本發(fā)明涉及靶分析工具和靶分析方法。

背景技術(shù)：

一般來說，靶分析使用對靶具有結(jié)合親和性的結(jié)合物質(zhì)來進(jìn)行，所述靶的存在或不存在或所述靶的量，可以通過使所述結(jié)合物質(zhì)與所述靶形成偶聯(lián)物并直接或間接地檢測由此形成的偶聯(lián)物來分析(專利文獻(xiàn)1和2)。

然而，以上述方式使用結(jié)合物質(zhì)進(jìn)行的分析方法需要將結(jié)合到所述靶的結(jié)合物質(zhì)與未結(jié)合到所述靶的結(jié)合物質(zhì)分離開的過程。因此，難以在單一分析工具中進(jìn)行一系列過程并檢測所述靶。

引文列表

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：pct國際申請公開號jp-t-2014-507670的日文譯本

專利文獻(xiàn)2：pct國際申請公開號jp-t-2007-518994的日文譯本

發(fā)明概述

本發(fā)明待解決的問題

考慮到上述情況，本發(fā)明的目的是提供一種用于容易地分析靶的靶分析工具。

解決問題的手段

本發(fā)明提供了第一靶分析工具，其包括第一室、第二室和第三室。所述第一室、第二室和第三室依次連續(xù)配置。所述第一室含有固定化的第一結(jié)合物質(zhì)作為第一試劑，其通過將第一結(jié)合物質(zhì)固定化到載體上來獲得，所述第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合靶。所述第二室含有標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)作為第二試劑，其通過將標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到第二結(jié)合物質(zhì)來獲得，所述第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合第一結(jié)合物質(zhì)。所述第三室是檢測區(qū)段，在其中檢測所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)。在所述第一室與第二室之間提供有第一分隔壁。在所述第二室與第三室之間提供有第二分隔壁。所述第一室被構(gòu)造成使得帶有樣本的持樣器可以從所述第一室的外部插入到所述第一室的內(nèi)部。所述第一分隔壁是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁。所述第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)可以通過它。

本發(fā)明還提供了使用所述第一靶分析工具的第一靶分析方法。所述第一靶分析方法包括下列步驟：將持留有樣本的持樣器插入到所述靶分析工具的第一室中；通過使所述樣本與所述第一試劑在所述第一室中發(fā)生接觸，將所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第一試劑的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)；通過使所述第一室中的持樣器與所述第一室與第二室之間的第一分隔壁發(fā)生接觸以破裂所述分隔壁，將所述第一室中的所述樣本與第一試劑的混合物引入到所述第二室；通過使所述樣本與第一試劑的混合物在所述第二室中與第二試劑發(fā)生接觸，將所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第二試劑的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)；通過所述第二室與第三室之間的第二分隔壁，將未結(jié)合的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)引入到所述第三室；以及檢測所述第三室中所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)。

本發(fā)明還提供了第二靶分析工具，其包括第一室、第二室和第三室。所述第一室、第二室和第三室依次連續(xù)配置。所述第一室含有標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)作為第一試劑，其通過將標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到第一結(jié)合物質(zhì)來獲得，所述第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合靶。所述第二室含有固定化的第二結(jié)合物質(zhì)作為第二試劑，其通過將第二結(jié)合物質(zhì)固定化在載體上來獲得，所述第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合第一結(jié)合物質(zhì)。所述第三室是檢測區(qū)段，在其中檢測所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)。在所述第一室與第二室之間提供有第一分隔壁。在所述第二室與第三室之間提供有第二分隔壁。所述第一室被構(gòu)造成使得帶有樣本的持樣器可以從所述第一室的外部插入到所述第一室的內(nèi)部。所述第一分隔壁是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁，或者是所述第一室中的內(nèi)含物可以通過它進(jìn)入所述第二室的多孔分隔壁。所述第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)可以通過它。

本發(fā)明還提供了使用所述第二靶分析工具的第二靶分析方法。所述第二靶分析方法包括下列步驟：將持留有樣本的持樣器插入到所述靶分析工具的第一室中；通過使所述樣本在所述第一室中與所述第一試劑發(fā)生接觸，將所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第一試劑的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)以形成第一偶聯(lián)物；通過使所述樣本和第一試劑的混合物在所述第二室中與所述第二試劑接觸，將所述混合物中沒有結(jié)合到所述靶的未結(jié)合的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第二試劑的固定化的第二結(jié)合物質(zhì)；通過所述第二室與第三室之間的第二分隔壁，將所述第一偶聯(lián)物引入到所述第三室；以及檢測所述第三室中所述第一偶聯(lián)物中的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)。

本發(fā)明還提供了第三靶分析工具，其包括第一室、第二室和第三室。所述第一室、第二室和第三室依次連續(xù)配置。所述第一室含有標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)作為第一試劑，其通過將標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到第二結(jié)合物質(zhì)來獲得，所述第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合第一結(jié)合物質(zhì)，所述第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合靶。所述第二室含有固定化的第一結(jié)合物質(zhì)作為第二試劑，其通過將所述第一結(jié)合物質(zhì)固定化在載體上來獲得。所述第三室是檢測區(qū)段，在其中檢測所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)。在所述第一室與第二室之間提供有第一分隔壁。在所述第二室與第三室之間提供有第二分隔壁。所述第一室被構(gòu)造成使得帶有樣本的持樣器可以從所述第一室的外部插入到所述第一室的內(nèi)部。所述第一分隔壁是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁，或者是所述第一室中的內(nèi)含物可以通過它進(jìn)入所述第二室的多孔分隔壁。所述第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)可以通過它。

本發(fā)明還提供了使用所述第三靶分析工具的第三靶分析方法。所述第三分析方法包括下列步驟：將持留有樣本的持樣器插入到所述靶分析工具的第一室中；通過使所述樣本和第一試劑的混合物在所述第二室中與所述第二試劑發(fā)生接觸，將所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第二試劑的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)，并且也將沒有結(jié)合到所述靶的未結(jié)合的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第一試劑的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)；通過所述第二室與第三室之間的第二分隔壁，將所述未結(jié)合的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)引入到所述第三室；以及檢測所述第三室中所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)。

本發(fā)明還提供了第四靶分析工具，其包括第一室、第二室和第三室。所述第一室、第二室和第三室依次連續(xù)配置。所述第一室含有固定化的第二結(jié)合物質(zhì)作為第一試劑，其通過將第二結(jié)合物質(zhì)固定化到載體上來獲得，所述第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合第一結(jié)合物質(zhì)，所述第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合靶。所述第二室含有標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)作為第二試劑，其通過將標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到所述第一結(jié)合物質(zhì)來獲得。所述第三室是檢測區(qū)段，在其中檢測所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)。在所述第一室與第二室之間提供有第一分隔壁。在所述第二室與第三室之間提供有第二分隔壁。所述第一室被構(gòu)造成使得帶有樣本的持樣器可以從所述第一室的外部插入到所述第一室的內(nèi)部。所述第一分隔壁是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁。所述第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)可以通過它。

本發(fā)明還提供了使用所述第四靶分析工具的第四靶分析方法。所述第四靶分析方法包括下列步驟：通過將持留有樣本的持樣器插入到所述靶分析工具的第一室中，然后使所述持樣器與所述第一室與第二室之間的第一分隔壁發(fā)生接觸，將所述樣本和第一試劑引入到所述第二室；通過使所述樣本和第一試劑在所述第二室中與所述第二試劑接觸，將所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第二試劑的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)以形成第一偶聯(lián)物，并且也將沒有結(jié)合到所述靶的未結(jié)合的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第二試劑的固定化的第二結(jié)合物質(zhì)；通過所述第二室與第三室之間的第二分隔壁，將所述第一偶聯(lián)物引入到所述第三室；以及檢測所述第三室中所述第一偶聯(lián)物中的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)。

本發(fā)明的效果

根據(jù)本發(fā)明的靶分析工具，可以容易地分析樣本中的靶。

附圖簡述

[圖1]圖1是示出了本發(fā)明的第一靶分析工具的實(shí)例的示意圖。

[圖2]圖2a至2c示意顯示了使用本發(fā)明的第一靶分析工具的分析方法的實(shí)例。

[圖3]圖3是示出了本發(fā)明的第二靶分析工具的實(shí)例的示意圖。

[圖4]圖4a至4c示意顯示了使用本發(fā)明的第二靶分析工具的分析方法的實(shí)例。

[圖5]圖5是示出了本發(fā)明的第二靶分析工具的另一個(gè)實(shí)例的示意圖。

[圖6]圖6是示出了在本發(fā)明的實(shí)施例1中測量到的吸光度的圖。

[圖7]圖7是示出了在本發(fā)明的實(shí)施例1中測量到的吸光度的圖。

[圖8]圖8是示出了在本發(fā)明的實(shí)施例2中收集到的標(biāo)記的互補(bǔ)鏈的比例的圖。

[圖9]圖9是示出了本發(fā)明的第二靶分析工具的又一個(gè)實(shí)例的示意圖。

[圖10]圖10是示出了本發(fā)明的第三靶分析工具的實(shí)例的示意圖。

[圖11]圖11a至11c示意顯示了使用本發(fā)明的第三靶分析工具的分析方法的實(shí)例。

[圖12]圖12是示出了本發(fā)明的第四靶分析工具的實(shí)例的示意圖。

[圖13]圖13a至13c示意顯示了使用本發(fā)明的第四靶分析工具的分析方法的實(shí)例。

[圖14]圖14是示出了在本發(fā)明的實(shí)施例3中光發(fā)射的量的圖。

[圖15]圖15是示出了在本發(fā)明的實(shí)施例4中光發(fā)射的量的圖。

[圖16]圖16是示出了在本發(fā)明的實(shí)施例5中光發(fā)射的量的圖。

[圖17]圖17是示出了在本發(fā)明的實(shí)施例6中光發(fā)射的量的圖。

執(zhí)行本發(fā)明的方式

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)中的載體可以是例如珠子。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)可以是選自例如酶、核酸、熒光物質(zhì)、染料物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)、放射活性物質(zhì)和電子供體的至少一種物質(zhì)。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述持樣器可以包含棒狀抓握部分和用于持留樣本的持留部分，并且所述持留部分可以例如被提供在所述抓握部分的尖端處。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)中的第一結(jié)合物質(zhì)可以是例如適體。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的第二結(jié)合物質(zhì)可以是例如與所述適體互補(bǔ)的核酸分子。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)可以是例如表現(xiàn)出催化功能的核酸分子。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述表現(xiàn)出催化功能的核酸分子可以是例如dna酶和rna酶中的至少一者。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述第二室可以含有吸附性載體，其吸附例如蛋白質(zhì)和脂類中的至少一者。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述吸附性載體可以是例如二氧化硅珠子。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)中的第一結(jié)合物質(zhì)可以是以靶作為抗原的抗體，并且所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的第二結(jié)合物質(zhì)可以是以所述第一結(jié)合物質(zhì)作為抗原的抗體。

本發(fā)明的第一和第三靶分析工具可以被構(gòu)造成使得它包括外筒和內(nèi)筒，所述內(nèi)筒可以被放置在所述外筒內(nèi)部，所述內(nèi)筒具有所述第一室和第二室，并且當(dāng)所述內(nèi)筒被放置在所述外筒內(nèi)部時(shí)，在所述外筒的底部與所述內(nèi)筒的底部之間存在空間。

