本發(fā)明屬于煙用添加劑的理化檢驗
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種煙用添加劑中二甲苯麝香和芝麻酚的測定方法，具體涉及一種對煙用添加劑中二甲苯麝香和芝麻酚，采用同位素稀釋-分散液液萃取法進行萃取、富集與凈化，并采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法進行測定的方法。
背景技術(shù)：
：在卷煙制品的設(shè)計和生產(chǎn)過程中往往需要添加各種不同的助劑，如香精和料液、防腐劑、保潤劑和助燃劑等，用以改善煙草和卷煙制品理化性能，滿足生產(chǎn)、加工需求并提高產(chǎn)品品質(zhì)。同時，這些添加劑的使用也使之成為影響卷煙產(chǎn)品安全性的重要因素。二甲苯麝香是一種具有麝香氣味的人工合成硝基化合物，由于其香味特殊，留香持久的特性，主要被用作化妝品香精及家用洗滌、清潔用品的定香劑。該化合物能夠在環(huán)境中穩(wěn)定存在，且具有較大的生物富集性，因此被歐盟列為高度關(guān)注物質(zhì)，國內(nèi)煙草行業(yè)也明確規(guī)定煙用添加劑中禁止使用二甲苯麝香。芝麻酚，又名3,4-亞甲二氧基苯酚，存在于芝麻油中，是天然有機酚類化合物，具有較強的抗氧化性。但由于其有一定的致癌性，2006年日本已將芝麻酚列為食品禁用添加劑。上述兩種物質(zhì)目前都已被煙草行業(yè)列入禁用添加劑名單，但由于目前我國煙草行業(yè)煙用添加劑使用較為廣泛、種類較多、來源較復(fù)雜，上述有害成分仍有可能在卷煙加香加料過程中進入卷煙產(chǎn)品。因此建立簡單、快速、靈敏的測定這些有害物質(zhì)的分析方法對煙用添加劑的質(zhì)量控制具有重要意義。目前，這些有害物質(zhì)的檢測方法已有文獻報道，例如專利(cn102998382a)采用無水乙醇超聲溶解后直接進行氣質(zhì)聯(lián)用譜儀(gc/ms)檢測，但該方法缺少富集手段、靈敏度不高，對于復(fù)雜基質(zhì)中的痕量檢測，并不能滿足分析要求。分散液液萃取(dispersiveliquid-liquidmicroextraction,dllme)是一種新型的微萃取技術(shù)，由rezaee等于2006年首次報道。該方法集采集、萃取、濃縮于一體，相對于一般的液液萃取法而言，具有溶劑用量小、萃取效率高、富集倍數(shù)大、操作方便等優(yōu)點，在痕量分析領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。然而，常規(guī)dllme法也有一定的局限性，該方法一般較為適用于基質(zhì)為水樣的檢測，當應(yīng)用于香精香料、煙用添加劑等乙醇含量較高，有機質(zhì)較為復(fù)雜的樣品時，基質(zhì)效應(yīng)將不可避免地較為明顯，重復(fù)性和回收率也有改進的余地。技術(shù)實現(xiàn)要素：鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明的目的在于提供一種煙用添加劑中二甲苯麝香和芝麻酚的測定方法，對于煙用添加劑中二甲苯麝香和芝麻酚，通過采用在樣品中加入同位素內(nèi)標-分散液液萃取法進行萃取、富集與凈化，采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法進行測定。為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種煙用添加劑中二甲苯麝香和芝麻酚的測定方法，通過在煙用添加劑中加入待測化合物的同位素內(nèi)標溶液，進行分散液液萃取，再采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(gc-ms)測定煙用添加劑中二甲苯麝香和芝麻酚的含量。較佳地，所述二甲苯麝香的cas號為81-15-2，所述芝麻酚的cas號為533-31-3。