本發(fā)明涉及食品檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是一種過(guò)氧化苯甲?？焖贆z測(cè)方法及其應(yīng)用該方法的試劑盒。
背景技術(shù)：
：過(guò)氧化苯甲酰具有強(qiáng)氧化性，易還原為苯甲酸，可漂白小麥粉，且有殺菌性能，但對(duì)小麥粉中β-胡蘿卜素、維生素A、維生素E和維生素B1等均有較強(qiáng)的破壞作用。過(guò)多的苯甲酸會(huì)加重肝臟負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重時(shí)使腎、肝出現(xiàn)病理變化，壽命和生長(zhǎng)都將受到影響；面粉中殘留的未分解的過(guò)氧化苯甲酰，在面食加熱制作過(guò)程中能產(chǎn)生苯自由基，進(jìn)而會(huì)形成苯、苯酚、聯(lián)苯，這些產(chǎn)物都有毒性，對(duì)健康有不良的影響；自由基氧化會(huì)加速人體衰老，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化，甚至誘發(fā)多種疾病。我國(guó)在1997年修訂的《食品添加劑食用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定過(guò)氧化苯甲酰的最大使用量為60mg/kg，衛(wèi)生部于2011年起要求全面禁止在面粉中添加過(guò)氧化苯甲酰。目前用于檢測(cè)過(guò)氧化苯甲酰的技術(shù)有色譜法和分光光度法。色譜法有氣相色譜法、高效液相色譜法等，而分光光度法包括碘量法、鐵粉還原法等。這些方法的樣品前處理過(guò)于繁瑣耗時(shí)，且對(duì)體系的其它氧化劑成分抗干擾能力弱，在現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)中局限性較大。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明為解決上述問(wèn)題，提供了一種過(guò)氧化苯甲?？焖贆z測(cè)方法及試劑盒，操作簡(jiǎn)便快捷，反應(yīng)條件溫和，靈敏度高，特異性好，抗干擾能力強(qiáng)，無(wú)需儀器可實(shí)現(xiàn)半定量分析，適用于現(xiàn)場(chǎng)分析和篩查工作。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種過(guò)氧化苯甲?？焖贆z測(cè)方法，其包括以下步驟：10)向待測(cè)樣品中加入甲醇，充分?jǐn)嚢韬?，離心提取上清液；20)向所述上清液中加入鄰苯二胺，混勻反應(yīng)一定時(shí)間后，得到第一反應(yīng)液；30)將所述第一反應(yīng)液顏色與第一標(biāo)準(zhǔn)色卡進(jìn)行定性定量的比對(duì)分析；40)向所述第一反應(yīng)液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二反應(yīng)液；50)將所述第二反應(yīng)液與第二標(biāo)準(zhǔn)色卡進(jìn)行定性定量的二次判斷。優(yōu)選的，所述第一標(biāo)準(zhǔn)色卡的制作，是通過(guò)配制一系列不同濃度的過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液，并向所述過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入甲醇，充分?jǐn)嚢韬?，離心提取上清液，向所述上清液中加入鄰苯二胺，混勻反應(yīng)一定時(shí)間后，得到第一標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液，并根據(jù)該第一標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的顏色制成第一標(biāo)準(zhǔn)色卡。優(yōu)選的，所述第二標(biāo)準(zhǔn)色卡的制作，是通過(guò)向所述第一標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液，并根據(jù)該第二標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的顏色制成所述第二標(biāo)準(zhǔn)色卡。優(yōu)選的，所述鄰苯二胺為0.5～8g/100mL的溶液，溶劑為甲醇。進(jìn)一步的，所述鄰苯二胺的濃度為5g/100mL。優(yōu)選的，所述酸性溶液為鹽酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，濃度為1％～50％。