本發(fā)明的第一和第三靶分析工具可以被構(gòu)造成使得例如它還包括預(yù)處理室，所述第一室在與所述第二室相反的一側(cè)上與所述預(yù)處理室連續(xù)配置，其中所述預(yù)處理室被構(gòu)造成使得所述持樣器可以從所述預(yù)處理室的外部插入到所述預(yù)處理室的內(nèi)部，所述預(yù)處理室含有用于從所述樣本提取組分的提取劑，在所述預(yù)處理室與第一室之間提供有分隔壁，并且所述分隔壁是在與插入到所述預(yù)處理室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁。

在本發(fā)明的第一和第三靶分析工具中，所述預(yù)處理室可以包含蓋子，其用于所述預(yù)處理室在與所述預(yù)處理室與第一室之間的分隔壁相反的一側(cè)上的開口，并且所述蓋子可以被構(gòu)造成例如使得所述持樣器可以從所述蓋子的外部插入到所述預(yù)處理室的內(nèi)部。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)中的第一結(jié)合物質(zhì)可以是適體，并且所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)中的第二結(jié)合物質(zhì)可以是例如與所述適體互補(bǔ)的核酸分子。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)可以是例如選自酶、核酸、熒光物質(zhì)、染料物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)、放射活性物質(zhì)和電子供體的至少一種物質(zhì)。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)可以是例如表現(xiàn)出催化功能的核酸分子。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述表現(xiàn)出催化功能的核酸分子可以是例如dna酶和rna酶中的至少一者。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)中的載體可以是例如珠子。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)中的載體可以是例如所述第二室的內(nèi)壁。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述持樣器可以包含棒狀抓握部分和用于持留樣本的持留部分，并且所述持留部分可以被提供在例如所述抓握部分的尖端處。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述第二室可以含有吸附性載體，其例如吸附蛋白質(zhì)和脂類中的至少一者。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述吸附性載體可以是例如二氧化硅珠子。

本發(fā)明的第二和第四靶分析工具可以被構(gòu)造成使得它例如包括外筒和內(nèi)筒，所述內(nèi)筒可以被放置在所述外筒內(nèi)部，所述內(nèi)筒具有所述第一室和第二室，并且當(dāng)所述內(nèi)筒被放置在所述外筒內(nèi)部時(shí)，在所述外筒的底部與所述內(nèi)筒的底部之間存在空間。

本發(fā)明的第二和第四靶分析工具可以被構(gòu)造成使得例如它還包括預(yù)處理室，所述第一室在與所述第二室相反的一側(cè)上與所述預(yù)處理室連續(xù)配置，其中所述預(yù)處理室被構(gòu)造成使得所述持樣器可以從所述預(yù)處理室的外部插入到所述預(yù)處理室的內(nèi)部，所述預(yù)處理室含有用于從所述樣本提取組分的提取劑，在所述預(yù)處理室與第一室之間提供有分隔壁，并且所述分隔壁是在與插入到所述預(yù)處理室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁。

在本發(fā)明的第二和第四靶分析工具中，所述預(yù)處理室可以包含蓋子，其用于所述預(yù)處理室在與所述預(yù)處理室與第一室之間的分隔壁相反的一側(cè)上的開口，并且所述蓋子可以被構(gòu)造成例如使得所述持樣器可以從所述蓋子的外部插入到所述預(yù)處理室的內(nèi)部。

本發(fā)明的第二和第三靶分析方法還可以包括下述步驟：通過例如使所述第一室中的持樣器與所述第一室和第二室之間的第一分隔壁發(fā)生接觸以破裂所述分隔壁，將所述第一室中的樣本與第一試劑的混合物引入到所述第二室。

本發(fā)明的第三靶分析方法還可以包括例如將所述持樣器插入到所述第一室中，然后將所述樣本與所述第一試劑混合的步驟。

本發(fā)明的第四靶分析方法還可以包括例如下述步驟：通過將所述持樣器插入到所述第一室中，將所述樣本與所述第一試劑混合；以及通過使所述第一室中的持樣器與所述第一室和第二室之間的第一分隔壁發(fā)生接觸以破裂所述分隔壁，將所述第一室中所述樣本與第一試劑的混合物引入到所述第二室。

[第一靶分析工具和第一靶分析方法]

下面將具體描述符合本發(fā)明的第一靶分析工具和第一靶分析方法。除非另有陳述，否則關(guān)于下面將要描述的第二至第四靶分析工具和第二至第四靶分析方法的描述，也適用于所述第一靶分析工具和第一靶分析方法。

如上所述，符合本發(fā)明的第一靶分析工具是包括第一室、第二室和第三室的靶分析工具，其中所述第一室、第二室和第三室依次連續(xù)配置，所述第一室含有固定化的第一結(jié)合物質(zhì)作為第一試劑，其通過將第一結(jié)合物質(zhì)固定化到載體上來獲得，所述第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合靶，所述第二室含有標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)作為第二試劑，其通過將標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到第二結(jié)合物質(zhì)來獲得，所述第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合第一結(jié)合物質(zhì)，所述第三室是檢測區(qū)段，在其中檢測所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)，在所述第一室與第二室之間提供有第一分隔壁，在所述第二室與第三室之間提供有第二分隔壁，所述第一室被構(gòu)造成使得帶有樣本的持樣器可以從所述第一室的外部插入到所述第一室的內(nèi)部，所述第一分隔壁是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁，并且所述第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)可以通過它。

如上所述，符合本發(fā)明的第一靶分析方法是使用符合本發(fā)明的第一靶分析工具的靶分析方法，其包括下列步驟：將持留有樣本的持樣器插入到所述靶分析工具的第一室中；通過使所述樣本與所述第一試劑在所述第一室中發(fā)生接觸，將所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第一試劑的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)；通過使所述第一室中的持樣器與所述第一室與第二室之間的第一分隔壁發(fā)生接觸以破裂所述分隔壁，將所述第一室中的所述樣本與第一試劑的混合物引入到所述第二室；通過使所述樣本與第一試劑的混合物在所述第二室中與第二試劑發(fā)生接觸，將所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第二試劑的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)；通過所述第二室與第三室之間的第二分隔壁，將未結(jié)合的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)引入到所述第三室；以及檢測所述第三室中所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明，首先，在所述第一室中，樣本中的靶結(jié)合到作為所述第一試劑的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)。然后，所述持樣器破裂所述第一室與第二室之間的第一分隔壁，由此允許所述第一室中的所述樣本與第一試劑的混合物被引入到所述第二室。在所述第二室中，所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到?jīng)]有與所述靶結(jié)合的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)。所述第二室與第三室之間的第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)可以通過它。因此，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)不通過所述分隔壁并因此保留在所述第二室中。也就是說，結(jié)合到所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)保留在所述第二室中，沒有移動(dòng)到所述第三室。另一方面，處于游離狀態(tài)沒有結(jié)合到所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)，通過所述分隔壁被引入到所述第三室。本發(fā)明的靶分析工具可以含有例如已知量的所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)。因此，未結(jié)合到所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)的量，間接地對應(yīng)于所述樣本中靶的量。因此，通過檢測引入到所述第三室的未結(jié)合的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)，可以間接地分析所述樣本中所述靶的存在或不存在或所述靶的量。

當(dāng)在本發(fā)明中使用時(shí)，術(shù)語“分析”可以意味著例如確定靶的存在或不存在的定性分析或確定靶的量的定量分析。

在本發(fā)明中使用的結(jié)合到靶的第一結(jié)合物質(zhì)不限于特定類型的結(jié)合物質(zhì)，只要例如它們結(jié)合到所述靶即可。具體來說，所述第一結(jié)合物質(zhì)可以是例如適體或抗體。下面將參考實(shí)例描述符合本發(fā)明的第一靶分析工具和第一靶分析方法，其中所述第一靶分析工具采取使用適體的第一a形式。

在本發(fā)明的第一a形式中，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)中的第一結(jié)合物質(zhì)是適體。對所述適體沒有限制，只要它們可以結(jié)合到所述靶即可。所述適體可以是例如dna適體、rna適體或含有dna和rna的嵌合適體。所述適體可以由天然核酸或非天然核酸構(gòu)成，或者可以含有天然核酸和非天然核酸。所述適體可以是例如修飾的適體。所述適體可以例如是單鏈的。

對所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的第二結(jié)合物質(zhì)沒有限制，只要它們可以結(jié)合到所述適體即可，并且可以是例如與所述適體互補(bǔ)的核酸分子(在后文中也被稱為“互補(bǔ)核酸分子”)。與所述適體互補(bǔ)的核酸分子不限于與所述適體100％互補(bǔ)的核酸分子，并且可以例如具有足以與所述適體或其部分序列雜交的互補(bǔ)性。所述互補(bǔ)性可以是例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％。通過使用所述互補(bǔ)核酸分子作為所述第二結(jié)合物質(zhì)，可以例如容易地引起所述第一偶聯(lián)物與所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)之間的反應(yīng)。因此，可以縮短反應(yīng)時(shí)間，并且也可以獲得更高的靈敏度和更寬的動(dòng)態(tài)范圍。優(yōu)選地，所述互補(bǔ)核酸分子不結(jié)合到例如所述靶。

所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)中的載體可以是例如珠子。對所述珠子的材料沒有特別限制，并且可以是例如聚合物，如瓊脂糖、瓊脂糖凝膠或纖維素。所述珠子可以是例如磁珠。所述磁珠可以是例如由磁性材料構(gòu)成的珠子、含有所述磁性材料的珠子或用所述磁性材料包被的珠子。所述磁性材料可以是例如可磁化物質(zhì)，其具體實(shí)例包括γfe2o3和fe3o4。對所述珠子的形狀沒有特別限制，并且可以例如是球形的，例如完全球形的。對所述珠子的平均直徑?jīng)]有特別限制，并且可以是例如1至10μm、10至100μm或100至1000μm。所述載體可以使用樹脂例如sepharose或sephadex來形成。

在所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)中，對被固定化在所述載體上的適體的量沒有特別限制，并且可以是例如0.1fmol至100pmol、1fmol至10pmol或10fmol至1pmol每mm²載體表面積。

所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)可以是例如表現(xiàn)出催化功能的催化性核酸分子或酶。所述酶可以是例如螢光素酶、過氧化物酶例如辣根過氧化物酶(hrp)或堿性磷酸酶。在所述第一a形式中，所述標(biāo)記物質(zhì)優(yōu)選為例如如上所述的催化性核酸分子，與所述第一結(jié)合物質(zhì)和第二結(jié)合物質(zhì)類似。

對所述催化性核酸分子沒有特別限制，并且可以是例如dna酶或rna酶。所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的催化性核酸分子優(yōu)選地例如表現(xiàn)出催化功能，不論所述靶是否已結(jié)合到所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)。對所述結(jié)合物質(zhì)與所述催化性核酸分子之間的結(jié)合的形式?jīng)]有特別限制，并且可以是例如磷酸二酯鍵。所述結(jié)合物質(zhì)和所述催化性核酸分子可以直接或例如通過連接物間接結(jié)合在一起。所述連接物可以是例如由dna和rna中的至少一者構(gòu)成的核酸分子。所述催化性核酸分子優(yōu)選是例如單鏈的。當(dāng)所述標(biāo)記物質(zhì)是催化性核酸分子時(shí)，所述催化性核酸分子可以充當(dāng)所述標(biāo)記物質(zhì)和所述第二結(jié)合物質(zhì)兩者。也就是說，如果所述催化性核酸分子與所述第一結(jié)合物質(zhì)互補(bǔ)，則所述催化性核酸分子可用作所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)。

