本發(fā)明涉及自身抗體篩查技術(shù)領(lǐng)域，具體為水源性高碘地區(qū)人群甲狀腺自身抗體篩查分析方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

甲狀腺自身抗體包括甲狀腺微粒體抗體(TMAb)、甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)、促甲狀腺激素受體抗體(TRAb)和甲狀腺激素抗體(TAb)。其中甲狀腺微粒體抗體中有一種叫做甲狀腺過氧化物酶抗體(TROAb)，其作用相當(dāng)重要，是甲狀腺的主要破壞性抗體，在自身免疫性甲狀腺疾病中水平升高，是對甲狀腺細(xì)胞主要的破壞性抗體。促甲狀腺激素、TROAb、TRAb等抗體在自身免疫性甲狀腺疾病診斷過程中的敏感性、特異性、準(zhǔn)確性較高，聯(lián)合檢測對自身免疫性甲狀腺疾病的診斷價(jià)值更大。

近年來隨著人們生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)的改變，精神壓力的增加，生活節(jié)奏的加快，保健意識的增強(qiáng)以及環(huán)境影響甲狀腺功能物質(zhì)的增加，甲狀腺疾病的發(fā)病率呈上升趨勢。竇瑜貴等對成人碘營養(yǎng)及甲狀腺功能狀態(tài)研究證實(shí)，隨著碘攝入量的增加，TPOAb、TGAb的陽性率呈上升趨勢，水源性高碘地區(qū)健康體檢人群甲狀腺自身抗體的陽性率較高，對甲狀腺功能正常而自身抗體陽性者進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測、隨訪或早期干預(yù)，有利于甲狀腺疾病早期診斷、鑒別診斷及其防治。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供水源性高碘地區(qū)人群甲狀腺自身抗體篩查分析方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：水源性高碘地區(qū)人群甲狀腺自身抗體篩查分析方法，包含以下步驟：

A、將吡啶釕標(biāo)記的X物質(zhì)對應(yīng)的抗體、待測血清和生物素化的X物質(zhì)充分混合，使待測血清和吡啶釕標(biāo)記的抗體競爭與生物素化的X物質(zhì)結(jié)合；

B、加入鏈霉親和素包被的磁性微粒，充分反應(yīng)后，鏈霉親和素包被的磁性微粒與生物素化的抗原-抗體復(fù)合物緊密結(jié)合；

C、將反應(yīng)液吸入流動池，通過電磁作用，磁珠微粒吸附于電極表面，加入三羥甲基氨基甲烷，除去未吸附于電極表面的物質(zhì)；

D、加入一定量的三丙胺溶液，加電壓啟動ECL反應(yīng)，使吡啶釕標(biāo)記復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍增器測定發(fā)光強(qiáng)度，發(fā)光的強(qiáng)弱程度與待測血清中抗體的含量成反比；

E、繪制或計(jì)算發(fā)光信號強(qiáng)弱對該抗體量的曲線，從而建立疾病發(fā)生前或整個(gè)疾病過程中受試者的抗體產(chǎn)生譜，動態(tài)監(jiān)測以建立抗體產(chǎn)生譜；

F、應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，在不同性別、年齡組中甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體的陽性率以及自身抗體在各種甲狀腺疾病中的陽性率，采用χ²檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，應(yīng)用非條件Logi-stic回歸，計(jì)算甲狀腺抗體陽性人群中發(fā)生各種甲狀腺功能異常的風(fēng)險(xiǎn)。

優(yōu)選的，所述待測樣品為血清。

優(yōu)選的，所述待測物質(zhì)為甲狀腺自身抗體。

優(yōu)選的，所述第一抗體為單克隆免疫球蛋白。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析測定血清甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體水平，對甲狀腺疾病的診斷和鑒別診斷具有重要價(jià)值，結(jié)合分析甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體等抗體水平差異，對甲狀腺疾病尤其是自身免疫性甲狀腺疾病的診斷具有重要價(jià)值。聯(lián)合檢測促甲狀腺激素、甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體等對自身免疫性甲狀腺疾病和非自身免疫性甲狀腺疾病的敏感性和特異性均高于單項(xiàng)指標(biāo)的檢測。因此，測定血清甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體水平有助于自身免疫性甲狀腺疾病的診斷、鑒別診斷、療效觀察和預(yù)后監(jiān)測。

具體實(shí)施方式

下面對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明提供一種技術(shù)方案：水源性高碘地區(qū)人群甲狀腺自身抗體篩查分析方法，包含以下步驟：

A、將吡啶釕標(biāo)記的X物質(zhì)對應(yīng)的抗體、待測血清(含X物質(zhì)對應(yīng)的抗體)和生物素化的X物質(zhì)充分混合，使待測血清和吡啶釕標(biāo)記的抗體競爭與生物素化的X物質(zhì)結(jié)合；