較佳地，所述一種煙用添加劑中二甲苯麝香和芝麻酚的測定方法，具體包括以下步驟：1)標準溶液的配制：配制混合標準儲備溶液、內(nèi)標溶液和混合標準溶液；a1)分別稱取二甲苯麝香和芝麻酚的標準品，加入有機溶劑定容，配成混合標準儲備溶液；優(yōu)選地，所述混合標準儲備溶液中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度均為1-100μg/ml。更優(yōu)選地，所述混合標準儲備溶液中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度均為10μg/ml。a2)分別稱取二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素，加入有機溶劑定容，配成內(nèi)標溶液；優(yōu)選地，所述內(nèi)標溶液中二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素的濃度均為10-1000μg/ml。更優(yōu)選地，所述內(nèi)標溶液中二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素的濃度均為100μg/ml。優(yōu)選地，所述二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素分別為它們所對應(yīng)的氘代試劑。具體地，所述二甲苯麝香的同位素為氘代二甲苯麝香(d15-二甲苯麝香)，所述芝麻酚的同位素為氘代芝麻酚(d3-芝麻酚)。所述氘代二甲苯麝香和氘代芝麻酚為商品化試劑，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，適于作為內(nèi)標。a3)分別移取不同體積的步驟a1)中混合標準儲備溶液，再分別加入一定體積的步驟a2)中內(nèi)標溶液，用有機溶劑定容配制為一系列不同濃度的混合標準溶液。優(yōu)選地，步驟a1)、a2)或a3)中，所述有機溶劑為無水乙醇。優(yōu)選地，所述混合標準溶液的濃度為0-200ng/ml。更優(yōu)選地，所述混合標準溶液的濃度為2-200ng/ml。優(yōu)選地，所述混合標準溶液內(nèi)，氘代二甲苯麝香和氘代芝麻酚的濃度均為10-1000ng/ml。更優(yōu)選地，所述混合標準溶液內(nèi)，氘代二甲苯麝香和氘代芝麻酚的濃度均為100ng/ml。2)樣品前處理：稱取煙用添加劑樣品，加入有機溶劑和步驟1)中的內(nèi)標溶液，渦旋混勻，進行超聲振蕩使樣品完全溶解后靜置，獲得提取液；優(yōu)選地，所述有機溶劑為無水乙醇。優(yōu)選地，所述煙用添加劑樣品加入的質(zhì)量(克，g)與有機溶劑加入的體積(毫升，ml)之比為1:15-25。更優(yōu)選地，所述煙用添加劑樣品加入的質(zhì)量(g)與有機溶劑加入的體積(ml)之比為1:20。優(yōu)選地，所述煙用添加劑樣品加入的質(zhì)量(g)與內(nèi)標溶液加入的體積(ml)之比為4-6:1。更優(yōu)選地，所述煙用添加劑樣品加入的質(zhì)量(g)與內(nèi)標溶液加入的體積(ml)之比為5:1。優(yōu)選地，所述煙用添加劑樣品中還加入水。所述水為去離子水。當煙用添加劑樣品為粘稠樣品時，加入水有助于分散樣品。優(yōu)選地，所述煙用添加劑樣品加入的質(zhì)量(g)與水加入的體積(ml)之比為1:0-4。更優(yōu)選地，所述煙用添加劑樣品加入的質(zhì)量(g)與水加入的體積(ml)之比為1:0-2。優(yōu)選地，所述渦旋時間為1±0.1min。所述渦旋作為一種樣品前處理方式，主要用于將溶質(zhì)與萃取溶劑之間進行充分混合，提升萃取效率。優(yōu)選地，所述超聲振蕩時間為9-11min。更優(yōu)選地，所述超聲振蕩時間為10min。優(yōu)選地，所述靜置時間為9-11min。更優(yōu)選地，所述靜置時間為10min。3)分散液液萃?。喝〔襟E2)中提取液，加入水、萃取劑和分散劑，充分混勻，進行超聲萃取從而形成微乳液，再進行離心后，取下層沉積相，待測；優(yōu)選地，所述提取液與水之間加入的體積比為1:5-7。更優(yōu)選地，所述提取液與水之間加入的體積比為1:6。所述水為去離子水。優(yōu)選地，所述萃取劑選自四氯化碳、氯仿和二氯甲烷中的一種。