對所述樣本沒有特別限制，并且可以是例如食品來源的樣本。食品來源的樣本的實(shí)例包括食品、食品成分、食品添加劑、食品加工廠、廚房等中的附著物質(zhì)，以及在清洗食品加工廠、廚房等后獲得的液體。對所述樣本的形式?jīng)]有特別限制，并且所述樣本可以是例如液體或固體。當(dāng)所述樣本是固體時(shí)，所述樣本可以采取例如使用溶劑制備的混合溶液、提取液、溶解液等的形式。對所述溶劑沒有特別限制，并且可以是例如水、生理鹽水或緩沖液。所述樣本可以例如含有或者可以不含所述靶，或者所述樣本是否含有所述靶可能是未知的。

在本發(fā)明的第一a形式中，例如，適體可以用作所述第一結(jié)合物質(zhì)，互補(bǔ)核酸分子可以用作所述第二結(jié)合物質(zhì)，并且催化性核酸分子可以用作標(biāo)記物質(zhì)。因此，例如，采取所述第一a形式的靶分析工具是熱穩(wěn)定的，并且可以更容易地儲(chǔ)存。也可以例如使用酶例如螢光素酶、堿性磷酸酶或過氧化物酶作為所述標(biāo)記物質(zhì)。因此，可以例如以高靈敏度分析靶。

如上所述，所述第一室與第二室之間的第一分隔壁是在與所述持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁。所述第一分隔壁是例如所述第一室的底部，并且也可以說所述第一分隔壁是所述第二室的頂部。對所述第一分隔壁的材料、性質(zhì)等沒有特別限制，只要所述第一分隔壁在與所述持樣器接觸后可以破裂即可。所述第一分隔壁可以例如由薄的金屬薄膜(例如鋁箔)、紙或合成纖維形成。

如上所述，所述第二室與第三室之間的第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)可以通過它。所述第二分隔壁的孔眼尺寸可以例如根據(jù)所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)和標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)的尺寸適合地設(shè)置。所述第二分隔壁的孔眼尺寸是例如0.2至100μm、0.2至50μm或0.5至10μm。

當(dāng)催化性核酸分子被用作所述標(biāo)記物質(zhì)時(shí)，優(yōu)選地，所述第二室還含有作為第二試劑的吸附蛋白質(zhì)和脂類中的至少一者。當(dāng)所述第二室含有所述吸附性載體時(shí)，所述吸附性載體在所述第二室中吸附蛋白質(zhì)和脂類。這例如防止可能影響所述催化性核酸分子的催化功能的蛋白質(zhì)和脂類被引入到所述第三室，使得所述第三室中的未結(jié)合的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)可以更準(zhǔn)確地檢測。在所述第一a形式中，作為結(jié)合到靶的所述第一結(jié)合物質(zhì)的所述適體和作為結(jié)合到所述第一結(jié)合物質(zhì)的第二結(jié)合物質(zhì)的所述互補(bǔ)核酸分子兩者都是核酸。因此，通過使用所述吸附性載體將作為核酸之外的組分的蛋白質(zhì)、脂類等保留在所述第二室中，可以更準(zhǔn)確地進(jìn)行靶分析。

對所述吸附性載體的材料沒有特別限制，并且可以是例如二氧化硅、具有多孔結(jié)構(gòu)的交聯(lián)聚合物和活性炭。對所述吸附性載體的形狀沒有特別限制，并且所述吸附性載體可以是例如珠子。優(yōu)選地，所述吸附性載體是例如二氧化硅珠子。對所述吸附性載體的尺寸沒有特別限制。優(yōu)選地，所述吸附性載體的尺寸使得例如所述吸附性載體不能通過所述第二分隔壁(多孔分隔壁)。所述吸附性載體可以具有例如與所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)中的載體相同的尺寸。

當(dāng)所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)是催化性核酸分子或酶時(shí)，優(yōu)選地，所述第三室還含有例如用于所述催化性核酸分子或酶的催化功能的底物。作為所述底物，可以組合地使用atp和螢光素，或者可以例如使用魯米諾反應(yīng)溶液。

下面將參考附圖具體描述使用本發(fā)明的采取第一a形式的靶分析工具的靶分析方法的實(shí)例。然而，應(yīng)該指出，本發(fā)明不限于該說明性實(shí)例。

圖1示意顯示了所述第一a形式的靶分析工具和使用這種靶分析工具的靶分析方法。靶分析工具1包括第一室11、第二室12和第三室13。在所述第一室11中，配置有通過將適體141固定化在珠子142上所獲得的固定化的適體14。在所述第二室12中，配置有通過向與適體141互補(bǔ)的互補(bǔ)鏈151添加dna酶152而獲得的標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15和二氧化硅珠子16。在第一室11與第二室12之間提供有第一分隔壁111。在第二室12與第三室13之間提供有多孔第二分隔壁121。持樣器17包括棒狀抓握部分171和樣本持留部分172，并且持留部分172被提供在抓握部分171的尖端處。持樣器17使用持留部分172收集樣本。樣本中的靶18和所述靶之外的污染物19例如附著于持留部分172。

接下來，將參考圖2a至2c描述使用圖1中示出的靶分析工具1的分析方法。圖2a至2c示意顯示了使用靶分析工具1的方法。

首先，將在持留部分172中持留有樣本的持樣器17插入到靶分析工具1的第一室11，由此在第一室11中使所述樣本中的靶18結(jié)合到固定化的適體14中的適體141。對用于結(jié)合它們的處理?xiàng)l件沒有特別限制，并且可以例如如下：處理溫度為4℃至45℃，處理時(shí)間為10秒至10分鐘。用于結(jié)合它們的處理優(yōu)選地在例如液體溶劑中進(jìn)行，并且所述液體溶劑可以是例如水性溶劑，如水、緩沖溶液、生理鹽水或其混合物。

接下來，持樣器17破裂第一分隔壁111，由此將第一室11中的內(nèi)含物引入到第二室12。然后，使標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15結(jié)合到固定化在珠子142上的適體141中沒有結(jié)合到靶18的那些適體。對用于結(jié)合它們的處理?xiàng)l件沒有特別限制，并且可以例如如下：處理溫度為4℃至45℃，處理時(shí)間為10秒至30分鐘。

第二分隔壁121是固定化的適體14不能通過并且標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15可以通過的多孔分隔壁。因此，在標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15中，只有未結(jié)合到固定化的適體14的那些通過第二分隔壁121被導(dǎo)入到第三室13。在第二室12中配置有二氧化硅珠子16。因此，例如，源自于所述樣本的污染物19例如蛋白質(zhì)和脂類被吸附在二氧化硅珠子16上，由此防止污染物19被引入到第三室13。然后，在第三室13中，通過對未結(jié)合的標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15進(jìn)行dna酶152的催化功能的測量，可以間接地分析所述樣本中的靶。用于測量dna酶152的催化功能的方法，可以根據(jù)dna酶152的類型適合地確定。

本發(fā)明的第一靶分析工具還可以包括例如預(yù)處理室。對于所述預(yù)處理室來說，可以參考例如下文中給出的解釋。

本發(fā)明的第一靶分析工具可以例如包括外筒和內(nèi)筒。在這種情況下，所述內(nèi)筒可以被放置在所述外筒內(nèi)部，所述內(nèi)筒具有所述第一室和第二室，并且當(dāng)所述內(nèi)筒被放置在所述外筒內(nèi)部時(shí)，在所述外筒的底部與所述內(nèi)筒的底部之間存在空間。當(dāng)所述第一靶分析工具包括所述外筒和所述內(nèi)筒時(shí)，可以通過在將未結(jié)合的標(biāo)記的互補(bǔ)鏈從所述內(nèi)筒中的第二室引入到所述外筒后拆掉所述內(nèi)筒，將所述外筒用作所述第三室。

[第二靶分析工具和第二靶分析方法]

下面將具體描述符合本發(fā)明的第二靶分析工具和第二靶分析方法。除非另有陳述，否則關(guān)于第一、第三和第四靶分析工具和第一、第三和第四靶分析方法的描述，也適用于所述第二靶分析工具和第二靶分析方法。

如上所述，符合本發(fā)明的第二靶分析工具是包括第一室、第二室和第三室的靶分析工具，其中所述第一室、第二室和第三室依次連續(xù)配置，所述第一室含有標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)作為第一試劑，其通過將標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到第一結(jié)合物質(zhì)來獲得，所述第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合靶，所述第二室含有固定化的第二結(jié)合物質(zhì)作為第二試劑，其通過將第二結(jié)合物質(zhì)固定化在載體上來獲得，所述第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合第一結(jié)合物質(zhì)，所述第三室是檢測區(qū)段，在其中檢測所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)，在所述第一室與第二室之間提供有第一分隔壁，在所述第二室與第三室之間提供有第二分隔壁，所述第一室被構(gòu)造成使得帶有樣本的持樣器可以從所述第一室的外部插入到所述第一室的內(nèi)部，所述第一分隔壁是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁，或者是所述第一室中的內(nèi)含物可以通過它進(jìn)入所述第二室的多孔分隔壁，并且所述第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)(第一偶聯(lián)物)可以通過它。

如上所述，符合本發(fā)明的第二靶分析方法是使用符合本發(fā)明的第二靶分析工具的靶分析方法，所述方法包括下列步驟：將持留有樣本的持樣器插入到所述靶分析工具的第一室中；通過使所述樣本在所述第一室中與所述第一試劑發(fā)生接觸，將所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第一試劑的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)以形成第一偶聯(lián)物；通過使所述樣本和第一試劑的混合物在所述第二室中與所述第二試劑接觸，將所述混合物中沒有結(jié)合到所述靶的未結(jié)合的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第二試劑的固定化的第二結(jié)合物質(zhì)；通過所述第二室與第三室之間的第二分隔壁，將所述第一偶聯(lián)物引入到所述第三室；以及檢測所述第三室中所述第一偶聯(lián)物中的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明，首先，在所述第一室中，樣本中的靶結(jié)合到作為所述第一試劑的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)。然后，將所述第一室中所述樣本與第一試劑的混合物引入到所述第二室。在所述第二室中，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)中未結(jié)合到所述靶的那些結(jié)合物質(zhì)。所述第二室與第三室之間的第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)可以通過它。因此，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)不通過所述分隔壁并因此保留在所述第二室中。也就是說，結(jié)合到所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)的所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)保留在所述第二室中，沒有移動(dòng)到所述第三室。另一方面，處于游離狀態(tài)沒有結(jié)合到所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)，即形成所述第一偶聯(lián)物的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)，通過所述分隔壁被引入到所述第三室。本發(fā)明的靶分析工具可以含有例如已知量的所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)。因此，未結(jié)合到所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)的量，間接地對應(yīng)于所述樣本中靶的量。因此，通過檢測引入到所述第三室的未結(jié)合的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)，可以間接地分析所述樣本中所述靶的存在或不存在或所述靶的量。

