本發(fā)明涉及測量體內(nèi)血液特性的方法，具體是檢測血液中抗精子抗體類型的檢測方法。

背景技術(shù)：

抗精子抗體是一個復(fù)雜的病理產(chǎn)物，男女均可罹患，男性的精子、精漿，對女性來說皆屬特異性抗原，接觸到血液后，男女均可引起免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，阻礙精子與卵子結(jié)合，而致不孕，男性及女性患者血中和體液中的抗精子抗體是精子、精漿通過自身免疫或同種免疫而產(chǎn)生的，由于精子抗原的多樣性，決定了抗精子抗體的復(fù)雜性，其中與不育癥病因有關(guān)，日常臨床應(yīng)用最廣的抗精子凝集抗體、精子制動化抗體和精子毒素抗體等抗精子抗體最引人注目。

1.精子凝集抗體

精子凝集抗體在男性和女性不育患者血清中均可發(fā)現(xiàn)，它是由精子自身免疫和同種免疫所產(chǎn)生。男性的陽性率約為10％，女性在67.2％～78.9％之間，在37℃對精子有很強的吸著力，凝集精子的類型有頭對頭、尾對尾和頭尾混合3種。

2.精子制動化抗體

精子制動化抗體具有抗體的特性，原因不明不孕婦女血中的陽性率約為17.6％，而對照群的孕婦和未婚婦女，精子凝集陽性率為45.8％，制動化抗體全為陰性。

3.精子細胞毒抗體

精子細胞毒抗體的特點是直接作用于精子，發(fā)揮殺滅精子的作用。在有精子凝集因子的男性患者的血中，精子凝集效價與精子細胞毒指數(shù)(STI)大致平行，但凝集價高，STI低的也不少。Manarang，Pangan及Behrman等人曾指出STI與精子凝集效價和精子制動化值(SIV)實際處于一種平行關(guān)系，但目前認為它是一種獨立的抗體。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明為了解決提供一種抗精子抗體類別的檢測方法，而提供一種準(zhǔn)確性高，更加靈敏的抗精子抗體類型的檢測方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種抗精子抗體的檢測方法，其特征在于采用純化的精子制成生物薄片作為抗原，包被在載玻片的3個反應(yīng)區(qū)內(nèi)；在反應(yīng)區(qū)內(nèi)加待測稀釋血清，經(jīng)孵育、漂洗、甩干后，分別加入生物素化羊抗人精子凝集抗體，生物素化羊抗人精子制動化抗體，生物素化羊抗人精子細胞毒抗體，經(jīng)孵育、漂洗、甩干后，再加入熒光素標(biāo)記的鏈霉親和素，形成熒光素標(biāo)記的鏈霉親和素-生物素?zé)晒鈴?fù)合物，在每個反應(yīng)區(qū)內(nèi)產(chǎn)生的黃綠色熒光代表該抗體陽性。

一.盒體

本發(fā)明的試劑盒包括盒體(1)與盒蓋(2)，其特征在于：盒體(1)一側(cè)長邊內(nèi)形成有插孔(3)的試劑架(4)上，插孔(3)分別容納生物素化羊抗人精子凝集抗體(5)，生物素化羊抗人精子制動化抗體(6)，生物素化羊抗人精子細胞毒抗體(7)，熒光素標(biāo)記的鏈霉親和素(8)，封片劑(9)，盒底的中間設(shè)有一個將盒底分成放置緩沖液試劑(10)與放置生物薄片(11)兩部分的紙質(zhì)擋片(12)，生物載片(11)外面塑料包裝(13)。

附圖說明

圖1是本發(fā)明試劑盒的示意圖；

圖2是本發(fā)明生物薄片的示意圖。

圖中：1.盒體 2.盒蓋

3.插孔 4.試劑架

5.生物素化羊抗人精子凝集抗體 6.生物素化羊抗人精子制動化抗體

7.生物素化羊抗人精子細胞毒抗體 8.熒光素標(biāo)記的鏈霉親和素

9.封片劑 10.緩沖液試劑

11.生物薄片 11a.抗人精子凝集抗體反應(yīng)區(qū)