更優(yōu)選地，所述萃取劑為二氯甲烷。優(yōu)選地，所述提取液與萃取劑之間加入的體積比為5:1-2。更優(yōu)選地，所述提取液與萃取劑之間加入的體積比為5:1。優(yōu)選地，所述分散劑選自甲醇、丙酮和乙腈中的一種。更優(yōu)選地，所述分散劑為丙酮。優(yōu)選地，所述提取液與分散劑之間加入的體積比為:2:1-3。更優(yōu)選地，所述提取液與分散劑之間加入的體積比為1:1。優(yōu)選地，所述超聲萃取時間為9-11min。更優(yōu)選地，所述超聲萃取時間為10min。優(yōu)選地，所述離心條件為：離心時間為：4-6min；離心轉(zhuǎn)速：3000-5000rpm。更優(yōu)選地，所述離心條件為：離心時間為：5min；離心轉(zhuǎn)速：4000rpm。優(yōu)選地，所述下層沉積相通過微量進樣器提取，轉(zhuǎn)移至裝有內(nèi)插管的色譜進樣瓶，待測。步驟3)中分散液液萃取的具體過程見圖1。4)樣品定性檢測：分別將步驟1)配制的混合標準溶液和步驟3)中待測的下層沉積相進行g(shù)c-ms檢測，比較保留時間，通過譜圖數(shù)據(jù)庫檢索，進行定性，確定二甲苯麝香和芝麻酚成分；所述比較保留時間是指，通過標準溶液中各組分和內(nèi)標的保留時間，與實際樣品中各組分和內(nèi)標的保留時間，對比分析是否一致。所述譜圖數(shù)據(jù)庫檢索是指，將全掃描(scan)模式下的全掃描特征離子碎片譜圖與質(zhì)譜標準譜圖數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果進行比較，對比分析是否一致。優(yōu)選地，所述譜圖數(shù)據(jù)庫檢索條件為：質(zhì)量掃描范圍：35-300amu；譜圖數(shù)據(jù)庫：wiley標準譜庫；成分判斷依據(jù)選擇匹配度≥80。5)樣品定量檢測：分別將步驟1)配制的混合標準溶液和步驟3)中待測的下層沉積相進行g(shù)c-ms檢測，采用內(nèi)標標準曲線法進行定量，獲得下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的含量；優(yōu)選地，所述內(nèi)標標準曲線法包括以下步驟：b1)將步驟1)的a3)中一系列不同濃度的混合標準溶液分別進行g(shù)c-ms檢測，獲得目標物/內(nèi)標物的色譜峰面積比與相應(yīng)目標物/內(nèi)標物的濃度比的線性關(guān)系，繪制相應(yīng)的標準工作曲線，計算得到各標準工作曲線的回歸方程；所述目標物為二甲苯麝香和芝麻酚的標準品，所述內(nèi)標物為二甲苯麝香和芝麻酚的同位素。更優(yōu)選地，所述標準曲線中，以目標物/內(nèi)標物的色譜峰面積比為縱坐標(y軸)，其目標物/內(nèi)標物的濃度比為橫坐標(x軸)。b2)將步驟3)中待測的下層沉積相進行g(shù)c-ms檢測，將獲得的二甲苯麝香和芝麻酚與相應(yīng)內(nèi)標物的色譜峰面積比，代入步驟b1)中各標準工作曲線的回歸方程，并根據(jù)內(nèi)標物的已知濃度，計算得到下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度。更優(yōu)選地，所述目標物/內(nèi)標物的濃度為質(zhì)量濃度。進一步的，所述目標物/內(nèi)標物的濃度比為質(zhì)量濃度比。優(yōu)選地，所述步驟4)或5)中g(shù)c-ms檢測條件為：氣相色譜條件為：色譜柱：hp-innowax熔融石英毛細柱(30m×0.25mm,0.25μm)；進樣口溫度：250℃；進樣量：1μl；載氣：高純氦氣，載氣純度≥99.999％；載氣流速：1.0ml/min，恒流模式；分流比：10:1；升溫程序：初始溫度100℃保持1min，以3℃/min的速率升至240℃，保持5min，即質(zhì)譜條件為：傳輸線溫度：260℃；離子源溫度230℃；四級桿溫度150℃；溶劑延遲：10min；電離方式：電子轟擊源(ei源)；電離能量：70ev；掃描方式：全掃描(scan)或選擇離子監(jiān)測(sim)。