在本發(fā)明中，所述第一分隔壁可以例如是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁，或者是所述第一室中的內(nèi)含物可以通過它進(jìn)入所述第二室的多孔分隔壁。在前一種情況下，通過例如破裂所述第一分隔壁，所述第一室中的內(nèi)含物可以移動(dòng)到所述第二室。在后一種情況下，所述第一室中的內(nèi)含物可以通過所述多孔分隔壁移動(dòng)到所述第二室。在前一種情況下，可以使用可以以上述方式破裂的元件。在后一種情況下，可以使用例如具有所述第一室中的內(nèi)含物可以通過的孔眼的膜。

當(dāng)在本發(fā)明中使用時(shí)，術(shù)語“分析”可以意味著例如確定靶的存在或不存在的定性分析或確定靶的量的定量分析。

如上所述，在本發(fā)明中使用的結(jié)合到靶的第一結(jié)合物質(zhì)不限于特定類型的結(jié)合物質(zhì)，只要例如它們結(jié)合到所述靶即可。具體來說，所述第一結(jié)合物質(zhì)可以是例如適體或抗體。下面將參考實(shí)例描述符合本發(fā)明的第二靶分析工具和第二靶分析方法，其中所述第二靶分析工具采取使用適體的第二a形式。

在本發(fā)明的第二a形式中，所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)中的第一結(jié)合物質(zhì)是適體。所述適體與例如為所述第一a形式所描述的相同。

對所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)中的第二結(jié)合物質(zhì)沒有限制，只要它們可以結(jié)合到所述適體即可，并且可以是例如與所述適體互補(bǔ)的核酸分子。與所述適體互補(bǔ)的核酸分子與例如為所述第一a形式所描述的相同。

所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)優(yōu)選是例如表現(xiàn)出催化功能的催化性核酸分子或酶。所述催化性核酸分子和酶與例如為所述第一a形式所描述的相同。

所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)中的載體可以是珠子，或者例如所述第二室的內(nèi)壁可以充當(dāng)所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)的載體。所述珠子與例如為所述第一a形式所描述的相同。當(dāng)所述載體是珠子時(shí)，對被固定化在所述載體(珠子)上的第二結(jié)合物質(zhì)的量沒有特別限制，并且可以是例如0.1fmol至100pmol、1fmol至10pmol或10fmol至1pmol每mm²珠子表面積。當(dāng)所述第二室的內(nèi)壁是載體時(shí)，對被固定化在所述載體(珠子)上的第二結(jié)合物質(zhì)的量沒有特別限制，并且可以是例如0.1fmol至100pmol、1fmol至10pmol或10fmol至1pmol每mm²第二室的內(nèi)壁面積。

如上所述，在本發(fā)明的第二a形式中，適體可以用作所述第一結(jié)合物質(zhì)，互補(bǔ)核酸分子可以用作所述第二結(jié)合物質(zhì)，并且催化性核酸分子可以用作所述標(biāo)記物質(zhì)。因此，例如，采取所述第二a形式的靶分析工具是熱穩(wěn)定的，并且可以更容易地儲(chǔ)存。也可以例如使用酶例如螢光素酶、堿性磷酸酶或過氧化物酶作為所述標(biāo)記物質(zhì)。因此，可以例如以高靈敏度分析靶。

所述第一室與第二室之間的第一分隔壁和所述第二室與第三室之間的第二分隔壁與為所述第一a形式所描述的相同。

優(yōu)選地，所述第二室還含有吸附蛋白質(zhì)和脂類中的至少一者的吸附性載體作為所述第二試劑。所述吸附性載體與例如為所述第一a形式所描述的相同。

優(yōu)選地，所述第三室還含有例如用于所述催化性核酸分子或酶的催化功能的底物。所述底物的實(shí)例包括用于過氧化物酶的底物和用于酶例如螢光素酶和堿性磷酸酶的底物。

下面將參考附圖具體描述使用本發(fā)明的采取第二a形式的靶分析工具的靶分析方法的實(shí)例。然而，應(yīng)該指出，本發(fā)明不限于該說明性實(shí)例。除非另有陳述，否則上面關(guān)于所述第一a形式的描述也適用于本發(fā)明的第二a形式。

圖3示意示出了采取所述第二a形式的靶分析工具和使用這種靶分析工具的靶分析方法。在圖3中，與圖1中相同的部件被提供有相同的附圖標(biāo)記。靶分析工具2包括第一室11、第二室12和第三室13。在第一室11中配置有通過向適體241添加dna酶242而獲得的標(biāo)記的適體24。在第二室12中，配置有通過將與適體241互補(bǔ)的互補(bǔ)鏈251固定化在珠子252上而獲得的固定化的互補(bǔ)鏈25和二氧化硅珠子16。在第一室11與第二室12之間提供有第一分隔壁111。在第二室12與第三室13之間提供有多孔第二分隔壁121。

接下來，將參考圖4a至4c描述使用圖3中示出的靶分析工具2的分析方法。圖4a至4c示意顯示了使用靶分析工具2的方法。

首先，將在持留部分172中持留有樣本的持樣器17插入到靶分析工具2的第一室11，由此在第一室11中使所述樣本中的靶18結(jié)合到標(biāo)記的適體24中的適體241。對用于結(jié)合它們的處理?xiàng)l件沒有特別限制，并且可以例如如下：處理溫度為4℃至37℃，處理時(shí)間為10秒至30分鐘。

接下來，持樣器17破裂第一分隔壁111，由此將第一室11中的內(nèi)含物引入到第二室12。然后，使標(biāo)記的適體24中未結(jié)合到靶18的那些適體結(jié)合到固定化的互補(bǔ)鏈25。對用于結(jié)合它們的處理?xiàng)l件沒有特別限制，并且可以例如如下：處理溫度為4℃至37℃，處理時(shí)間為10秒至30分鐘。

第二分隔壁121是固定化的互補(bǔ)鏈25不能通過并且標(biāo)記的適體24可以通過的多孔分隔壁。因此，在標(biāo)記的適體24中，只有未結(jié)合到固定化的互補(bǔ)鏈25的那些適體通過第二分隔壁121被導(dǎo)入到第三室13。在第二室12中配置有二氧化硅珠子16。因此，例如，源自于所述樣本的污染物19例如蛋白質(zhì)和脂類被吸附在二氧化硅珠子16上，由此防止污染物19被引入到第三室13。然后，在第三室13中，通過對未結(jié)合的標(biāo)記的適體24進(jìn)行dna酶242的催化功能的測量，可以間接地分析所述樣本中的靶。用于測量dna酶242的催化功能的方法，可以根據(jù)dna酶242的類型適合地確定。

圖5示意顯示了采取第二a形式的靶分析工具的另一個(gè)實(shí)例。除非另有陳述，否則圖5與圖3相同。在圖5中，互補(bǔ)鏈251被固定化在第二室12的內(nèi)壁上。由于互補(bǔ)鏈251被固定化在第二室12的內(nèi)壁上，結(jié)合到固定化在第二室12的內(nèi)壁上的互補(bǔ)鏈251的標(biāo)記的適體24保留在第二室12中，不從第二室12移動(dòng)到第三室13。

本發(fā)明的第二靶分析工具還可以包括例如預(yù)處理室。本發(fā)明的第二靶分析工具可以被構(gòu)造成使得所述第一室在與所述第二室相反的一側(cè)上與所述預(yù)處理室連續(xù)配置。也就是說，優(yōu)選地，在本發(fā)明的第二靶分析工具中，所述預(yù)處理室、第一室、第二室和第三室被依次配置。

所述預(yù)處理室可以被構(gòu)造成使得例如所述持樣器可以從外部插入到所述預(yù)處理室的內(nèi)部，并且所述預(yù)處理室含有用于從所述樣本提取組分的提取劑。對所述提取劑沒有特別限制，并且可以根據(jù)將要進(jìn)行分析的樣本的類型、待分析的組分的類型等適合地選擇。

本發(fā)明的第二靶分析工具被構(gòu)造成使得例如在所述預(yù)處理室與第一室之間提供有分隔壁，并且所述分隔壁是在與插入到所述預(yù)處理室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁。所述被破裂的分隔壁例如與上面所述相同，并且可以是例如鋁箔等。

本發(fā)明的第二靶分析工具可以被構(gòu)造成使得例如所述預(yù)處理室具有蓋子，其用于所述預(yù)處理室在與所述第一室的分隔壁相反的一側(cè)上的開口，并且所述持樣器可以從所述蓋子的外部插入到所述預(yù)處理室的內(nèi)部。所述蓋子優(yōu)選地是在與所述持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁。所述分隔壁的實(shí)例包括上面作為分隔壁的實(shí)例給出的那些。

本發(fā)明的第二靶分析工具可以例如包括外筒和內(nèi)筒。例如上面關(guān)于所述外筒和內(nèi)筒的描述，也適用于所述第二靶分析工具中的外筒和內(nèi)筒。

下面將參考圖9，用實(shí)例描述本發(fā)明的第二靶分析工具和第二靶分析方法，其中所述第二靶分析工具采取還包括所述預(yù)處理室的第二b形式。這種第二b形式是所述第二a形式的變化形式。與所述第二a形式中相同，在所述第二b形式中，適體被用作所述第一結(jié)合物質(zhì)，與所述適體互補(bǔ)的核酸分子被用作第二結(jié)合物質(zhì)。除非另有陳述，否則上面關(guān)于所述第二a形式的描述也適用于所述第二b形式。

圖9示意示出了采取所述第二b形式的靶分析工具。在圖9中，與圖3和4中的那些相同的部件被提供有相同的附圖標(biāo)記。靶分析工具10包括預(yù)處理室91、第一室92、第二室93和第三室94。在所述第一室92中，配置有通過向適體添加dna酶而獲得的標(biāo)記的適體24。標(biāo)記的適體24優(yōu)選地處于干燥狀態(tài)，因?yàn)槔缈梢愿煽康胤乐箻?biāo)記的適體24的降解。第二室93裝填有通過將所述適體的互補(bǔ)鏈固定化在珠子(所述珠子可以由例如樹脂形成)上而獲得的固定化的互補(bǔ)鏈25。在第三室94中，配置有用于dna酶的底物95。底物9優(yōu)選地處于干燥狀態(tài)。預(yù)處理室91具有蓋子901，其用于覆蓋預(yù)處理室91的上方開口。在預(yù)處理室91與第一室92之間提供有分隔壁911。在第一室92與第二室93之間提供有多孔的第一分隔壁921。在第二室93與第三室94之間提供有多孔的第二分隔壁931。預(yù)處理室91含有引入其中的提取劑96。

接下來，將描述使用圖9中示出的靶分析工具10的分析方法。

首先，將持留有樣本的持樣器17插入到靶分析工具10，使得預(yù)處理室91的蓋子901和分隔壁911被持樣器17的尖端刺穿。這允許預(yù)處理室91中的提取劑96被引入到第一室92。然后，在第一室92中，所述樣本中的靶18結(jié)合到標(biāo)記的適體24。此時(shí)，優(yōu)選地振搖所述靶分析工具以將靶18與標(biāo)記的適體24混合。

持樣器17中，第一分隔壁921是多孔的，使得第一室92的內(nèi)含物通過第一分隔壁921的孔眼被引入到第二室93。然后，在標(biāo)記的適體24中，那些未結(jié)合到靶18的適體結(jié)合到固定化的互補(bǔ)鏈25。