進(jìn)一步的，所述酸性溶液為50％鹽酸水溶液。另外，本發(fā)明還提供一種過(guò)氧化苯甲?？焖贆z測(cè)試劑盒，所述試劑盒由甲醇溶液、鄰苯二胺溶液、酸性溶液、第一標(biāo)準(zhǔn)比色卡和第二標(biāo)準(zhǔn)比色卡組成；所述鄰苯二胺為0.5～8g/100mL的溶液，溶劑為甲醇；所述酸性溶液為鹽酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，濃度為1％～50％；所述的第一標(biāo)準(zhǔn)比色卡是根據(jù)不同濃度的過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行檢測(cè)得到的第一標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的顏色制成，每一個(gè)色塊代表相應(yīng)的過(guò)氧化苯甲酰濃度；所述的第二標(biāo)準(zhǔn)比色卡是根據(jù)不同濃度的過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行檢測(cè)得到的第二標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的顏色制成，每一個(gè)色塊代表相應(yīng)的過(guò)氧化苯甲酰濃度。優(yōu)選的，所述鄰苯二胺的濃度為5g/100mL。優(yōu)選的，所述酸性溶液為50％鹽酸水溶液。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的一種過(guò)氧化苯甲酰快速檢測(cè)方法及試劑盒，其通過(guò)向待測(cè)樣品中加入甲醇，充分?jǐn)嚢韬?，離心提取上清液；向所述上清液中加入鄰苯二胺，混勻反應(yīng)一定時(shí)間后，得到第一反應(yīng)液；將所述第一反應(yīng)液顏色與第一標(biāo)準(zhǔn)色卡進(jìn)行定性定量的比對(duì)分析；向所述第一反應(yīng)液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二反應(yīng)液；將所述第二反應(yīng)液與第二標(biāo)準(zhǔn)色卡進(jìn)行定性定量的二次判斷；待測(cè)樣品中的過(guò)氧化苯甲酰與鄰苯二胺反應(yīng)生成青色反應(yīng)液，加入酸性溶液后青色反應(yīng)液轉(zhuǎn)化為紅棕色反應(yīng)液，兩步顏色的轉(zhuǎn)變可進(jìn)行雙重定性定量分析，特異性好，抗干擾能力強(qiáng)。附圖說(shuō)明此處所說(shuō)明的附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本發(fā)明的一部分，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：圖1為本發(fā)明一種過(guò)氧化苯甲?？焖贆z測(cè)方法的檢測(cè)步驟流程圖；圖2為本發(fā)明一種過(guò)氧化苯甲?？焖贆z測(cè)方法的第一標(biāo)準(zhǔn)色卡的示意圖；圖3為本發(fā)明一種過(guò)氧化苯甲?？焖贆z測(cè)方法的第二標(biāo)準(zhǔn)色卡的示意圖；圖4為本發(fā)明以面粉作為待測(cè)樣品的測(cè)試過(guò)程示意圖。具體實(shí)施方式為了使本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚、明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。如圖1所示，本發(fā)明的一種過(guò)氧化苯甲?？焖贆z測(cè)方法，其包括以下步驟：10)向待測(cè)樣品中加入甲醇，充分?jǐn)嚢韬螅x心提取上清液；20)向所述上清液中加入鄰苯二胺，混勻反應(yīng)一定時(shí)間后，得到第一反應(yīng)液；30)將所述第一反應(yīng)液顏色與第一標(biāo)準(zhǔn)色卡進(jìn)行定性定量的比對(duì)分析；40)向所述第一反應(yīng)液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二反應(yīng)液；50)將所述第二反應(yīng)液與第二標(biāo)準(zhǔn)色卡進(jìn)行定性定量的二次判斷。所述第一標(biāo)準(zhǔn)色卡的制作，是通過(guò)配制一系列不同濃度的過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液，并向所述過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入甲醇，充分?jǐn)嚢韬螅x心提取上清液，向所述上清液中加入鄰苯二胺，混勻反應(yīng)一定時(shí)間后，得到第一標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液，并根據(jù)該第一標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的顏色制成第一標(biāo)準(zhǔn)色卡。