6)實際樣品含量的測定：將步驟5)獲得的下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的含量分別代入公式，計算得到煙用添加劑樣品中二甲苯麝香和芝麻酚的含量。優(yōu)選地，所述公式為c0＝(csed×v0)/vsed，其中，c0為煙用添加劑樣品中二甲苯麝香或芝麻酚的含量，μg/l；csed為下層沉積相中二甲苯麝香或芝麻酚的含量，μg/l；v0為煙用添加劑樣品的體積，ml；vsed為下層沉積相的體積，ml。如上所述，本發(fā)明首次開發(fā)了一種煙用添加劑中二甲苯麝香和芝麻酚的測定方法，采用將分散液液萃取技術(shù)結(jié)合同位素內(nèi)標法，對煙用添加劑中的二甲苯麝香和芝麻酚進行萃取、富集，并采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法對其含量進行測定。該方法采用的分散液液萃取技術(shù)，集采樣、萃取和濃縮于一體，具有溶劑用量小，萃取效率高，富集倍數(shù)大的優(yōu)點。此外，由于采用了同位素內(nèi)標，可更好地補償液液萃取過程中的樣品損失并減少質(zhì)譜離子化過程中的基質(zhì)效應(yīng)，使得本方法相比較常規(guī)的分散液相微萃取(dllme)法的檢測結(jié)果更為準確、可靠，適用范圍更廣。該方法采用標準加入法定性、內(nèi)標標準曲線法定量，二甲苯麝香和芝麻酚的標準曲線的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r2分別為0.9986、0.9995，方法檢出限(lod)分別為0.39、0.67μg/l，定量檢出限(loq)分別為1.18、2.11μg/l，具有較高的靈敏度。方法的回收率為90.0％-100.4％之間，平均相對標準偏差(rsd％)在2.0％～7.2％之間，具有較好的準確性和精密度。本方法操作簡便、綠色環(huán)保、靈敏度高，能夠?qū)崿F(xiàn)了對煙用添加劑中痕量二甲苯麝香和芝麻酚的準確有效測定，可用于煙用添加劑的質(zhì)量控制。附圖說明圖1顯示為本發(fā)明的分散液液微萃取流程圖。圖2顯示為本發(fā)明的標準溶液選擇離子色譜圖。圖3顯示為本發(fā)明的不同萃取溶劑對萃取效率的影響示意圖。圖4顯示為本發(fā)明的不同分散劑對萃取效率的影響示意圖。圖5顯示為本發(fā)明的萃取劑體積對萃取效率的影響示意圖。圖6顯示為本發(fā)明的分散劑體積對萃取效率的影響示意圖。圖7顯示為本發(fā)明的實施例中3#樣品溶液選擇離子色譜圖。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例進一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護范圍。以下通過特定的具體實例說明本發(fā)明的實施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點與功效。本發(fā)明還可以通過另外不同的具體實施方式加以實施或應(yīng)用，本說明書中的各項細節(jié)也可以基于不同觀點與應(yīng)用，在沒有背離本發(fā)明的精神下進行各種修飾或改變。以下實施例中使用的試劑及儀器均為常規(guī)使用的試劑及儀器，均可從市場上購買獲得，具體如下：1、試劑煙用添加劑：浸膏、香精、料液(上海牡丹香精香料公司)；二甲苯麝香(純度為99.7％，甲醇為溶劑，上海安譜)；芝麻酚(純度為98％，百靈威科技)；氘代二甲苯麝香(100ng/μlinacetone，dr.ehrenstorfergmbh，germany)；氘代芝麻酚(>98.3％，cdn，canada)；去離子水(純水機自制)；無水乙醇、氯仿、二氯甲烷、甲醇、丙酮、乙腈(均為hplc級，純度>99.9％，從merckchemicals購入)；四氯化碳(分析純，>99.5％，上海經(jīng)緯化工)。2、儀器氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(7890b/5977c，agilenttechnologies，usa)；渦旋混合儀(talboysstdvortexmixer，henrytroemner，llc，usa)；超聲振蕩儀(sw30h，sonoswiss，switzerland)；離心機(rj-ldl-50g，無錫瑞江)；微量進樣器(100μl/250μl，agilenttechnologies，usa)。