所述第二分隔壁931是多孔分隔壁，固定化的互補(bǔ)鏈25不通過它并且標(biāo)記的適體24通過它。因此，在標(biāo)記的適體24中，只有那些未結(jié)合到固定化的互補(bǔ)鏈25的適體通過第二分隔壁931被引入到第三室94。因此，在第三室94中，通過對未結(jié)合的標(biāo)記的適體24進(jìn)行dna酶242的催化功能的測量，可以間接地分析所述樣本中的靶。所述用于測量dna酶242的催化功能和配置在第三室94中的底物95的方法，可以根據(jù)例如dna酶242的類型適合地確定。

根據(jù)所述第二b形式，可以通過例如僅僅推動(dòng)持樣器17一次并任選地振搖持樣器17，容易地進(jìn)行分析。在這種實(shí)施方式中，當(dāng)例如使用酶代替dna酶時(shí)，可以以相同的方式分析所述靶。

[第三靶分析工具和第三靶分析方法]

下面將具體描述本發(fā)明的第三靶分析工具和第三靶分析方法。除非另有陳述，否則關(guān)于第一、第二和第四靶分析工具和第一、第二和第四靶分析方法的描述，也適用于所述第三靶分析工具和第三靶分析方法。

如上所述，符合本發(fā)明的第三靶分析工具是包括第一室、第二室和第三室的靶分析工具，其中所述第一室、第二室和第三室依次連續(xù)配置，所述第一室含有標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)作為第一試劑，其通過將標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到第二結(jié)合物質(zhì)來獲得，所述第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合第一結(jié)合物質(zhì)，所述第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合靶，所述第二室含有固定化的第一結(jié)合物質(zhì)作為第二試劑，其通過將所述第一結(jié)合物質(zhì)固定化在載體上來獲得，所述第三室是檢測區(qū)段，在其中檢測所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)，在所述第一室與第二室之間提供有第一分隔壁，在所述第二室與第三室之間提供有第二分隔壁，所述第一室被構(gòu)造成使得帶有樣本的持樣器可以從所述第一室的外部插入到所述第一室的內(nèi)部，所述第一分隔壁是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁，或者是所述第一室中的內(nèi)含物可以通過它進(jìn)入所述第二室的多孔分隔壁，所述第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)可以通過它。

如上所述，符合本發(fā)明的第三靶分析方法是使用符合本發(fā)明的第三靶分析工具的靶分析方法，所述方法包括下列步驟：將持留有樣本的持樣器插入到所述靶分析工具的第一室中；通過使所述樣本和第一試劑的混合物在所述第二室中與所述第二試劑發(fā)生接觸，將所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第二試劑的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)，并且也將沒有結(jié)合到所述靶的未結(jié)合的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第一試劑的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)；通過所述第二室與第三室之間的第二分隔壁，將所述未結(jié)合的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)引入到所述第三室；以及檢測所述第三室中所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明，首先，在所述第一室中，例如，將樣本中的靶與作為所述第一試劑的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)混合。然后，將所述第一室中所述樣本與第一試劑的混合物引入到所述第二室。在所述第二室中，所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第二試劑的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)，并且未結(jié)合到所述靶的固定化的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第一試劑的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)。所述第二室與第三室之間的第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)可以通過它。因此，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)不通過所述分隔壁并因此保留在所述第二室中。也就是說，結(jié)合到所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)保留在所述第二室中，不移動(dòng)到所述第三室。另一方面，處于游離狀態(tài)沒有被結(jié)合到所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)，通過所述分隔壁被引入到所述第三室。本發(fā)明的靶分析工具可以含有例如已知量的所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)。因此，未結(jié)合到所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)的量，間接地對應(yīng)于所述樣本中靶的量。因此，通過檢測引入到所述第三室的未結(jié)合的標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)，可以間接地分析所述樣本中所述靶的存在或不存在或所述靶的量。

在本發(fā)明中，所述第一分隔壁可以例如是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁，或者是所述第一室中的內(nèi)含物可以通過它進(jìn)入所述第二室的多孔分隔壁。在前一種情況下，通過例如破裂所述第一分隔壁，所述第一室中的內(nèi)含物可以移動(dòng)到所述第二室。在后一種情況下，所述第一室中的內(nèi)含物可以通過所述多孔分隔壁移動(dòng)到所述第二室。在前一種情況下，可以使用可以以上述方式破裂的元件。在后一種情況下，可以使用例如具有所述第一室中的內(nèi)含物可以通過的孔眼的膜。

當(dāng)在本發(fā)明中使用時(shí)，術(shù)語“分析”可以意味著例如確定靶的存在或不存在的定性分析或確定靶的量的定量分析。

如上所述，在本發(fā)明中使用的結(jié)合到靶的第一結(jié)合物質(zhì)不限于特定類型的結(jié)合物質(zhì)，只要例如它們結(jié)合到所述靶即可。具體來說，所述第一結(jié)合物質(zhì)可以是例如適體或抗體。下面將參考實(shí)例描述符合本發(fā)明的第三靶分析工具和第三靶分析方法，其中所述第三靶分析工具采取使用適體的第三a形式。

在本發(fā)明的第三a形式中，所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)中的第一結(jié)合物質(zhì)是適體。所述適體與例如為所述第一a形式所描述的相同。

對所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的第二結(jié)合物質(zhì)沒有限制，只要它們可以結(jié)合到所述適體即可，并且可以是例如與所述適體互補(bǔ)的核酸分子。與所述適體互補(bǔ)的核酸分子與例如為所述第一a形式所描述的相同。

所述標(biāo)記的第二結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)優(yōu)選為例如表現(xiàn)出催化功能的催化性核酸分子或酶。所述催化性核酸分子和酶與例如為所述第一a形式所描述的相同。

所述固定化的第一結(jié)合物質(zhì)中的載體可以是珠子，或者例如所述第二室的內(nèi)壁可以充當(dāng)所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)的載體。所述珠子與例如為所述第一a形式所描述的相同。當(dāng)所述載體是珠子時(shí)，對被固定化在所述載體(珠子)上的適體的量沒有特別限制，并且可以是例如0.1fmol至100pmol、1fmol至10pmol或10fmol至1pmol每mm²珠子表面積。當(dāng)所述第二室的內(nèi)壁是載體時(shí)，對被固定化在所述載體(珠子)上的適體的量沒有特別限制，并且可以是例如0.1fmol至100pmol、1fmol至10pmol或10fmol至1pmol每mm²第二室的內(nèi)壁面積。

如上所述，在本發(fā)明的第三a形式中，例如，適體可以用作所述第一結(jié)合物質(zhì)，互補(bǔ)核酸分子可以用作所述第二結(jié)合物質(zhì)，并且催化性核酸分子可以用作所述標(biāo)記物質(zhì)。因此，例如，采取所述第三a形式的靶分析工具是熱穩(wěn)定的，并且可以更容易地儲(chǔ)存。也可以例如使用酶例如螢光素酶或堿性磷酸酶作為所述標(biāo)記物質(zhì)。因此，可以例如以高靈敏度分析靶。

所述第一室與第二室之間的第一分隔壁和所述第二室與第三室之間的第二分隔壁與為所述第一a形式所描述的相同。

優(yōu)選地，所述第二室還含有吸附蛋白質(zhì)和脂類中的至少一者的吸附性載體作為所述第二試劑。所述吸附性載體與例如為所述第一a形式所描述的相同。

優(yōu)選地，所述第三室還含有例如用于所述催化性核酸分子或酶的催化功能的底物。所述底物的實(shí)例包括用于過氧化物酶的底物和用于酶例如螢光素酶和堿性磷酸酶的底物。

下面將參考附圖具體描述使用本發(fā)明的采取第三a形式的靶分析工具的靶分析方法的實(shí)例。然而，應(yīng)該指出，本發(fā)明不限于該說明性實(shí)例。除非另有陳述，否則上面關(guān)于所述第一a和第二a形式的描述也適用于本發(fā)明的第三a形式。

圖10示意示出了采取所述第三a形式的靶分析工具和使用它的靶分析方法。在圖10中，與圖1中相同的部件被提供有相同的附圖標(biāo)記。靶分析工具3包括第一室11、第二室12和第三室13。在第一室11中配置有通過向與適體141互補(bǔ)的互補(bǔ)鏈151添加dna酶152而獲得的標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15。在第二室12中，配置有通過將適體141固定化在珠子142上而獲得的固定化的適體14和二氧化硅珠子16。在第一室11與第二室12之間提供有第一分隔壁111。在第二室12與第三室13之間提供有多孔第二分隔壁121。

接下來，將參考圖11a至11c描述使用圖10中示出的靶分析工具3的分析方法。圖11a至11c示意顯示了使用靶分析工具3的方法。

首先，將在持留部分172中持留有樣本的持樣器17插入到靶分析工具3的第一室11，由此使所述樣本中的靶18與標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15在第一室11中混合。對用于混合它們的處理?xiàng)l件沒有特別限制，并且可以例如如下：處理溫度為4℃至37℃，處理時(shí)間為10秒至30分鐘。

接下來，持樣器17破裂第一分隔壁111，由此將第一室11中的內(nèi)含物引入到第二室12。然后，使所述內(nèi)含物中的靶18結(jié)合到固定化的適體14，并且也使固定化的適體14中未結(jié)合到靶18的適體結(jié)合到標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15。對用于結(jié)合它們的處理?xiàng)l件沒有特別限制，并且可以例如如下：處理溫度為4℃至37℃，處理時(shí)間為10秒至30分鐘。

第二分隔壁121是固定化的適體14不能通過并且標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15可以通過的多孔分隔壁。因此，在標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15中，只有未結(jié)合到固定化的適體14的那些通過第二分隔壁121被導(dǎo)入到第三室13。在第二室12中配置有二氧化硅珠子16。因此，例如，源自于所述樣本的污染物19例如蛋白質(zhì)和脂類被吸附在二氧化硅珠子16上，由此防止污染物19被引入到第三室13。然后，在第三室13中，通過對標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15進(jìn)行dna酶152的催化功能的測量，可以間接地分析所述樣本中的靶。用于測量dna酶152的催化功能的方法，可以根據(jù)dna酶152的類型適合地確定。

本發(fā)明的第三靶分析工具還可以包括例如預(yù)處理室。上面關(guān)于所述預(yù)處理室的描述也適用于例如所述第三靶分析工具中的預(yù)處理室。本發(fā)明的第三靶分析工具可以包括例如外筒和內(nèi)筒。上面關(guān)于外筒和內(nèi)筒的描述也適用于例如所述第三靶分析工具中的外筒和內(nèi)筒。

[第四靶分析工具和第四靶分析方法]

下面將具體描述本發(fā)明的第四靶分析工具和第四靶分析方法。除非另有陳述，否則關(guān)于第一至第三靶分析工具和第一至第三靶分析方法的描述，也適用于所述第四靶分析工具和第四靶分析方法。

如上所述，符合本發(fā)明的第四靶分析工具是包括第一室、第二室和第三室的靶分析工具，其中所述第一室、第二室和第三室依次連續(xù)配置，所述第一室含有固定化的第二結(jié)合物質(zhì)作為第一試劑，其通過將第二結(jié)合物質(zhì)固定化到載體上來獲得，所述第二結(jié)合物質(zhì)結(jié)合第一結(jié)合物質(zhì)，所述第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合靶，所述第二室含有標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)作為第二試劑，其通過將標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到所述第一結(jié)合物質(zhì)來獲得，所述第三室是檢測區(qū)段，在其中檢測所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)，在所述第一室與第二室之間提供有第一分隔壁，在所述第二室與第三室之間提供有第二分隔壁，所述第一室被構(gòu)造成使得帶有樣本的持樣器可以從所述第一室的外部插入到所述第一室的內(nèi)部，所述第一分隔壁是在與插入到所述第一室中的持樣器的尖端接觸后破裂的分隔壁，并且所述第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)可以通過它。