B、加入鏈霉親和素包被的磁性微粒，充分反應(yīng)后，鏈霉親和素包被的磁性微粒與生物素化的抗原-抗體復(fù)合物緊密結(jié)合；

C、將反應(yīng)液吸入流動池，通過電磁作用，磁珠微粒吸附于電極表面，加入三羥甲基氨基甲烷，除去未吸附于電極表面的物質(zhì)；

D、加入一定量的三丙胺溶液，加電壓啟動ECL反應(yīng)，使吡啶釕標(biāo)記復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍增器測定發(fā)光強(qiáng)度，其發(fā)光強(qiáng)度的強(qiáng)弱與待測血清中抗體的含量成反比；

E、繪制或計(jì)算發(fā)光信號強(qiáng)弱對該抗體量的曲線，從而建立疾病發(fā)生前或整個(gè)疾病過程中受試者的抗體產(chǎn)生譜，動態(tài)監(jiān)測以建立抗體產(chǎn)生譜；

F、應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，在不同性別、年齡組中甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體的陽性率以及自身抗體在各種甲狀腺疾病中的陽性率，采用χ²檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，應(yīng)用非條件Logi-stic回歸計(jì)算甲狀腺抗體陽性人群中發(fā)生各種甲狀腺功能異常的風(fēng)險(xiǎn)。

本實(shí)施例中，待測樣品為血清。

本實(shí)施例中，待測物質(zhì)為甲狀腺自身抗體。

本實(shí)施例中，第一抗體為單克隆免疫球蛋白。

甲狀腺疾病主要依據(jù)血清TSH、FT3、FT4、TT3、TT4檢測結(jié)果進(jìn)行診斷，其診斷標(biāo)準(zhǔn)如下：甲狀腺功能亢進(jìn)(甲亢)：有甲亢的癥狀或體征，同時(shí)FT3＞7.1pmol/l，F(xiàn)T4＞22pmol/L，TSH＜0.27mIU/L者；亞臨床甲狀腺功能亢進(jìn)(亞臨床甲亢)：無甲亢的癥狀或體征，同時(shí)FT3和FT4正常，TSH＜0.27mIU/L；甲狀腺功能減退(甲減)：有甲減的癥狀或體征，同時(shí)FT3＜2.8pmol/L，F(xiàn)T4＜12pmol/L，TSH＞4.2mIU/L者；亞臨床甲狀腺功能減退(亞臨床甲減)：無甲減的癥狀或體征，TSH＞4.20mIU/L，F(xiàn)T3和FT4正常；TPOAb＞34IU/mL為TPOAb陽性，TGAb＞115IU/mL為TGAb陽性。

分析結(jié)果如下：

1、健康體檢者不同年份甲狀腺自身抗體異常檢出率比較

表1結(jié)果顯示，3218名健康體檢者甲狀腺自身抗體TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb異常檢出率隨年份的增加呈明顯的增高趨勢，2013年與2014和2015年比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，但2014和2015年TPOAb+TgAb均陽性的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ²為1.651，P為0.199)。

表1 健康體檢者不同年份血清TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb陽性率比較[n(％)]

2、健康體檢者不同性別、不同年齡甲狀腺自身抗體檢出率比較

表2結(jié)果顯示，調(diào)查的3218名健康人群中，甲狀腺自身抗體總的陽性檢出率為16.19％(521/3218)，TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb的陽性檢出率分別為14.57％、12.74％和11.12％。TPOAb的陽性檢出率男性顯著低于女性(6.92％VS 21.53％，χ²＝137.634，P＜0.001)，均隨年齡增加而增高，男性50～59歲年齡組檢出率最高(9.49％)，女性≥70歲年齡組達(dá)高峰(28.10％)；TGAb的陽性檢出率男性顯著低于女性(5.68％VS 19.16％，χ²＝131.169，P＜0.001)，)其年齡分布特征與TPOAb相同，男性50～59歲年齡組檢出率最高(7.32％)，女性≥70歲年齡組陽性檢出率高達(dá)19.16％。TPOAb+TgAb均陽性的檢出率男性顯著低于女性(5.03％VS 16.67％，χ²＝110.002，P＜0.001)，男性50～59歲年齡組檢出率最高(5.15％)，女性≥70歲年齡組達(dá)高峰(20.26％)。無論男性還是女性，30歲以上各年齡組與30歲以下年齡組TPOAb、TGAb和TPOAb+TgAb陽性檢出率均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。

表2 健康體檢者不同性別、不同年齡甲狀腺自身抗體陽性檢出率[n(％)]的比較

其中：①總?cè)巳褐?，不同性別之間甲狀腺自身抗體檢出率比較：χ²＝535.427，P＜0.001；②各年齡組男性甲狀腺自身抗體檢出率比較：χ²＝16.310，P＝0.006；③各年齡組女性甲狀腺自身抗體檢出率比較：χ²＝78.343，P＜0.001。

