本申請是以申請?zhí)枮?01280022626.1、申請日為2012年5月10日的原申請為基礎(chǔ)所提出的分案申請。

本文公開的實施例涉及用于檢測和定位包含在印跡膜中的物質(zhì)的設(shè)備和過程。更特別地，其涉及一種用于向印跡膜施加試劑、洗液和檢測化學(xué)的技術(shù)，以經(jīng)由真空或正壓的使用而快速地實現(xiàn)此檢測。

背景技術(shù)：

凝膠電泳的使用當(dāng)前是用于生物材料的分離的普遍技術(shù)。非生物材料也能夠使用凝膠或其他色譜支持來分離，但是相對于生物制劑的努力范圍更大。典型的應(yīng)用包括序列確定背景下；多形態(tài)檢測中；或者其他背景下的尺寸驗證中的各種尺寸的核酸片段的分離。還頻繁地執(zhí)行的是蛋白質(zhì)、糖蛋白、蛋白質(zhì)片段的分離和凝膠分離作為均勻性或純凈度的驗證、翻譯后改性的識別和分子量確認(rèn)的應(yīng)用。

在所有這些程序中，生物實體的混合樣本被施加于電泳凝膠，并且通過跨凝膠施加電場來分離各組分。無論用來使凝膠顯影的方式如何，都必須以某種方式來檢測結(jié)果產(chǎn)生的包含在樣本中的物質(zhì)的遷移的圖案。

為了執(zhí)行此檢測，通常，使凝膠支撐體與印記膜接觸，物質(zhì)被以其出現(xiàn)在凝膠上的相同圖案傳輸?shù)皆撚∮浤?。然后至少通過用蛋白質(zhì)或洗滌液阻斷膜來檢測“斑點(diǎn)”以減少非特定粘合（否則其將導(dǎo)致高水平的噪聲和低水平的檢測）。典型的阻斷劑包括干酪素、牛血清白蛋白（bsa）、具有tween?表面活性劑的緩血酸胺鹽溶液（tbs-t溶液）中的脫脂奶粉（一般地約1-5%）或具有tween?表面活性劑的磷酸鹽緩沖鹽溶液（pbs-t溶液）。然后用膜上的抗原所特定的抗體來培育生物實體。然后全面地洗滌膜以去除任何污染物、未結(jié)合阻斷蛋白質(zhì)或抗體等。然后用一級抗體所特定的二級酶、放射性同位素、氟（fluorfluor）或生物素偶聯(lián)抗體來處理和培育膜。然后全面地洗滌膜以去除未結(jié)合二級抗體。然后，施加檢測試劑，一般地為發(fā)色、化學(xué)發(fā)光、熒光、放射性或鏈親和素標(biāo)簽材料，其結(jié)合到或者是酶偶聯(lián)劑培養(yǎng)基。最后，使用適當(dāng)?shù)臋z測設(shè)備來確定生物實體的存在、不存在、位置、量等。最后六個步驟一般花費(fèi)從3-6個小時至整夜，這取決于所選試劑、膜和生物實體之間的反應(yīng)速度。該過程要求膜在搖動或其他適當(dāng)?shù)幕旌掀脚_上的多個培育時段。其是大多數(shù)研究人員不喜歡的冗長過程且消耗（浪費(fèi)）大量的試劑。

某些研究人員已經(jīng)建議使用吸收劑材料的毛細(xì)管作用，諸如放置在膜下面的濾紙，以通過膜吸取剩余流體并改善該過程、尤其是洗滌步驟的速度。

us5,155,049提到了一種由hoeferscientificinstruments公司銷售的稱為hybrid-ease?雜交室的系統(tǒng)。此室包括膜被夾在其之間的兩個格柵。格柵板被卡合到圍繞膜的位置，以及配合到由格柵產(chǎn)生的開放空間中的注射器。一個注射器被用來施加試劑和洗滌，并且另一個用來收回多余量。該系統(tǒng)要求大量的液體以便進(jìn)行操作，采用起來是麻煩的，并且仍是相當(dāng)耗時的。其還提到在某些特定試驗中，諸如elisa試驗，在小體積阱中（諸如96孔微量滴定板）中，其他人已使用真空來在洗滌步驟中通過膜吸取液體。然而，這使其努力打折扣，因為其僅在小體積應(yīng)用中可用且仍是不可控的。他們替代地建議更好的方法是使用在濾紙頂部和覆蓋層上具有膜且然后壓緊被夾在兩個板之間的膜以擠壓液體通過膜并進(jìn)入紙中的手動壓力機(jī)。

在2005年12月3日提交的ussn60/732,994中，有人建議人們使用由多個層形成的設(shè)備，其包括在一層或多層印跡膜下面的多孔支撐層、在印跡膜上面的流量分配器和在流量分配器上以將液體包含在期望區(qū)域并允許此類液體的較低起始體積的阱。優(yōu)選地，該流量分配器是非結(jié)合或低結(jié)合多孔膜。