實施例11、標準溶液的配制分別稱取二甲苯麝香和芝麻酚的標準品，加入無水乙醇定容，配成混合標準儲備溶液?；旌蠘藴蕛淙芤褐卸妆谨晗愫椭ヂ榉拥臐舛染鶠?-100μg/ml。同時，分別移取一定體積的二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素，具體為氘代二甲苯麝香和氘代芝麻酚，加入無水乙醇定容，配成內(nèi)標溶液，內(nèi)標溶液中二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素的濃度為10-1000μg/ml。分別準確移取不同體積混合標準儲備溶液，置于多個100ml容量瓶中，再分別準確加入一定體積的內(nèi)標溶液，用無水乙醇定容，配制為一系列混合標準溶液。配制的系列混合標準溶液濃度為0-200ng/ml，其中內(nèi)標物濃度為10-1000ng/ml。2、樣品前處理稱取煙用添加劑樣品，加入有機溶劑和內(nèi)標溶液，渦旋0.9-1.1min混勻，進行超聲振蕩9-11min使樣品完全溶解后靜置9-11min，獲得提取液。其中，有機溶劑為無水乙醇，煙用添加劑樣品加入的質(zhì)量(g)與有機溶劑加入的體積(ml)之比為1:15-25，煙用添加劑樣品加入的質(zhì)量(g)與內(nèi)標溶液加入的體積(ml)之比為4-6:1。當煙用添加劑樣品為粘稠樣品時，需加入水以助分散，水為去離子水，煙用添加劑樣品加入的質(zhì)量(g)與水加入的體積(ml)之比為1:0-4。取一定體積的提取液，加入水、萃取劑和分散劑，充分混勻，進行超聲萃取9-11min從而形成微乳液，再在離心轉(zhuǎn)速為3000-5000rpm條件下進行離心4-6min后，通過微量進樣器提取下層沉積相，轉(zhuǎn)移至裝有內(nèi)插管的色譜進樣瓶，待測，具體過程見圖1。其中，提取液與水之間加入的體積比為1:5-7。萃取劑選自四氯化碳、氯仿和二氯甲烷中的一種，提取液與萃取劑之間加入的體積比為5:1-2。分散劑選自甲醇、丙酮和乙腈中的一種，提取液與分散劑之間加入的體積比為：2:1-3。3、樣品含量的測定分別將上述步驟1配制的標準溶液和步驟2中待測的下層沉積相進行g(shù)c-ms檢測，比較保留時間，通過譜圖數(shù)據(jù)庫檢索，進行定性，確定二甲苯麝香和芝麻酚成分。其中，質(zhì)量掃描范圍為30-350amu，譜圖數(shù)據(jù)庫為wiley標準譜庫；成分判斷依據(jù)選擇匹配度≥80。同時采用內(nèi)標標準曲線法進行定量，獲得下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度含量。再通過下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度含量，計算得到煙用添加劑樣品中二甲苯麝香和芝麻酚的含量。具體來說，內(nèi)標標準曲線法是先將上述步驟1中一系列不同濃度的標準溶液分別進行g(shù)c-ms檢測，獲得二甲苯麝香和芝麻酚成分/內(nèi)標物的色譜峰面積比與相應(yīng)二甲苯麝香和芝麻酚成分/內(nèi)標物的濃度比的線性關(guān)系，繪制相應(yīng)的標準工作曲線，以二甲苯麝香和芝麻酚成分與內(nèi)標物的色譜峰面積比為縱坐標(y軸)，其相應(yīng)二甲苯麝香和芝麻酚成分與內(nèi)標物的濃度比為橫坐標(x軸)，計算得到各標準工作曲線的回歸方程。再將上述步驟2中待測的下層沉積相進行g(shù)c-ms檢測，將獲得的二甲苯麝香和芝麻酚成分與內(nèi)標物的峰面積比，代入各標準工作曲線的回歸方程，并根據(jù)內(nèi)標物的已知濃度，計算得到待測的下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度。