如上所述，符合本發(fā)明的第四靶分析方法是使用符合本發(fā)明的第四靶分析工具的靶分析方法，所述方法包括下列步驟：通過將持留有樣本的持樣器插入到所述靶分析工具的第一室中，然后使所述持樣器與所述第一室與第二室之間的第一分隔壁發(fā)生接觸，將所述樣本和第一試劑引入到所述第二室；通過使所述樣本和第一試劑在所述第二室中與所述第二試劑接觸，將所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第二試劑的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)以形成第一偶聯(lián)物，并且也將沒有結(jié)合到所述靶的未結(jié)合的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第二試劑的固定化的第二結(jié)合物質(zhì)；通過所述第二室與第三室之間的第二分隔壁，將所述第一偶聯(lián)物引入到所述第三室；以及檢測所述第三室中所述第一偶聯(lián)物中的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明，首先，例如，在所述第一室中，將樣本中的靶與作為第一試劑的固定化的第二結(jié)合物質(zhì)混合。然后，將所述第一室中所述樣本與第一試劑的混合物引入到所述第二室。在所述第二室中，所述樣本中的靶結(jié)合到作為所述第二試劑的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)，并將未結(jié)合到所述靶的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)結(jié)合到作為所述第一試劑的固定化的第二結(jié)合物質(zhì)。所述第二室與第三室之間的第二分隔壁是多孔分隔壁，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)不能通過它并且所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)可以通過它。因此，所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)不通過所述分隔壁并因此保留在所述第二室中。也就是說，結(jié)合到所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)的所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)保留在所述第二室中，沒有移動(dòng)到所述第三室。另一方面，處于游離狀態(tài)沒有結(jié)合到所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)，即形成所述第一偶聯(lián)物的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)，通過所述分隔壁被引入到所述第三室。本發(fā)明的靶分析工具可以含有例如已知量的所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)。因此，未結(jié)合到所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)的量，間接地對應(yīng)于所述樣本中靶的量。因此，通過檢測引入到所述第三室的未結(jié)合的標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)，可以間接地分析所述樣本中所述靶的存在或不存在或所述靶的量。

當(dāng)在本發(fā)明中使用時(shí)，術(shù)語“分析”可以意味著例如確定靶的存在或不存在的定性分析或確定靶的量的定量分析。

如上所述，在本發(fā)明中使用的結(jié)合到靶的第一結(jié)合物質(zhì)不限于特定類型的結(jié)合物質(zhì)，只要例如它們結(jié)合到所述靶即可。具體來說，所述第一結(jié)合物質(zhì)可以是例如適體或抗體。下面將參考實(shí)例描述符合本發(fā)明的第四靶分析工具和第四靶分析方法，其中所述第四靶分析工具采取使用適體的第四a形式。

在本發(fā)明的第四a形式中，所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)中的第一結(jié)合物質(zhì)是適體。所述適體與例如為所述第一a形式所描述的相同。

對所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)中的第二結(jié)合物質(zhì)沒有限制，只要它們可以結(jié)合到所述適體即可，并且可以是例如與所述適體互補(bǔ)的核酸分子。與所述適體互補(bǔ)的核酸分子與例如為所述第一a形式所描述的相同。

所述標(biāo)記的第一結(jié)合物質(zhì)中的標(biāo)記物質(zhì)優(yōu)選為例如表現(xiàn)出催化功能的催化性核酸分子或酶。所述催化性核酸分子和酶與例如為所述第一a形式所描述的相同。

所述固定化的第二結(jié)合物質(zhì)中的載體可以是珠子。所述珠子與例如為所述第一a形式所描述的相同。當(dāng)所述載體是珠子時(shí)，對被固定化在所述載體(珠子)上的適體的量沒有特別限制，并且可以是例如0.1fmol至100pmol、1fmol至10pmol或10fmol至1pmol每mm²珠子表面積。

如上所述，在本發(fā)明的第四a形式中，例如，適體可以用作所述第一結(jié)合物質(zhì)，互補(bǔ)核酸分子可以用作所述第二結(jié)合物質(zhì)，并且催化性核酸分子可以用作所述標(biāo)記物質(zhì)。因此，例如，采取所述第四a形式的靶分析工具是熱穩(wěn)定的，并且可以更容易地儲(chǔ)存。也可以例如使用酶例如螢光素酶、堿性磷酸酶或過氧化物酶作為所述標(biāo)記物質(zhì)。因此，可以例如以高靈敏度分析靶。

所述第一室與第二室之間的第一分隔壁和所述第二室與第三室之間的第二分隔壁與為所述第一a形式所描述的相同。

優(yōu)選地，所述第二室還含有吸附蛋白質(zhì)和脂類中的至少一者的吸附性載體作為所述第二試劑。所述吸附性載體與例如為所述第一a形式所描述的相同。

優(yōu)選地，所述第三室還含有例如用于所述催化性核酸分子或酶的催化功能的底物。所述底物的實(shí)例包括用于過氧化物酶的底物和用于酶例如螢光素酶和堿性磷酸酶的底物。

下面將參考附圖具體描述使用本發(fā)明的采取第四a形式的靶分析工具的靶分析方法的實(shí)例。然而，應(yīng)該指出，本發(fā)明不限于該說明性實(shí)例。除非另有陳述，否則上面關(guān)于所述第一至第三a形式的描述也適用于本發(fā)明的第四a形式。

圖12示意示出了采取所述第四a形式的靶分析工具和使用它的靶分析方法。在圖12中，與圖3中相同的部件被提供有相同的附圖標(biāo)記。靶分析工具4包括第一室11、第二室12和第三室13。在第一室11中配置有通過將與適體241互補(bǔ)的互補(bǔ)鏈251固定化在珠子252上而獲得的固定化的互補(bǔ)鏈25。在第二室12中，配置有通過向適體241添加dna酶242而獲得的標(biāo)記的適體24和二氧化硅珠子16。在第一室11與第二室12之間提供有第一分隔壁111。在第二室12與第三室13之間提供有多孔第二分隔壁121。在第一室11和第二室12之間提供有第一分隔壁111。在第二室12與第三室13之間提供有多孔第二分隔壁121。

接下來，將參考圖13a至13c描述使用圖12中示出的靶分析工具4的分析方法。圖13a至13c示意顯示了使用靶分析工具4的方法。

首先，將在持留部分172中持留有樣本的持樣器17插入到靶分析工具4的第一室11，由此將所述樣本中的靶18與固定化的互補(bǔ)鏈25在第一室11中混合。對用于混合它們的處理?xiàng)l件沒有特別限制，并且可以例如如下：處理溫度為4℃至37℃，處理時(shí)間為10秒至30分鐘。

接下來，持樣器17破裂第一分隔壁111，由此將第一室11中的內(nèi)含物引入到第二室12。然后，使所述內(nèi)含物中的靶18結(jié)合到標(biāo)記的適體24，并且也使標(biāo)記的適體24中未結(jié)合到靶18的那些適體結(jié)合到固定化的互補(bǔ)鏈25。對用于結(jié)合它們的處理?xiàng)l件沒有特別限制，并且可以例如如下：處理溫度為4℃至37℃，處理時(shí)間為10秒至30分鐘。

第二分隔壁121是固定化的互補(bǔ)鏈25不能通過并且標(biāo)記的適體24可以通過的多孔分隔壁。因此，在標(biāo)記的適體24中，只有未結(jié)合到固定化的互補(bǔ)鏈25的那些適體通過第二分隔壁121被導(dǎo)入到第三室13。在第二室12中配置有二氧化硅珠子16。因此，例如，源自于所述樣本的污染物19例如蛋白質(zhì)和脂類被吸附在二氧化硅珠子16上，由此防止污染物19被引入到第三室13。然后，在第三室13中，通過對標(biāo)記的適體24進(jìn)行dna酶242的催化功能的測量，可以間接地分析所述樣本中的靶。用于測量dna酶242的催化功能的方法，可以根據(jù)dna酶242的類型適合地確定。

本發(fā)明的第四靶分析工具還可以包括例如預(yù)處理室。上面關(guān)于所述預(yù)處理室的描述，也例如適用于所述第四靶分析工具中的預(yù)處理室。本發(fā)明的第四靶分析工具可以包括例如外筒和內(nèi)筒。上面關(guān)于所述外筒和內(nèi)筒的描述，也例如適用于所述第四靶分析工具中的外筒和內(nèi)筒。

實(shí)施例

(實(shí)施例1)

采取所述第一a形式的靶分析工具被構(gòu)造成使得例如如圖1和2中所述，二氧化硅珠子16被配置在第二室12中。使用這種構(gòu)造，污染物例如蛋白質(zhì)被吸附在二氧化硅珠子16上，由此可以防止所述污染物被引入到第三室13。因此，本實(shí)施例檢查污染的蛋白質(zhì)是否被二氧化硅珠子16移除。

(1)關(guān)于蛋白質(zhì)移除的檢查1

作為緩沖溶液，使用2×緩沖液(80mmol/lhepes，250mmol/lnacl，10mmol/lkcl，2mmol/lmgcl2和0.1％tween20)。將人α-凝血酶用作所述污染蛋白質(zhì)。將所述人α-凝血酶以200ppm的濃度添加到50％甘油，以制備凝血酶溶液。以1g/ml的濃度向蒸餾水添加二氧化硅珠子(商品名：二氧化硅，sigma)以制備二氧化硅珠子溶液。

將所述凝血酶溶液添加到25μl所述緩沖溶液，使得所述人α-凝血酶的終濃度為100ppm。向其進(jìn)一步添加5μl的所述二氧化硅珠子溶液，使得在所述混合溶液中，所述人α-凝血酶被吸附到二氧化硅珠子上。然后，將所述混合溶液離心(11,000g，1分鐘)，通過除去所述二氧化硅珠子收集液體級分。檢測所述液體級分中的人α-凝血酶。人α-凝血酶通過使用分光光度計(jì)(商品名：nanodrop，thermoscientific，其同樣適用于后文)在230至330nm的波長下測量所述液體級分的吸光度來檢測。作為對照，向25μl所述緩沖溶液添加25μl所述凝血酶溶液以制備含有100ppm人α-凝血酶的溶液，并測量該溶液的吸光度。

其結(jié)果示出在圖6中。圖6是示出了所述液體級分的吸光度的圖。圖6顯示了對用二氧化硅珠子處理的液體級分獲得的結(jié)果，以及對100ppm人α-凝血酶溶液獲得的結(jié)果。正如可以在圖6中看到的，100ppm人α-凝血酶溶液在280nm附近顯示出吸收。相反，用二氧化硅珠子處理的液體級分在280nm附近沒有顯示出吸收。這些結(jié)果證實(shí)，人α-凝血酶被吸附在二氧化硅珠子上并因此被移除。