在2006年10月18日提交的共同待審的美國序號11/582,727和11/582,599中，公開了一種設(shè)備，其中，保持流體導(dǎo)向器的保持器和多孔支撐體能夠配合到歧管設(shè)備中以處理各種流體并檢測生物實體。該歧管具有帶有或沒有阱的蓋體和與保持器的中心開口成一直線的中心開口雖然有用，但其具有抑制其普遍使用和接受的限制。

很明顯，需要一種用于檢測印跡膜上的生物材料或?qū)嶓w的更高效方法。本文公開的實施例允許印跡膜中的生物實體的更有效和高效檢測。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

根據(jù)某些實施例，提供了免疫檢測系統(tǒng)和方法。該系統(tǒng)包括適合于與諸如真空的驅(qū)動力連通的歧管底座。該歧管保持載體，載體支撐印跡膜保持器。印跡膜保持器保持蛋白質(zhì)能夠經(jīng)由電泳被結(jié)合到的印跡膜。該系統(tǒng)和方法使得用戶能夠快速且高效地使蛋白質(zhì)印跡準(zhǔn)備好用于檢測，諸如通過化學(xué)發(fā)光。

在一個實施例中，提供了一種在執(zhí)行本文公開的方法時有用的設(shè)備。該設(shè)備包括印跡膜保持器（也稱為印跡保持器，或者簡單地稱為保持器），印跡膜保持器由下多孔支撐層和上流量分配器形成。兩者通過諸如用鉸鏈、夾持件、彈性帶、粘合劑、球窩、插銷和凹坑的方法或者協(xié)作接合緊固件或其他此類手段被保持在一起。保持器被打開且一個或多個印跡膜被放置在下層和上層之間。保持器然后被關(guān)閉并被放置到由上板和下板形成的載體中，所述上板和下板每個具有至少一個開口，所述開口允許流體通過載體的上板，通過保持器和包含在其內(nèi)的膜，并且然后通過載體的下板。載體然后被設(shè)置于歧管設(shè)備中以處理印跡膜上的樣本。在該過程完成時，載體被從歧管去除，打開，并且印跡膜保持器被去除。然后，印跡膜保持器被打開并且印跡膜被抽出以用于下游檢測。

在另一實施例中，保持器由選自由塑料和紙組成的組的材料形成，該保持器具有頂部和底部，每個頂部和底部具有外邊緣、頂面和底面以及頂面與底面之間的厚度，所述部分中的至少一個具有從外邊緣向內(nèi)的實心部分，至少頂部具有從外邊緣向內(nèi)的開口、在底部的頂面上形成的多孔支撐體以及在頂部的下表面上形成的流量分配器，該分配器覆蓋頂部的開口，其中，保持器具有用于在保持器的頂部和底部被對準(zhǔn)時可釋放地將第一和第二部分相互固定的裝置，使得頂部的底面和底部的頂面被對準(zhǔn)且被相互鄰近地布置以使頂部和底部在一起。

在另一實施例中，保持器被形成為使得頂部和底部每個具有沿著一側(cè)的穿孔，并且該穿孔在頂部和底部上對準(zhǔn)，并且該穿孔易于被撕裂以打開保持器以取回印跡膜。

在一個實施例中，載體具有外周界壁，外周界壁從載體頂板的開口向上延伸以形成阱以保持試劑和洗滌流體。

在另一實施例中，載體具有一個或多個水平指示器以指示載體的頂面是否至少沿著其長度且優(yōu)選地沿著其長度和寬度在水平平面中水平。該水平也可以在歧管上。

在另一實施例中，水平指示器是單個360度氣泡指示器。

在另一實施例中，水平指示器是至少兩個線水平氣泡指示器，至少一個被沿著頂板的頂面的長度布置并且至少一個被沿著頂板的頂面的寬度設(shè)置。

在另一實施例中，（一個或多個）載體內(nèi)表面包含用以使保持器中的一個或多個印跡膜伸展從而避免膜中形成褶皺并使膜的表面盡可能平坦或平面化的特征。

在另一實施例中，載體具有由位于頂板或底板的內(nèi)表面中的至少一個上的凸緣密封形成的伸展特征。優(yōu)選地，其具有至少在底板的相鄰內(nèi)表面上形成的凸緣密封。更優(yōu)選地，凸緣密封所定位的寬度和長度大于保持器的開口但小于保持器外邊緣的寬度和長度。

