本發(fā)明涉及實驗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用雙波長分光光度法測定芡實的直鏈淀粉含量的方法。

技術(shù)背景

芡實,又名雞頭米,為睡蓮科芡屬一年生水生草本植物,有南北芡之分。南芡,主產(chǎn)于蘇州太湖水網(wǎng)地區(qū),是蘇州傳統(tǒng)的地方優(yōu)良水生作物,栽培歷史悠久。芡實以種子的種仁供食用,是傳統(tǒng)的營養(yǎng)保健型食品.蘇州雞頭米刺很少，香氣濃郁、吃口軟糯。芡實種子內(nèi)的種仁可供食用，其含有豐富的淀粉、脂肪、鈣、磷等營養(yǎng)成分。淀粉不是單純的分子，而是一種混合物，由二種不同類型的淀粉組成，一種是直鏈淀粉，一種是直鏈淀粉，兩者在結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及化學(xué)反應(yīng)活性上有較在差異。淀粉是芡實中含量最高的組分，其直鏈淀粉和直鏈淀粉含量比例對芡實品質(zhì)、吃口軟糯具有決定性影響。

近年來科研工作者著重研究了芡實的育種和栽培技術(shù)，芡實的化學(xué)成分，蛋白質(zhì)的氨基酸組成，以及芡實的藥學(xué)價值和食用方法。對芡實中直鏈淀粉和支鏈淀粉的研究較少。本發(fā)明對芡實中直鏈淀粉測定方法進行了研究試驗，根據(jù)直鏈淀粉遇碘形成純藍色復(fù)合物基團，直鏈淀粉遇碘形成紫紅色復(fù)合物基團的顯色特征，運用雙波長分光光度法進行測定直鏈淀粉的含量。

發(fā)明具體內(nèi)容：

本發(fā)明的一個目的提供一種芡實的直鏈淀粉含量的測定方法，所述測定方法可操作性強，測定結(jié)果準(zhǔn)確。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明具體的技術(shù)方案為：

一種芡實的直鏈淀粉含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液的圖譜繪制：取5ml直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液于100ml燒杯中，加入50ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml，用1cm的比色皿在400nm-800nm波長下掃描，繪制圖譜；

(2)直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液0，1，2，3，5，6ml于100ml比色管中，加入50ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml，用1cm的比色皿在535nm和570nm波長下測定吸光度，以ΔA＝A₅₇₀-A₅₃₅為縱坐標(biāo)，直鏈淀粉含量為橫坐標(biāo)，繪制直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(3)取勻質(zhì)的樣品100mg左右于100ml燒杯中，加入10ml氫氧化鉀溶液，用封口膜封口，置于沸水浴加熱，不時地振搖，30min后取出，冷卻，用蒸餾水定容至100ml，過濾，取濾液待用，分別取兩份15ml濾液于100ml的比色管中，一份加入40ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml，混勻，靜置15min，待測；另一份加入40ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，加蒸餾水定容至100ml，混勻，靜置15min，待測，以零管為參比，用1cm比色皿測定檢測波長下的吸光度值，即可得直鏈淀粉的含量。

進一步的，步驟(2)中所述直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液為0.5mg/ml。

進一步的，所述步驟2所繪制的直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線為ΔA＝0.0234x+0.001，x為直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液中直鏈淀粉的含量。

進一步的，直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液中直鏈淀粉的含量x＝0～3mg。

有益效果：

通過本發(fā)明提供的一種芡實的直鏈淀粉含量的測定方法，運用雙波長分光光度法進行測定直鏈淀粉的含量，測定方法可操作性強，測定結(jié)果準(zhǔn)確，精密度試驗相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.62％，回收率在92.00％～103.00％之間。