最后將獲得的下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度分別代入公式c0＝(csed×v0)/vsed，其中，c0為煙用添加劑樣品中二甲苯麝香或芝麻酚的含量，μg/l；csed為下層沉積相中二甲苯麝香或芝麻酚的含量，μg/l；v0為煙用添加劑樣品的體積，ml；vsed為下層沉積相的體積，ml；從而計算得到煙用添加劑樣品中二甲苯麝香和芝麻酚的含量。這里所述二甲苯麝香、芝麻酚和內(nèi)標物的濃度為質(zhì)量濃度。其中，gc-ms檢測條件為：氣相色譜條件為：色譜柱：hp-innowax熔融石英毛細柱(30m×0.25mm,0.25μm)；進樣口溫度：250℃；進樣量：1μl；載氣：高純氦氣，載氣純度≥99.999％；載氣流速：1.0ml/min，恒流模式；分流比：10:1；升溫程序：初始溫度100℃保持1min，以3℃/min的速率升至240℃，保持5min，即質(zhì)譜條件為：傳輸線溫度：260℃；離子源溫度230℃；四級桿溫度150℃；溶劑延遲：10min；電離方式：電子轟擊源(ei源)；電離能量：70ev；掃描方式：全掃描(scan)或選擇離子監(jiān)測(sim)。實施例21、標準溶液的配制分別稱取二甲苯麝香和芝麻酚的標準品，加入無水乙醇定容，配成混合標準儲備溶液?；旌蠘藴蕛淙芤褐卸妆谨晗愫椭ヂ榉拥臐舛葹?0μg/ml。同時，分別移取一定體積的二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素，具體為氘代二甲苯麝香和氘代芝麻酚，加入無水乙醇定容，配成內(nèi)標溶液，內(nèi)標溶液中二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素的濃度為100μg/ml。分別準確移取不同體積混合標準儲備溶液，置于5個100ml容量瓶中，再分別準確加入一定體積的內(nèi)標溶液，用無水乙醇定容，配制為一系列混合標準溶液。配制的系列混合標準溶液濃度分別為2ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml，其中內(nèi)標物濃度為100ng/ml。2、樣品前處理稱取0.5g煙用添加劑樣品，加入10ml無水乙醇和0.1ml內(nèi)標溶液，渦旋1min混勻，進行超聲振蕩10min使樣品完全溶解后靜置10min，獲得提取液。當煙用添加劑樣品為粘稠樣品時，需加入1ml去離子水以助分散。取0.5ml的提取液20ml于尖底玻璃離心試管，加入3ml去離子水、100μl二氯甲烷和0.5ml丙酮，充分混勻，進行超聲萃取10min從而形成微乳液，再在離心轉(zhuǎn)速為4000rpm條件下進行離心5min后，含待測化合物的沉積相沉淀在試管底部，通過微量進樣器提取下層沉積相，記錄其體積，轉(zhuǎn)移至裝有內(nèi)插管的色譜進樣瓶，待測，具體過程見圖1。3、樣品含量的測定分別將上述步驟1配制的標準溶液和步驟2中待測的下層沉積相進行g(shù)c-ms檢測，比較保留時間，通過譜圖數(shù)據(jù)庫檢索，進行定性，確定二甲苯麝香和芝麻酚成分。其中，質(zhì)量掃描范圍為30-350amu，譜圖數(shù)據(jù)庫為wiley標準譜庫；成分判斷依據(jù)選擇匹配度≥80。同時采用內(nèi)標標準曲線法進行定量，獲得下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度含量。再通過下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度含量，計算得到煙用添加劑樣品中二甲苯麝香和芝麻酚的含量。具體來說，內(nèi)標標準曲線法是先將上述步驟1中一系列不同濃度的標準溶液分別進行g(shù)c-ms檢測，獲得二甲苯麝香和芝麻酚成分/內(nèi)標物的色譜峰面積比與相應(yīng)二甲苯麝香和芝麻酚成分/內(nèi)標物的濃度比的線性關(guān)系，繪制相應(yīng)的標準工作曲線，以二甲苯麝香和芝麻酚成分與內(nèi)標物的色譜峰面積比為縱坐標(y軸)，其相應(yīng)二甲苯麝香和芝麻酚成分與內(nèi)標物的濃度比為橫坐標(x軸)，計算得到各標準工作曲線的回歸方程。