所述第二標(biāo)準(zhǔn)色卡的制作，是通過(guò)向所述第一標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液，并根據(jù)該第二標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的顏色制成所述第二標(biāo)準(zhǔn)色卡。本實(shí)施例中，所述鄰苯二胺為0.5～8g/100mL的溶液，溶劑為甲醇。優(yōu)選的，所述鄰苯二胺的濃度為5g/100mL。本實(shí)施例中，所述酸性溶液為鹽酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，濃度為1％～50％。優(yōu)選的，所述酸性溶液為50％鹽酸水溶液。其中，所述待測(cè)樣品的上清液與所述鄰苯二胺的混和反應(yīng)時(shí)間，與所述過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液的上清液與所述鄰苯二胺的混合反應(yīng)時(shí)間，二者是相對(duì)應(yīng)，本實(shí)施例中，所述反應(yīng)時(shí)間均為3min。另外，本發(fā)明還提供一種過(guò)氧化苯甲酰快速檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒由甲醇溶液、鄰苯二胺溶液、酸性溶液、第一標(biāo)準(zhǔn)比色卡和第二標(biāo)準(zhǔn)比色卡組成；所述鄰苯二胺為0.5～8g/100mL的溶液，溶劑為甲醇；所述酸性溶液為鹽酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，濃度為1％～50％；所述的第一標(biāo)準(zhǔn)比色卡是根據(jù)不同濃度的過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行檢測(cè)得到的第一標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的顏色制成，每一個(gè)色塊代表相應(yīng)的過(guò)氧化苯甲酰濃度；所述的第二標(biāo)準(zhǔn)比色卡是根據(jù)不同濃度的過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行檢測(cè)得到的第二標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的顏色制成，每一個(gè)色塊代表相應(yīng)的過(guò)氧化苯甲酰濃度。本實(shí)施例中，所述鄰苯二胺的濃度為5g/100mL，所述酸性溶液為50％鹽酸水溶液。本發(fā)明的工作原理，主要是依據(jù)甲醇溶液中過(guò)氧化苯甲酰與鄰苯二胺可快速反應(yīng)形成青色化合物，再滴加酸性溶液后青色化合物轉(zhuǎn)變?yōu)榧t棕色化合物，從而進(jìn)行二次判斷。采用本發(fā)明的方法，操作簡(jiǎn)便快捷，反應(yīng)條件溫和，靈敏度高，特異性好，抗干擾能力強(qiáng)，無(wú)需儀器可實(shí)現(xiàn)半定量分析，適用于現(xiàn)場(chǎng)分析和篩查工作。本實(shí)施例的標(biāo)準(zhǔn)色卡的制作過(guò)程簡(jiǎn)述如下：配制一系列不同濃度的過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品溶液，加入鄰苯二胺，混勻后靜置反應(yīng)3分鐘，制作第一標(biāo)準(zhǔn)色卡(如圖2所示)，再滴加酸性溶液后，青色化合物轉(zhuǎn)變?yōu)榧t棕色化合物，制作第二標(biāo)準(zhǔn)色卡(如圖3所示)。所述一系列不同濃度的過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品的溶液中，所述過(guò)氧化苯甲酰的濃度依次為0、10、30、60、90mg/L；所述一系列不同濃度的過(guò)氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)品的溶液的體積均為2mL；所述過(guò)氧化苯甲酰檢測(cè)試劑盒中鄰苯二胺的體積為0.2mL；所述過(guò)氧化苯甲酰檢測(cè)試劑盒中酸性溶液的體積為0.1mL。