附圖說明：

下面結(jié)合示意圖及實施例對本發(fā)明進一步說明。

圖1為直鏈淀粉的掃描圖譜；

圖2為直鏈淀粉的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；

具體實施方式：

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實施例

如圖1所示：一種芡實的直鏈淀粉含量的測定方法，包括以下步驟：

1實驗方法

1.1直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液的圖譜繪制

取5ml的直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液于100ml燒杯中，加入50ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml。用1cm的比色皿在400nm-800nm波長下掃描，繪制圖譜。

1.2.直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別取直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液(0.5mg/ml)0，1，2，3，5，6ml于100ml比色管中，加入50ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml。用1cm的比色皿在535nm和570nm波長下測定吸光度，以ΔA＝A₅₇₀-A₅₃₅為縱坐標(biāo)，直鏈淀粉含量為橫坐標(biāo)，繪制直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2樣品中直鏈淀粉測定

取勻質(zhì)的樣品100mg左右于100ml燒杯中，加入10ml氫氧化鉀溶液，用封口膜封口，置于沸水浴加熱，不時地振搖，30min后取出，冷卻，用蒸餾水定容至100ml。過濾，取濾液待用。分別取兩份15ml濾液于100ml的比色管中，一份加入40ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml，混勻，靜置15min，待測。另一份加入40ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，加蒸餾水定容至100ml，混勻，靜置15min，待測。以零管為參比，用1cm比色皿測定檢測波長下的吸光度值。

2結(jié)果與討論

2.1測定波長的確定

直鏈淀粉與碘作用產(chǎn)生純藍色基團，支鏈淀粉與碘作用生成紫紅色基因。根據(jù)雙波長比色原理，若試樣溶液在兩個波長處均有吸收，則兩個波長處的吸光度差值與溶液中待測物質(zhì)的濃度成正比。取直鏈淀粉和支鏈淀粉掃描液在400nm-800nm波長下掃描，然后在同一坐標(biāo)中繪制，見圖1。根據(jù)上述原理和掃描的圖譜，確定直鏈淀粉的測定雙波長為535nm和570nm。

2.2直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以零管為參比，采用雙波長法測定535nm和570nm下的吸光度。測定數(shù)據(jù)如表1。以直鏈淀粉含量為橫坐標(biāo)，以ΔA＝A₅₇₀-A₅₃₅為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2。根據(jù)線性回歸，所得曲線為ΔA＝0.0234x+0.001，相關(guān)系數(shù)R²＝0.9997，結(jié)果表明本實驗具有良好的線性。

表1直鏈淀粉含量與吸光度測定數(shù)據(jù)

2.3精密度實驗

分別取直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液(0.5mg/ml)5ml，加入50ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml。用1cm的比色皿連續(xù)測定10次，結(jié)果表明，直鏈淀粉含量相對標(biāo)準(zhǔn)偏差1.62％。測定數(shù)據(jù)結(jié)果見表2。

表2直鏈淀粉精密度測定數(shù)據(jù)結(jié)果

2.4回收率實驗

在已經(jīng)芡實樣品中分別加入不同量的直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本實驗方法來測定樣品加標(biāo)回收率，測試結(jié)果見表3。

表3樣品中直鏈淀粉加標(biāo)回收率實驗結(jié)果

結(jié)果表明，直鏈淀粉加標(biāo)回收率在92.00％～103.00％，該方法具有較好的準(zhǔn)確性。

2.5結(jié)論

本實驗采用雙波長分光光度法測定芡實中直鏈淀粉含量，供試液中直鏈淀粉在0～3mg之間線性關(guān)系良好，精密度試驗相對標(biāo)準(zhǔn)偏差1.62％，回收率在92.00％～103.00％之間。結(jié)果表明本實驗方法可操作性強，測定結(jié)果準(zhǔn)確。

以上所述僅為發(fā)明的較佳實施例，并不限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。企圖據(jù)以對本發(fā)明作任何形式上之限制，是以，凡有在相同之發(fā)明精神下所作有關(guān)本發(fā)明之任何修飾或變更，皆仍應(yīng)包括在本發(fā)明意圖保護之范疇。