(2)蛋白質(zhì)移除的檢查2

在上述條目(1)中，發(fā)現(xiàn)污染的蛋白質(zhì)可以被二氧化硅珠子移除。另一方面，存在著將核酸分子例如適體用作結(jié)合到靶的第一結(jié)合物質(zhì)，并將與所述適體互補(bǔ)的核酸分子用作結(jié)合到所述第一結(jié)合物質(zhì)的第二結(jié)合物質(zhì)的情況。因此，進(jìn)行本檢查以便證實(shí)核酸分子不被二氧化硅珠子移除。

作為核酸分子，使用具有下述序列的dna分子。

dna分子(seqidno：1)

5’-aaaaaccaaccacaccaacc-3’

向25μl緩沖溶液添加25μl凝血酶溶液，使得人α-凝血酶的終濃度為100ppm。接下來，向其添加所述dna分子，使得所述dna分子的終濃度為25μmol/l。進(jìn)一步向其添加5μl二氧化硅珠子溶液，使得在所述混合溶液中，人α-凝血酶被吸附到二氧化硅珠子上。然后，將所述混合溶液離心(11,000g，1分鐘)，通過除去所述二氧化硅珠子收集液體級分。使用分光光度計(jì)在230至330nm的波長下測量所述液體級分的吸光度。作為對照1和2，分別對下述溶液進(jìn)行吸光度測量：含有100ppm人α-凝血酶和25μmol/l的dna分子的溶液1，通過向25μl緩沖溶液添加凝血酶溶液和dna分子來制備；以及通過向50μl緩沖溶液添加dna分子，使得dna分子的終濃度為25μmol/l的溶液2。

其結(jié)果示出在圖7中。圖7是示出了液體級分的吸光度的圖。圖7顯示了對用100ppm二氧化硅珠子處理的液體級分獲得的結(jié)果，以及對對照1和2獲得的結(jié)果。正如可以在圖7中看到的，含有蛋白質(zhì)(凝血酶)和核酸(dna分子)的對照1(100ppm凝血酶+25μmol/ldna)在寬泛的波長區(qū)域內(nèi)顯示出最高吸光度。相反，在用二氧化硅珠子處理含有蛋白質(zhì)和核酸的混合溶液后收集的液體級分中，只有蛋白質(zhì)被二氧化硅珠子移除。因此，所述液體級分的吸收曲線與只含核酸(25μmol/ldna)的對照2的吸收曲線重疊，并且所述液體級分在260nm處顯示出吸收。這證實(shí)了液體級分中的dna可以被檢測。

(實(shí)施例2)

采取所述第一a形式的靶分析工具被構(gòu)造成使得例如如圖2中所示，在第二室12中，使固定化的適體14中的適體141結(jié)合到與標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15互補(bǔ)的互補(bǔ)鏈151，并且在標(biāo)記的互補(bǔ)鏈15中，只有未結(jié)合到固定化的適體14的那些被引入到所述第三室。因此，本實(shí)施例在靶蛋白存在下進(jìn)行處理，并測量最終收集的互補(bǔ)鏈的量。

(1)固定化的適體

通過將適體結(jié)合到珠子來制備固定化的適體。作為珠子，使用向其添加鏈親和素的磁珠(商品名：dynabeadsmyone鏈親和素c1，invitrogen)。作為適體，使用與凝血酶結(jié)合的凝血酶適體(ta-3bio)。所述凝血酶適體由下述序列表示，并在3’末端處添加有生物素和5個(gè)胸腺嘧啶堿基。所述固定化的適體通過每2mg磁珠固定化1000pmol的凝血酶適體來制備。

凝血酶適體(seqidno：2)

5’-ggttggtgtggttggttttt-3’

(2)互補(bǔ)鏈

制備與所述凝血酶適體互補(bǔ)的互補(bǔ)鏈。

互補(bǔ)鏈(seqidno：3)

5’-aaaaaccaaccacaccaacc-3’

(3)方法

向緩沖溶液添加所述固定化的適體以制備固定化的適體溶液。向蒸餾水添加所述互補(bǔ)鏈以制備互補(bǔ)鏈溶液。以1g/ml的濃度向蒸餾水添加二氧化硅珠子(商品名：二氧化硅，sigmachemicalco.)以制備二氧化硅珠子溶液。使用人α-凝血酶作為靶蛋白。向50％甘油添加人α-凝血酶以制備凝血酶溶液。

向25μl緩沖溶液添加100μl所述固定化的適體溶液，使得源自于所述固定化的適體的適體的量為1000pmol。向其添加25μl凝血酶溶液以便獲得預(yù)定的人α-凝血酶終濃度(0、1、3、10、30和100ppm)。將每種得到的混合溶液在室溫(25℃左右)攪拌10分鐘，由此使所述固定化的適體結(jié)合到作為靶蛋白的人α-凝血酶。向該混合溶液進(jìn)一步添加100μl互補(bǔ)鏈溶液(互補(bǔ)鏈：1000pmol)，以使得到的混合溶液含有與源自于所述固定化的適體的適體相同量的互補(bǔ)鏈(25μmol/l)。將得到的混合溶液在室溫?cái)嚢?0分鐘，由此使所述互補(bǔ)鏈結(jié)合到固定化的適體中沒有與靶蛋白結(jié)合的適體。然后，收集50μl該混合溶液作為樣品，并與5μl二氧化硅珠子溶液混合。然后，將所述混合溶液離心(11,000g，1分鐘)，并通過移除二氧化硅珠子收集液體級分。使用分光光度計(jì)在230至330nm的波長下測量所述液體級分的吸光度。作為對照，向蒸餾水添加所述互補(bǔ)鏈以制備互補(bǔ)鏈終濃度為25μmol/l的互補(bǔ)鏈溶液，并測量該互補(bǔ)鏈溶液的吸光度。

所述收集的液體級分含有未結(jié)合到固定化的適體的互補(bǔ)鏈。因此，可以說所述液體級分的吸光度是未結(jié)合的互補(bǔ)鏈的吸光度(c)。另一方面，可以說互補(bǔ)鏈終濃度為25μmol/l的互補(bǔ)鏈溶液的吸光度對應(yīng)于在與固定化的適體發(fā)生接觸之前所有互補(bǔ)鏈的吸光度(i)。因此，通過用液體級分中收集的互補(bǔ)鏈的吸光度(c)除以在與固定化的適體反應(yīng)之前所述互補(bǔ)鏈的吸光度(i)，確定收集到的互補(bǔ)鏈(c)相對于最初添加的互補(bǔ)鏈(i)的比例(100×[c/i]，單位：％)。

其結(jié)果示出在圖8中。圖8是示出了人α-凝血酶的濃度與上述比例(％)之間的關(guān)系的圖。正如可以在圖8中看到的，隨著作為靶蛋白的凝血酶的濃度提高，收集到的互補(bǔ)鏈的量保持增加。這證實(shí)了可以通過使用適體和與所述適體互補(bǔ)的互補(bǔ)鏈來檢測靶。

(實(shí)施例3)

采取第二a形式的靶分析工具被構(gòu)造成使得例如如圖4中所示，使被持樣器17持留的樣本中的靶18結(jié)合到第一室11中標(biāo)記的適體24中的適體241，并且使標(biāo)記的適體24中未結(jié)合到靶18的那些適體結(jié)合到第二室12中的固定化的互補(bǔ)鏈25。因此，本實(shí)施例檢查是否可以通過用持樣器17的棉拭子收集樣本并以上述次序引起反應(yīng)來測量靶的量。

(1)樣本

將可商購的花生(種子)用碾磨機(jī)磨碎。將5g由此獲得的粉末與20mlsb1t緩沖溶液混合，并將得到的混合溶液在室溫(25℃左右，同樣適用于下文)下，使用搖床以90至110rpm振搖1分鐘。所述sb1t緩沖溶液具有下述組分：40mmol/lhepes(ph7.4)，125mmol/lnacl，5mmol/lkcl，1mmol/lmgcl2，和0.005(v/v)％20。

在振搖后將所述混合溶液在室溫下以10000g離心30分鐘。然后收集上清液，并將所述上清液通過濾膜(孔眼尺寸：0.8μm)過濾，以制備花生提取物。然后，使用蛋白濃度測量試劑盒(蛋白質(zhì)測定試劑，bio-rad)定量所述花生提取物中的蛋白質(zhì)濃度。

(2)標(biāo)記的適體

通過將生物素化的適體結(jié)合到添加有鏈親和素的螢光素酶(streptavidinlucia，invivogen)，來制備標(biāo)記的適體。作為適體，使用與花生過敏原結(jié)合的花生適體。所述花生適體由下述序列表示，并在5’末端添加有生物素。所述標(biāo)記的適體通過每100pmol鏈親和素固定化400pmol所述適體來制備。

花生適體(seqidno：4)

5’-ggatattgcctcgccacagttaagtcaggtggttggttatggttgggactgactctctacagggaacgctcggattatc-3’

(3)固定化的互補(bǔ)鏈

固定化的互補(bǔ)鏈通過將互補(bǔ)鏈結(jié)合到珠子來制備。作為珠子，使用添加有鏈親和素的磁珠(myonesabeads，invirogen)。作為適體，使用各自由下述序列表示并在5’末端添加有生物素的互補(bǔ)鏈。所述固定化的互補(bǔ)鏈通過每mg磁珠固定化500pmol所述互補(bǔ)鏈來制備。

互補(bǔ)鏈(seqidno：5)

5’-aaaaaaaaaaaaaaaaaaaatagagagtcagtcccaacca-3’

(4)方法

向緩沖溶液添加所述標(biāo)記的適體以制備標(biāo)記的適體溶液。向蒸餾水添加所述固定化的互補(bǔ)鏈以制備固定化的互補(bǔ)鏈溶液。

通過將所述花生提取物用sb1t緩沖溶液稀釋來制備樣品，以便獲得預(yù)定的花生蛋白濃度(0、1、10、100、1000和7700ppm)。將100μl每種樣品施加到鋁箔。然后，用棉拭子擦拭所述鋁箔。將所述棉拭子與400μlsb1t緩沖溶液進(jìn)行接觸。將得到的混合溶液在室溫下溫育1分鐘，由此提取被所述棉拭子持留的靶。因此，獲得提取物。向25μl所述提取物添加25μl標(biāo)記的適體溶液，使得源自于所述標(biāo)記的適體的適體的量為1pmol。將得到的混合溶液在室溫下攪拌1分鐘，由此使所述標(biāo)記的適體結(jié)合到作為靶蛋白的花生過敏原。向該混合溶液進(jìn)一步添加4μl所述固定化的互補(bǔ)鏈溶液(互補(bǔ)鏈：40pmol)，使得所述得到的混合溶液含有與源自于所述標(biāo)記的適體的適體相同量的互補(bǔ)鏈(10μmol/l)。將得到的混合溶液在室溫下攪拌4分鐘，由此使所述固定化的互補(bǔ)鏈結(jié)合到所述標(biāo)記的適體中未結(jié)合到靶蛋白的適體。

接下來，將得到的混合溶液置于磁托架中，以將所述混合溶液分離成磁珠級分和磁珠之外的組分的級分，并收集后一種級分。然后，向30μl所述上清液添加30μl底物溶液(quanti-luc(注冊商標(biāo))，invivogen)，并用移液器吸取得到的混合溶液。隨后，使用讀板器(infinitem1000pro，tecan)測量每個(gè)樣品中光發(fā)射的量。

