和16.4mg的多肽III于25ml量瓶中,用步驟1)配制的基質(zhì)溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻;
3)對(duì)照品溶液的制備:采用分步稀釋的方法,以基質(zhì)溶液為溶劑,分別將對(duì)照品母液稀釋500-105倍,微孔濾膜過(guò)濾,精密量取續(xù)濾液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl,37℃恒溫酶解12h。
6.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟2)中所述的待檢測(cè)復(fù)方阿膠制劑樣品溶液的制備包括以下步驟:稱(chēng)取1~5g待檢測(cè)復(fù)方阿膠制劑樣品,重量記為M1,用水補(bǔ)足至5ml,加入30%(w/v)的三氯乙酸5ml,震蕩混合,使三氯乙酸的終濃度為15%(w/v),超聲15min,4℃靜置30min,離心后去除上清液,沉淀用丙酮洗滌、干燥后稱(chēng)重,重量記為M2,稱(chēng)取0.05g的沉淀干燥物于25ml量瓶中,加入少量1%(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液溶解后,用1%(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過(guò)濾,精密量取續(xù)濾液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl,37℃恒溫酶解12h。
7.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟3)中液質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)的液相條件為:C18反相色譜柱,流動(dòng)相A為含有0.1%(v/v)甲酸的水溶液,流動(dòng)相B為含有0.1%(v/v)甲酸的乙腈溶液,流速0.3ml/min;梯度洗脫:0→20min,流動(dòng)相A 100%→25%,流動(dòng)相B 0%→75%。質(zhì)譜條件:電噴霧正離子模式(ESI+)進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。
8.權(quán)利要求1所述的組合物在檢測(cè)復(fù)方阿膠制劑中阿膠含量中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求2所述的試劑盒在檢測(cè)復(fù)方阿膠制劑中阿膠含量中的應(yīng)用。