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一種檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的制備方法與流程

文檔序號(hào):12061375閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

步驟1、絲網(wǎng)印刷碳電極SPCE的預(yù)處理;

步驟2、活化的FB1核酸適配體溶液的制備:用50mM Tris-HCl緩沖溶液溶解FB1核酸適配體,使FB1核酸適配體的濃度為100μM,得到溶液A;取20μL溶液A加入到5μL含有三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽的50mM Tris-HCl緩沖溶液B中,得到混合液C;然后,將混合液C放置在往復(fù)式震蕩儀上室溫條件下反應(yīng)1h;最后,離心移去多余的三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽,重新分散在2mL 50mM Tris-HCl緩沖溶液D中,得到活化的FB1核酸適配體溶液,備用;

步驟3、金納米粒子修飾的絲網(wǎng)印刷碳電極的制備:將步驟1中預(yù)處理過的SPCE浸入5mL 2mM的HAuCl4溶液進(jìn)行金納米粒子的表面電沉積,得到金納米粒子修飾的絲網(wǎng)印刷碳電極,記為AuNPs-SPCE,二次蒸餾水淋洗,氮?dú)獯蹈?,備用?/p>

步驟4、FB1核酸適配體修飾的AuNPs-SPCE電極的制備:首先取10μL的步驟2中活化的FB1核酸適配體溶液滴涂在步驟1中預(yù)處理的工作電極表面,4℃條件下反應(yīng)6h,得到FB1核酸適配體修飾的AuNPs-SPCE電極,記為aptamer-AuNPs-SPCE,用50mM Tris-HCl緩沖溶液淋洗,氮?dú)獯蹈桑?/p>

步驟5、電極表面多余活性位點(diǎn)的封閉:將步驟4中aptamer-AuNPs-SPCE表面滴涂10μL1mM 6-巰基己醇的溶液,室溫條件下反應(yīng)1h,得到6-巰基己醇封閉的電極,之后用50mM Tris-HCl緩沖液淋洗,氮?dú)獯蹈桑玫娇捎糜诜R毒素B1檢測的免標(biāo)記電化學(xué)適配體傳感器,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的制備方法,其特征在于,步驟1中,SPCE預(yù)處理方法為:在5mL含有0.5M H2SO4和0.1M KCl的溶液中對(duì)SPCE進(jìn)行循環(huán)伏安掃描,掃描范圍設(shè)定為-0.2~1.5V,掃描速率為100mV s-1,直到掃描得到重疊的循環(huán)伏安曲線,用二次水淋洗,氮?dú)獯蹈?,備用?/p>

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的制備方法,其特征在于,步驟2中,所使用的Tris-HCl緩沖溶液B中含有的三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽的濃度為100mM;所使用的Tris-HCl緩沖溶液D中含有0.1M NaCl,0.2M KCl,5.0mM MgCl2和1.0mM EDTA。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的制備方法,其特征在于,步驟3中,所述電沉積的電壓為0.5V,沉積時(shí)間為1200s。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的制備方法,其特征在于,步驟2、4、5中,所使用的Tris-HCl緩沖溶液pH均為7.4。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的制備方法,其特征在于,所用的FB1核酸適配體序列為:5’-SH-(CH2)6-ATA CCA GCT TAT TCA ATT AAT CGC ATT ACC TTA TAC CAG CTT ATT CAA TTA CGT CTG CAC ATA CCA GCT TAT TCA ATT AGA TAG TAA GTG CAA TCT-3’。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的制備方法,其特征在于,所述電化學(xué)適配體傳感器檢測伏馬毒素B1的步驟如下:

分別取10μL不同濃度的FB1標(biāo)準(zhǔn)溶液滴涂在所述檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的界面上,得到修飾電極;在37℃條件下孵化30min,之后將修飾電極電極用50mMpH=7.4的Tris-HCl緩沖液淋洗,氮?dú)獯蹈?;將修飾電極置于5mL阻抗液中,掃描電化學(xué)阻抗圖譜,根據(jù)阻抗值與對(duì)應(yīng)的FB1標(biāo)準(zhǔn)樣濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種檢測伏馬毒素B1的電化學(xué)適配體傳感器的制備方法,其特征在于,所述FB1標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度依次是0,0.005,0.01,0.05,0.25,1,2,5,10,50,100ng mL-1;所述阻抗液包括:a.0.1M磷酸鹽緩沖溶液,pH=7.4;b.5mM[Fe(CN)6]3-/4-;c.0.1M KCl。

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