再將上述步驟2中待測的下層沉積相進行g(shù)c-ms檢測，將獲得的二甲苯麝香和芝麻酚成分與內(nèi)標物的峰面積比，代入各標準工作曲線的回歸方程，并根據(jù)內(nèi)標物的已知濃度，計算得到待測的下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度。最后將獲得的下層沉積相中二甲苯麝香和芝麻酚的濃度分別代入公式c0＝(csed×v0)/vsed，其中，c0為煙用添加劑樣品中二甲苯麝香或芝麻酚的含量，μg/l；csed為下層沉積相中二甲苯麝香或芝麻酚的含量，μg/l；v0為煙用添加劑樣品的體積，ml；vsed為下層沉積相的體積，ml；從而計算得到煙用添加劑樣品中二甲苯麝香和芝麻酚的含量。這里所述二甲苯麝香、芝麻酚和內(nèi)標物的濃度為質(zhì)量濃度。二甲苯麝香、芝麻酚和2種相應(yīng)同位素內(nèi)標物的保留時間和特征離子見表1，圖2。表1二甲苯麝香、芝麻酚及其同位素內(nèi)標物的保留時間和定性定量離子序號化合物名稱保留時間(min)定量離子(m/z)定性離子(m/z)1二甲苯麝香34.882822972氘代二甲苯麝香34.082943123芝麻酚37.97138524氘代芝麻酚37.9714054其中，gc-ms檢測條件為：氣相色譜條件為：色譜柱：hp-innowax熔融石英毛細柱(30m×0.25mm,0.25μm)；進樣口溫度：250℃；進樣量：1μl；載氣：高純氦氣，載氣純度≥99.999％；載氣流速：1.0ml/min，恒流模式；分流比：10:1；升溫程序：初始溫度100℃保持1min，以3℃/min的速率升至240℃，保持5min，即質(zhì)譜條件為：傳輸線溫度：260℃；離子源溫度230℃；四級桿溫度150℃；溶劑延遲：10min；電離方式：電子轟擊源(ei源)；電離能量：70ev；掃描方式：全掃描(scan)或選擇離子監(jiān)測(sim)。實施例3根據(jù)實施例2中測定煙用添加劑樣品中二甲苯麝香和芝麻酚的含量的方法步驟，分別選用二氯甲烷、氯仿和四氯化碳三種溶劑作為萃取劑進行樣品前處理，測定結(jié)果見圖3。由圖3可知，二氯甲烷、氯仿和四氯化碳均可作為萃取劑進行樣品前處理，但其中二氯甲烷的萃取效果最佳。實施例4根據(jù)實施例2中測定煙用添加劑樣品中二甲苯麝香和芝麻酚的含量的方法步驟，分別選用甲醇、丙酮和乙腈三種溶劑作為分散劑進行樣品前處理，測定結(jié)果見圖4。由圖4可知，甲醇、丙酮和乙腈均可作為分散劑進行樣品前處理，但其中丙酮的分散效果最佳。實施例5根據(jù)實施例2中測定煙用添加劑樣品中二甲苯麝香和芝麻酚的含量的方法步驟，分別選用50、100、150、200μl的二氯甲烷作為萃取劑進行樣品前處理，測定結(jié)果見圖5。由圖5可知，當選用100μl的二氯甲烷作為萃取劑進行樣品前處理時，萃取效果最佳。實施例6根據(jù)實施例2中測定煙用添加劑樣品中二甲苯麝香和芝麻酚的含量的方法步驟，分別選用0、0.25、0.5、0.75、1ml的丙酮作為分散劑進行樣品前處理，測定結(jié)果見圖6。由圖6可知，當選用0.5ml的丙酮作為分散劑進行樣品前處理時，分散效果最佳。實施例7分別稱取二甲苯麝香和芝麻酚的標準品，加入無水乙醇定容，配成混合標準儲備溶液?；旌蠘藴蕛淙芤褐卸妆谨晗愫椭ヂ榉拥臐舛葹?0μg/ml同時，分別移取一定體積的二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素，具體為氘代二甲苯麝香和氘代芝麻酚，加入無水乙醇定容，配成內(nèi)標溶液，內(nèi)標溶液中二甲苯麝香的同位素和芝麻酚的同位素的濃度為100μg/ml。分別準確移取不同體積混合標準儲備溶液，置于多個100ml容量瓶中，再分別準確加入一定體積的內(nèi)標溶液，用無水乙醇定容，配制為一系列混合標準溶液。配制的系列混合標準溶液濃度分別為2ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml，其中內(nèi)標物濃度為100ng/ml。將上述系列混合標準溶液按本文圖1所述步驟進行dllme(分散液液萃取)處理，然后gc/ms上機分析，采用內(nèi)標法定量，以二甲苯麝香和芝麻酚成分與內(nèi)標物的色譜峰面積比為縱坐標(y軸)，其相應(yīng)二甲苯麝香和芝麻酚成分與內(nèi)標物的濃度比為橫坐標(x軸)，進行回歸分析，得到二甲苯麝香和芝麻酚的回歸方程及其相關(guān)系數(shù)，如表2所示。