11b.抗人精子制動化抗體反應(yīng)區(qū) 11c.抗人精子細胞毒抗體反應(yīng)區(qū)

12.紙質(zhì)擋片 13.塑料包裝

二.試劑盒配備的物品

在本發(fā)明試劑盒的瓶架4上各放置有1瓶生物素化羊抗人精子凝集抗體，生物素化羊抗人精子制動化抗體，生物素化羊抗人精子細胞毒抗體，封片劑，異硫氰酸熒光素偶聯(lián)鏈霉親和素，盒底左部分放置有兩瓶50ml濃縮的磷酸鹽(含緩沖磷酸鹽10.2克)緩沖液，右部分放置有8張帶有包裝袋的生物薄片。

三、生物薄片的制作

本發(fā)明生物薄片11的材質(zhì)為聚苯乙烯，其尺寸與一般載片相似，其一面涂有聚賴氨酸涂層,載片上排列著3個方形的反應(yīng)區(qū)11a、11b、11c，對應(yīng)的檢測區(qū)為抗精子凝集抗體，抗精子制動化抗體，抗精子細胞毒抗體，反應(yīng)區(qū)在有涂層的一面向載片內(nèi)部凹陷，形成25μl容積的凹槽，每個反應(yīng)區(qū)的凹槽都包被有純化的精子的生物薄片，載片外部包有一層不透光的包裝袋，冰箱內(nèi)2-8℃保存。

具體實施方式：

實施例1

1.本發(fā)明試劑盒檢測方法

取生物薄片放置室溫后，加入1：100PBS稀釋的血清，20～37℃1～2h或4℃過夜，0.01mol/L PBS洗2min 3次；依次分別滴加0.01mol/L PBS1:100稀釋的生物素化羊抗人精子凝集抗體，生物素化羊抗人精子制動化抗體，生物素化羊抗人精子細胞毒抗體，20～37℃1～2h，0.01mol/L PBS洗2min 3次；各反應(yīng)區(qū)分別滴加0.01mol/L PBS1:100稀釋的異硫氰酸熒光素偶聯(lián)鏈霉親和素，20～37℃1～2h，0.01mol/L PBS洗2min 4次；封片劑封片，熒光顯微鏡10ⅹ40倍視野下觀察；FITC在490～495nm激發(fā)，在520～530nm發(fā)射熒光，如為陽性呈黃綠色。

2.為了更好地理解本發(fā)明，下面通過實驗來進一步說明本發(fā)明在檢測抗精子抗體方面的積極效果：

所選用的病例為2015年1月至2016年1月在我院女性不孕不育癥患者168例,年齡20～35歲,平均31.5歲,進行抗精子凝集抗體，抗精子制動化抗體，抗精子細胞毒抗體檢測，并進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2.1精子凝集抗體

精子凝集抗體在男性和女性不育患者血清中均可發(fā)現(xiàn)，它是由精子自身免疫和同種免疫所產(chǎn)生，男性的陽性率約為10.0％，女性在67.2％～78.9％之間。

2.2抗精子制動化抗體

不孕婦女血中的抗精子制動抗體陽性率約為17.6％，而對照群的孕婦和未婚婦女，精子凝集陽性率為45.8％，制動化抗體全為陰性。

3.3精子細胞毒抗體

精子細胞毒抗體的特點是直接作用于精子，發(fā)揮殺滅精子的作用，在本實驗中陽性率為12.5％。

抗精子凝集抗體常見得結(jié)合部位為精子頭部，抗精子制動抗體常出現(xiàn)在精子的尾部，抗精子細胞毒抗體常結(jié)合在頭部部位。通過本發(fā)明檢測可以同時檢測到可看抗精子凝集抗體，抗精子制動化抗體，抗精子細胞毒抗體可以作為臨床診斷和治療不孕癥的良好指標(biāo)之一，對不孕癥的診斷和治療有重要的研究及應(yīng)用價值，從而使不孕患者達到孕育的生理要求，提高妊娠效應(yīng)，減輕不孕患者夫婦心理和社會壓力，對維護社會的安定團結(jié)具有重要的意義。