其結(jié)果示出在圖14中。圖14是示出了光發(fā)射的量的圖。在圖14中，水平軸指示通過將所述提取物與標(biāo)記的適體混合而獲得的混合溶液中花生蛋白質(zhì)的濃度，并且豎直軸指示光發(fā)射的量。正如可以在圖14中看到的，光發(fā)射的量以花生蛋白濃度依賴性方式增加。這證實(shí)了可以通過用持樣器17的棉拭子收集樣本并以上述次序引起反應(yīng)，來測量靶的量。

(實(shí)施例4)

采取第二a形式的靶分析工具被構(gòu)造成使得例如如圖4中所示，使被持樣器17持留的樣本中的靶18在第一室11中結(jié)合到標(biāo)記的適體24中的適體241，并使標(biāo)記的適體24中未結(jié)合到靶18的那些適體在第二室12中結(jié)合到固定化的互補(bǔ)鏈25。隨后，只有標(biāo)記的適體24與靶18的第一偶聯(lián)物被引入到所述第三室。因此，本實(shí)施例檢查了是否可以通過以上述次序引起反應(yīng)，然后使標(biāo)記的適體24、固定化的互補(bǔ)鏈25和靶18的混合物通過第二分隔壁121的濾膜，并檢測由此獲得的溶液中的所述第一偶聯(lián)物，來測量靶的量。

首先，以與實(shí)施例3中相同的方式制備花生提取物、標(biāo)記的適體溶液和固定化的互補(bǔ)鏈溶液，區(qū)別在于代替所述磁珠，使用添加有鏈親和素的樹脂珠子(pierce(注冊商標(biāo))streptavidinplusultralink(注冊商標(biāo))樹脂，pierce)。

通過將所述花生提取物用sb1t緩沖溶液稀釋來制備樣品，以便獲得預(yù)定的花生蛋白濃度(0、0.002、0.01、0.05、0.25、1.25和6.25ppm)。向25μl所述提取物添加25μl標(biāo)記的適體溶液，使得源自于所述標(biāo)記的適體的適體的量為1pmol。將得到的混合物在室溫下攪拌1分鐘，由此使所述標(biāo)記的適體結(jié)合到作為靶蛋白的花生過敏原。向該混合溶液進(jìn)一步添加10μl所述固定化的互補(bǔ)鏈溶液(互補(bǔ)鏈：40pmol)，使得所述得到的混合溶液含有與源自于所述標(biāo)記的適體的適體相同量的互補(bǔ)鏈(4μmol/l)。將得到的混合溶液在室溫下攪拌4分鐘，由此使所述固定化的互補(bǔ)鏈結(jié)合到所述標(biāo)記的適體中未結(jié)合到靶蛋白的適體。使用過濾板(孔眼尺寸：0.22μm，milliporecorporation)對得到的混合溶液進(jìn)行離心過濾。向30μl由此獲得的濾液添加30μl底物溶液，并用移液器吸取得到的混合溶液。隨后，使用讀板器測量每個(gè)樣品中光發(fā)射的量。

其結(jié)果示出在圖15中。圖15是示出了光發(fā)射的量的圖。在圖15中，水平軸指示花生蛋白質(zhì)的濃度，并且豎直軸指示光發(fā)射的量。正如可以在圖15中看到的，光發(fā)射的量以花生蛋白濃度依賴性方式增加。這證實(shí)了可以通過以上述次序引起反應(yīng)，然后使標(biāo)記的適體24、固定化的互補(bǔ)鏈25和靶18的混合物通過第二分隔壁121的濾膜，并檢測由此獲得的溶液中的所述第一偶聯(lián)物，來測量靶的量。

(實(shí)施例5)

采取所述第四a形式的靶分析工具被構(gòu)造成使得例如如圖13中所述，將被持樣器17持留的樣本中的靶18在第一室11中與固定化的互補(bǔ)鏈25混合，并且在第二室12中，使第一室11中的內(nèi)含物中的靶18結(jié)合到標(biāo)記的適體24，并且使標(biāo)記的適體24中未結(jié)合到靶18的那些適體結(jié)合到固定化的互補(bǔ)鏈25。因此，本實(shí)施例檢查了是否可以通過以上述次序引起反應(yīng)來測量靶的量。

首先，以與實(shí)施例3中相同的方式制備花生提取物、標(biāo)記的適體溶液和固定化的互補(bǔ)鏈溶液。

通過將所述花生提取物用sb1t緩沖溶液稀釋來制備樣品，以便獲得預(yù)定的花生蛋白濃度(0、0.002、0.01、0.05、0.25、1.25和6.25)。由此制備了樣品。向25μl每個(gè)樣品添加25μl固定化的互補(bǔ)鏈溶液，使得源自于所述固定化的互補(bǔ)鏈的互補(bǔ)鏈的量為1pmol，并將得到的混合溶液在室溫下攪拌1分鐘。向該混合溶液進(jìn)一步添加4μl所述標(biāo)記的適體溶液(適體：40pmol)，使得所述得到的混合溶液含有與源自于所述固定化的互補(bǔ)鏈的互補(bǔ)鏈相同量的適體(10μmol/l)。將得到的混合溶液在室溫下攪拌4分鐘，由此使所述標(biāo)記的適體結(jié)合到作為靶蛋白的花生過敏原，并且也使所述固定化的互補(bǔ)鏈結(jié)合到所述標(biāo)記的適體中未結(jié)合到靶蛋白的適體。

接下來，將得到的混合溶液置于磁托架中，以將所述混合溶液分離成磁珠級分和磁珠之外的組分的級分，并收集后一種級分。然后，向30μl所述上清液添加30μl底物溶液，并用移液器吸取得到的混合溶液。隨后，使用讀板器測量每個(gè)樣品中光發(fā)射的量。

其結(jié)果示出在圖16中。圖16是示出了光發(fā)射的量的圖。在圖16中，水平軸指示花生蛋白質(zhì)的濃度，并且豎直軸指示光發(fā)射的量。正如可以在圖16中看到的，光發(fā)射的量以花生蛋白濃度依賴性方式增加。這證實(shí)了可以通過以上述次序引起反應(yīng)，來測量靶的量。

(實(shí)施例6)

采取所述第二a形式的靶分析工具被構(gòu)造成使得例如如圖4中所示，在第一室11中，使被持樣器17持留的樣本中的靶18結(jié)合到標(biāo)記的適體24中的適體241，并且使標(biāo)記的適體24中未結(jié)合到靶18的那些適體在第二室12中結(jié)合到固定化的互補(bǔ)鏈25。隨后，只有標(biāo)記的適體24與靶18的第一偶聯(lián)物被引入到所述第三室。因此，本實(shí)施例檢查了是否可以通過以上述次序引起反應(yīng)，然后使標(biāo)記的適體24、固定化的互補(bǔ)鏈25和靶18的混合物通過第二分隔壁121的濾膜，并檢測由此獲得的溶液中的第一偶聯(lián)物，來測量靶的量。

以與實(shí)施例3中相同的方式制備花生提取物2并定量其中的蛋白質(zhì)濃度，區(qū)別在于將所述花生粉末與sb1t緩沖溶液混合，然后將得到的混合溶液振搖過夜(約16小時(shí))。此外，標(biāo)記的適體溶液和固定化的互補(bǔ)鏈溶液也以與實(shí)施例3中相同的方式制備。

通過將所述花生提取物2用sb1t緩沖溶液稀釋來制備花生稀釋溶液，以便在與所述標(biāo)記的適體溶液和固定化的互補(bǔ)鏈溶液混合后獲得的反應(yīng)溶液中獲得預(yù)定的蛋白質(zhì)濃度(0、1.25、5、20和80ppm)。接下來，通過向試管添加40μl所述固定化的互補(bǔ)鏈溶液和160μl所述sb1t緩沖溶液來制備稀釋的固定化的互補(bǔ)鏈溶液。向另一個(gè)試管添加250μl所述標(biāo)記的適體溶液，并進(jìn)一步添加250μl每種花生稀釋溶液。在所述添加后，將試管攪拌。進(jìn)一步向所述試管添加200μl稀釋的固定化的互補(bǔ)鏈溶液。隨后將所述試管攪拌，然后在室溫下溫育1分鐘。

在所述溫育后，使用5ml注射器和濾膜(孔眼尺寸：0.45μm)將反應(yīng)溶液過濾，并將濾液收集在已事先添加有800μl底物溶液的測量容器中。在收集后，將所述測量容器攪拌，并溫育30秒至1分鐘。然后，使用照度計(jì)(clean-trace(注冊商標(biāo))，3mco.)測量所述測量容器中每個(gè)測量樣品中的光發(fā)射的量。

其結(jié)果示出在圖17中。圖17是示出了光發(fā)射的量的圖。在圖17中，水平軸指示蛋白質(zhì)的濃度，并且豎直軸指示光發(fā)射的量。正如可以在圖17中看到的，光發(fā)射的量以花生蛋白濃度依賴性方式增加。這證實(shí)了可以通過以上述次序引起反應(yīng)，然后使標(biāo)記的適體24、固定化的互補(bǔ)鏈25和靶18的混合物通過第二分隔壁121的濾膜，并檢測由此獲得的溶液中的第一偶聯(lián)物，來測量靶的量。

盡管上面已參考說明性實(shí)施方式和實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但本發(fā)明絕不僅限于此。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說可能變得顯而易見的各種不同改變和修改，可以在本發(fā)明的構(gòu)造和詳情中做出，而不背離本發(fā)明的范圍。

本申請要求2015年1月22日提交的日本專利申請?zhí)?015-010514和2015年7月22日提交的日本專利申請?zhí)?015-145280的優(yōu)先權(quán)。所述日本專利申請的全部公開內(nèi)容通過參考并入本文。

工業(yè)實(shí)用性

根據(jù)本發(fā)明，可以容易地分析樣本中的靶。

附圖標(biāo)記的解釋

1、2、3、4、10：靶分析工具

11、92：第一室

12、93：第二室

13、94：第三室

14：固定化的適體

15：標(biāo)記的互補(bǔ)鏈

24：標(biāo)記的適體

25：固定化的互補(bǔ)鏈

141、241：適體

142、252：珠子

151、251：互補(bǔ)鏈

152、242：dna酶

16：二氧化硅珠子

17：持樣器

171：抓握部分

172：持留部分

18：靶

19：污染物

91：預(yù)處理室

95：底物

96：提取劑

111、921：第一分隔壁

121、931：第二分隔壁

901：蓋子

911：分隔壁。

序列表

<110>日本電氣方案創(chuàng)新株式會(huì)社

<120>靶分析工具和靶分析方法

<130>1010100036

<150>jp2015-010514

<151>2015-01-22

<150>jp2015-145280

<151>2015-07-22

<160>5

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>20

<212>dna

<213>artificialsequence

<220>

<223>polynucleotide

<400>1

aaaaaccaaccacaccaacc20

<210>2

<211>20

<212>dna

<213>artificialsequence

<220>

<223>aptamer

<400>2

ggttggtgtggttggttttt20

<210>3

<211>20

<212>dna

<213>artificialsequence

<220>

<223>complementarypolynucleotide

<400>3

aaaaaccaaccacaccaacc20

<210>4

<211>79

<212>dna

<213>artificialsequence

<220>

<223>aptamer

<400>4

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<210>5

<211>40

<212>dna

<213>artificialsequence

<220>

<223>complementarypolynucleotide

<400>5

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