同時(shí)，考察所述過(guò)氧化苯甲酰快速檢測(cè)方法的特異性及抗干擾性，如下表所示：成分現(xiàn)象結(jié)論過(guò)氧化氫(H2O2)(1000ppm)無(wú)色無(wú)干擾溴酸鉀(KBrO3)(1000ppm)無(wú)色無(wú)干擾苯甲酸(BA)(100ppm)無(wú)色無(wú)干擾苯甲酸(BA)(100ppm)+過(guò)氧化氫(1000ppm)無(wú)色無(wú)干擾苯甲酸(BA)(100ppm)+溴酸鉀(1000ppm)無(wú)色無(wú)干擾過(guò)氧化苯甲酰(BP)(100ppm)青色無(wú)干擾過(guò)氧化苯甲酰(BP)(100ppm)+過(guò)氧化氫(1000ppm)青色無(wú)干擾過(guò)氧化苯甲酰(BP)(100ppm)+溴酸鉀(1000ppm)青色無(wú)干擾本發(fā)明提供的過(guò)氧化苯甲酰檢測(cè)試劑盒，具有以下特點(diǎn)：a)待測(cè)過(guò)氧化苯甲酰與鄰苯二胺反應(yīng)生成青色化合物，加入酸性溶液后青色化合物轉(zhuǎn)化為紅棕色化合物，兩步顏色的轉(zhuǎn)變可進(jìn)行雙重定性定量分析，特異性好，抗干擾能力強(qiáng)。b)反應(yīng)條件溫和，常溫20～30℃均可。c)檢測(cè)速度快，3分鐘內(nèi)即可完成顯色。d)靈敏度高，過(guò)氧化苯甲酰在≥10ppm時(shí)，即可肉眼觀察到顏色，無(wú)需儀器就可進(jìn)行半定量分析。以面粉作為待測(cè)樣品為例(如圖4所示)，檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)述如下：稱取1.0g面粉于10mL的離心管中，加入5mL的甲醇溶液震蕩2min后離心，取上清液備用。向所述上清液中加入鄰苯二胺，混勻反應(yīng)3min后，得到青色的第一反應(yīng)液；將所述第一反應(yīng)液顏色與第一標(biāo)準(zhǔn)色卡進(jìn)行定性定量的比對(duì)分析；然后向所述第一反應(yīng)液中滴加一定量的酸性溶液，青色的第一反應(yīng)液轉(zhuǎn)變?yōu)榧t棕色的第二反應(yīng)液；將所述第二反應(yīng)液與第二標(biāo)準(zhǔn)色卡進(jìn)行定性定量的二次判斷。需要說(shuō)明的是，本說(shuō)明書中的各個(gè)實(shí)施例均采用遞進(jìn)的方式描述，每個(gè)實(shí)施例重點(diǎn)說(shuō)明的都是與其他實(shí)施例的不同之處，各個(gè)實(shí)施例之間相同相似的部分互相參見(jiàn)即可。對(duì)于試劑盒實(shí)施例而言，由于其與方法實(shí)施例基本相似，所以描述的比較簡(jiǎn)單，相關(guān)之處參見(jiàn)方法實(shí)施例的部分說(shuō)明即可。并且，在本文中，術(shù)語(yǔ)“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的過(guò)程、方法、物品或者設(shè)備不僅包括那些要素，而且還包括沒(méi)有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種過(guò)程、方法、物品或者設(shè)備所固有的要素。在沒(méi)有更多限制的情況下，由語(yǔ)句“包括一個(gè)……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的過(guò)程、方法、物品或者設(shè)備中還存在另外的相同要素。另外，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解實(shí)現(xiàn)上述實(shí)施例的全部或部分步驟可以通過(guò)硬件來(lái)完成，也可以通過(guò)程序來(lái)指令相關(guān)的硬件完成，所述的程序可以存儲(chǔ)于一種計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)中，上述提到的存儲(chǔ)介質(zhì)可以是只讀存儲(chǔ)器，磁盤或光盤等。上述說(shuō)明示出并描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對(duì)其他實(shí)施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文發(fā)明構(gòu)想范圍內(nèi)，通過(guò)上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)進(jìn)行改動(dòng)。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動(dòng)和變化不脫離本發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3