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基于濾紙干血斑檢測ToRCH10項(xiàng)抗體的方法與流程

文檔序號:12119444閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種基于濾紙干血斑檢測ToRCH10項(xiàng)抗體的方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:

從濾紙片干血斑取得直徑為2-4mm的血片;

將血片采用樣本稀釋液復(fù)溶,制得復(fù)溶樣品;

復(fù)溶樣品采用流式熒光發(fā)光法測定。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述樣本稀釋液為包括羊抗人IgG抗體或牛血清白蛋白的磷酸緩沖溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述血片采用樣本稀釋液復(fù)溶是將血片置于離心管中,向離心管中加入所述樣本稀釋液,室溫震蕩0.5-2h復(fù)溶,制得復(fù)溶樣品。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述血片為4-8片,所述加入的樣本稀釋液為100-200μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述血片為4片,所述加入的樣本稀釋液為100μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述流式熒光發(fā)光法包括以下步驟:

步驟1:將所述復(fù)溶樣品與磁性微球懸液混合,使復(fù)溶樣品中的特異性IgG抗體或IgM抗體分別結(jié)合到交聯(lián)有與所述IgG抗體或IgM抗體對應(yīng)抗原的磁性微球上,洗滌去除反應(yīng)后的剩余液體,制得磁性微球-抗原-抗體復(fù)合物;

步驟2:將藻紅蛋白標(biāo)記的抗人IgG抗體或IgM抗體加入步驟1制備的磁性微球-抗原-抗體復(fù)合物中,洗滌去除反應(yīng)后的剩余液體,制得磁性微球-抗原-抗體-藻紅蛋白標(biāo)記的抗人IgG抗體或IgM抗體復(fù)合物;

步驟3:將磁性微球重懸液加入步驟2制備的磁性微球-抗原-抗體-藻紅蛋白標(biāo)記的抗人IgG抗體或IgM抗體復(fù)合物中,采用多功能流式分析儀檢測。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,所述步驟1為:

在96孔反應(yīng)板上各孔加入50μL/孔的磁性微球懸液;

在96孔反應(yīng)板上各孔中分別加入10μL/孔的對照品、陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品以及復(fù)溶樣品;

加蓋封板紙,微孔板振蕩器上充分混勻,置37℃恒溫箱避光反應(yīng)30min;

取出96孔反應(yīng)板,振蕩30s混勻后置于磁板上靜置60s,甩掉反應(yīng)液后各孔分別加入200μL/孔的洗液,重懸30s后置于磁板上靜置60s,甩掉洗液,以除去反應(yīng)殘留物。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,所述步驟2為:

在所述步驟1處理后的96孔反應(yīng)板的各孔分別加入50μL/孔的藻紅蛋白標(biāo)記的抗人IgG抗體或IgM抗體溶液,加蓋封板紙,微孔板振蕩器上充分混勻,置37℃恒溫箱避光反應(yīng)30min;

取出96孔反應(yīng)板,振蕩30s混勻后置于磁板上靜置60s,甩掉反應(yīng)液后各孔分別加入200μL/孔洗液,重懸30s后置于磁板上靜置60s,甩掉洗液,以去除反應(yīng)殘留物。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,所述步驟3為:

在所述步驟2處理后的96孔反應(yīng)板的各孔分別加入150μL/孔的磁性微球重懸液,充分振蕩,使磁性微球懸??;將96孔反應(yīng)板在多功能流式分析儀上測試。

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