表2待測化物線性回歸方程、回歸系數(shù)、檢測限以及富集倍數(shù)注：y為峰面積比；x為濃度比由表2可知，二甲苯麝香和芝麻酚標準曲線的線性關(guān)系良好，二甲苯麝香的相關(guān)系數(shù)r2＝0.9986，芝麻酚的相關(guān)系數(shù)r2＝0.9995。將最低濃度的標準溶液直接進行g(shù)c/ms分析，以3倍信噪比(s/n＝3)為方法的檢出限(mdl或lod)，10倍信噪比(s/n＝10)為定量限(mql或loq)，則二甲苯麝香的lod和loq分別為0.39和1.18μg/l，而芝麻酚的lod和loq分別為0.67和2.11μg/l，具有較高的靈敏度。同時，根據(jù)以下公式ⅰ、ⅱ計算富集倍數(shù)(ef)和萃取回收率(er)，其中，公式ⅰ為：公式ⅱ為：式中，c0為煙用添加劑樣品中二甲苯麝香或芝麻酚的含量，μg/l；csed為下層沉積相中二甲苯麝香或芝麻酚的含量，μg/l；v0為煙用添加劑樣品的體積，ml；vsed為下層沉積相的體積，ml；結(jié)果詳見表2。由公式ⅰ、ⅱ和表2可知，二甲苯麝香和芝麻酚的富集倍數(shù)(富集因子)分別為265和298，富集倍數(shù)非常大，由于富集倍數(shù)(富集因子)與方法靈敏度呈正比，該處理方法靈敏度高。同時，由于萃取回收率是評價分析方法的可行性與否的指標，一般在80-120％之間，而二甲苯麝香和芝麻酚的萃取回收率分別為106.2％和119.1％，落在范圍內(nèi)，該分析方法的可行性高。實施例8選取1#(浸膏，粘稠狀)，2#(香精)和3#(料液)三種代表性煙用添加劑樣品，分別稱取0.5g于離心管中，其中1#和3#樣品加1ml水，再加入10ml無水乙醇和0.1ml內(nèi)標溶液，渦旋1min混勻，進行超聲振蕩10min使樣品完全溶解后靜置10min，獲得提取液。取0.5ml的提取液于20ml尖底玻璃離心試管，加入3ml去離子水，將100μl二氯甲烷和0.5ml丙酮使用微量進樣器快速注入，充分混勻，進行超聲萃取10min從而形成微乳液，再在離心轉(zhuǎn)速為4000rpm條件下進行離心5min后，含待測化合物的沉積相沉淀在試管底部，通過微量進樣器提取下層沉積相，記錄其體積，轉(zhuǎn)移至裝有內(nèi)插管的色譜進樣瓶，待測，具體過程見圖1。實施例9將實施例8中制備的1#和2#樣品分別進行三個水平的加標回收率實驗，進行了精密度測定，每個添加水平平行測定5次，回收率和相對標準偏差(rsd％)見表3。由表3可知，二甲苯麝香和芝麻酚的回收率在90.0％～100.4％之間，rsd％在2.0％～7.2％之間，準確性和重復(fù)性較好，可以滿足定量需要。表3實際樣品中待測化合物加標回收率和相對標準偏差實施例10為了進一步驗證本方法的準確性，分別選用本實施例8中1#、2#、3#樣品，采用本發(fā)明中方法與專利cn102998382a中測定方法對其進行了測試，將兩種方法所得測定結(jié)果進行對比，詳見表4。其中，本發(fā)明中方法測定3#樣品的色譜圖見圖7。由表4可知，專利方法未能檢出的1#、2#、3#樣品中的二甲苯麝香和3#樣品中的芝麻酚，而本發(fā)明中的方法均能夠檢測到。2#樣品中的芝麻酚，用兩種方法均未能測出，并且1#樣品中的芝麻酚，用兩種方法均能測出，且檢測結(jié)果非常接近，證明本方法的準確性能夠滿足要求，同時富集效果明顯。表4兩種方法測定結(jié)果比較備注*：“—”表示未檢出所以，本發(fā)明有效克服了現(xiàn)有技術(shù)中的種種缺點而具高度產(chǎn)業(yè)利用價值。上述實施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾或改變。因此，舉凡所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
中具有通常知識者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。當前第1頁12