3、健康體檢者各年齡組不同性別甲狀腺自身抗體檢出率比較

表3結(jié)果顯示，各年齡組不同性別之間甲狀腺自身抗體陽性檢出率均有顯著性差異(P值＜0.05～＜0.001)，其中20～29歲年齡組TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb陽性檢出率差異的P值分別為0.013、0.003和0.034，其余各年齡組不同性別差異的P值均＜0.001。

表3 健康體檢者各年齡組不同性別甲狀腺自身抗體檢出率[n(％)]比較

4、甲狀腺功能異常者甲狀腺自身抗體陽性檢出率及OR值比較

表4結(jié)果顯示，各種甲狀腺功能異常疾病中TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb陽性檢出率的比例不同，陽性檢出率和OR由高到低依次為甲減、甲亢、亞臨床甲減和亞臨床甲亢，甲亢、亞臨床甲亢和甲減、亞臨床甲減之間均有顯著性差異。

表4 各組甲狀腺功能異常人群甲狀腺自身抗體檢出率[n(％)]及OR值比較

由以上表格數(shù)據(jù)可知，在水源性高碘地區(qū)，其甲狀腺功能異?；疾÷瘦^高，尤其亞臨床甲狀腺疾病的發(fā)病率更高。

實(shí)施案例：

TPOAb、TgAb陽性的亞臨床甲狀腺功能減退易演變?yōu)榧谞钕俟δ軠p退。一項(xiàng)隨訪4～8年的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，20％～50％的亞臨床甲狀腺功能減退患者發(fā)展為甲狀腺功能減退。65歲以上，尤其是甲狀腺自身抗體陽性者，4年內(nèi)從亞臨床甲狀腺功能減退轉(zhuǎn)化為甲狀腺功能減退的幾率高達(dá)80％，說明甲狀腺自身抗體陽性是導(dǎo)致甲狀腺功能異常的危險(xiǎn)因素。雙抗體陽性在甲狀腺功能異常人群中的陽性率低于任何單一抗體的陽性率，但更易導(dǎo)致AITD的發(fā)生，說明兩種抗體對甲狀腺的損傷起協(xié)同作用。對甲狀腺功能正常而自身抗體陽性者進(jìn)行隨訪，1年后甲狀腺功能減退和甲狀腺功能亢進(jìn)的發(fā)生率分別為5.2％和3.7％，TPOAb陽性者甲狀腺功能減退的發(fā)生率(5.5％)顯著高于TPOAb陰性者(0.5％)。一項(xiàng)20年的隨訪發(fā)現(xiàn)，甲狀腺功能正常而自身抗體陽性者，每年以2％～4％的速度發(fā)展為甲狀腺功能減退?？贵w出現(xiàn)的高峰在60～＜70歲，較亞臨床甲狀腺功能減退發(fā)病的高峰早10年，證實(shí)自身抗體導(dǎo)致甲狀腺的損傷是一個(gè)潛在、慢性漸進(jìn)的過程。

滄州市作為水源性高碘地區(qū)，其甲狀腺功能異常和自身抗體陽性的檢出率較高，尤其亞臨床甲狀腺功能減退的患病率更高，且與性別和年齡有關(guān)。亞臨床甲狀腺功能減退者通常沒有明顯的臨床表現(xiàn)，很容易被忽視，大多數(shù)通過甲狀腺功能項(xiàng)目檢查后發(fā)現(xiàn)。TPOAb和TGAb是診斷AITD的重要指標(biāo)，AITD易感人群血液內(nèi)TPOAb首先升高，繼而TSH升高，F(xiàn)T4及其他甲狀腺激素水平變化出現(xiàn)較晚。因此，將甲狀腺功能和自身抗體檢測列為健康人群的常規(guī)體檢項(xiàng)目非常必要，加強(qiáng)對甲狀腺疾病的篩查，有利于甲狀腺疾病的早期診斷和鑒別診斷，尤其對甲狀腺功能正常而自身抗體陽性者進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測和隨訪，及時(shí)調(diào)整飲食習(xí)慣、生活方式，或進(jìn)行早期干預(yù)治療，有助于甲狀腺疾病的防治。

本發(fā)明采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析測定血清甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體水平用于甲狀腺疾病的診斷，結(jié)合分析甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體等抗體水平差異，對甲狀腺疾病尤其是自身免疫性甲狀腺疾病具有重要的診斷價(jià)值。促甲狀腺激素、甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體等聯(lián)合檢測對自身免疫性甲狀腺疾病和非自身免疫性甲狀腺疾病診斷和鑒別診斷的敏感性和特異性均高于單項(xiàng)指標(biāo)的檢測。因此，測定血清甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體水平有助于自身免疫性甲狀腺疾病的診斷、觀察療效和預(yù)后監(jiān)測。

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下，對這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。