在另一實施例中，載體具有由位于載體的一半上的可壓縮或柔性構(gòu)件與載體的另一半上的相對凸起的剛性特征組成的伸展特征。

在一個實施例中，歧管被再分成兩個或更多子阱以并行操作印跡膜或者一個印跡膜的子部分，每個膜通常被用至少一種不同的試劑處理。

在另一實施例中，載體被再分成兩個或更多子阱，保持器也被再分成相應(yīng)的子阱。

在另一實施例中，載體子阱被單獨(dú)地與相應(yīng)的保持器子阱密封并對準(zhǔn)從而防止阱之間的流體遷移。

在另一實施例中，歧管具有找平腳，當(dāng)結(jié)合載體的一個實施例的一個或多個水平指示器來使用時，找平腳允許歧管和載體在水平面中水平。

在一個實施例中，歧管具有一系列腳，其能夠被沿著豎直方向調(diào)整，從而當(dāng)載體被附接于歧管時相對于載體上的（一個或多個）水平指示器使歧管水平。

在另一實施例中，所述一系列腳具有螺釘，螺釘配合到歧管底部的螺紋部分中以允許腳被沿著豎直方向單獨(dú)地升高或下降。

在另一實施例中，歧管被再分成兩個或更多子阱以并行操作載體與不同的印跡膜或一個印跡膜的子部分，每個膜通常被用至少一種不同的試劑來處理。

在另一實施例中，載體頂板開口具有蓋，蓋被定位于開口的上邊緣上以使長期、即整夜培育期間的蒸發(fā)最小化。

在另一實施例中，蓋與阱具有可再密封關(guān)系。

在另一實施例中，蓋是遮光的，諸如由不透明材料制成。

在另一實施例中，載體底板上的開口具有蓋體以防止流體泄漏。

在另一實施例中，蓋體被被可釋放地密封。

在另一實施例中，蓋體具有閥特征。

在另一實施例中，閥具有鴨嘴或傘狀構(gòu)造。

在另一實施例中，閥可用壓力差操作并且在閥上不存在壓力差時閉合。

在另一實施例中，提供了一種用以檢測印跡膜上的一個或多個生物實體的快速、高效且方便的方法。該檢測可涉及膜上的生物物質(zhì)的位置、性質(zhì)或量。該方法涉及選自正壓或真空的壓力輔助體系（regiment），用于向印跡膜供應(yīng)試劑以及從印跡膜去除試劑，并且允許從被嵌入膜中的物質(zhì)洗滌污染物，其將使用非常低量的液體和試劑來檢測。這種方法使得能夠在不損害印跡質(zhì)量的情況下在約30-45分鐘內(nèi)完成阻斷、洗滌和抗體結(jié)合步驟。人們簡單地獲取保持器、將其打開并在表面之一上放置（一個或多個）印跡膜，使得當(dāng)該設(shè)備在（一個或多個）膜周圍被閉合時印跡膜的下表面鄰近于多孔支撐體且印跡膜的上表面鄰近于流量分配器。該設(shè)備被放置在具有壓力或真空源的歧管上或內(nèi)，并且所述過程開始。

本文公開的實施例的另一目的是提供一種用于執(zhí)行一個或多個印跡的壓力或真空輔助免疫測定的設(shè)備，該設(shè)備包括真空歧管、被設(shè)計成配合在歧管上的載體及被設(shè)計成配合在載體內(nèi)以便處理印跡的保持器以及收集抗體中的一個或多個的裝置。

本文公開的實施例的另一目的是提供一種用于對一個或多個膜執(zhí)行真空輔助免疫測定的過程，該過程包括步驟：

a.提供真空歧管、用于保持保持器的載體、用于一個或多個印跡膜的保持器、包含將要進(jìn)行試驗的一個或多個生物實體的一個或多個膜，該載體由頂板和底板形成，頂板和底板每個具有穿過其厚度形成以允許流體從其中流過的至少一個開口，該保持器能夠位于載體的頂板與底板之間并與載體的每個板的至少一個開口流體連通，該保持器由被保持在一起的多孔支撐體和流量分配器形成，所述（一個或多個）膜被放置在多孔支撐體上，流量分配器位于膜的頂部上且保持器被放置在載體的頂板與底板之間，使得流量分配器鄰近于頂板的底部或內(nèi)表面并且多孔支撐體鄰近于底板的頂面的內(nèi)部，

b.向載體頂板的所述至少一個開口添加一種或多種試劑并施加真空以通過頂板中的開口、保持器的流量分配器和多孔支撐體以及底板的開口將試劑拉入膜中，以及

c.向一個或多個阱添加一種或多種洗滌劑并施加真空以拉動洗滌劑和任何未結(jié)合的試劑通過頂板開口、流量分配器、膜和多孔支撐體以及載體底板的開口并進(jìn)入真空歧管中，以及

d.根據(jù)期望或需要將步驟（b和c）重復(fù)附加的一次或多次。

在某些實施例中，公開了一種用于執(zhí)行免疫測定的設(shè)備，該設(shè)備包括由選自由塑料和紙組成的組的材料形成的保持器，該保持器具有頂部和底部，每個頂部和底部具有外邊緣、頂面和底面以及頂面與底面之間的厚度，所述部分中的至少一個具有從外邊緣向內(nèi)的實心部分，至少頂部具有從外邊緣向內(nèi)的開口、在底部的頂面上形成的多孔支撐體和在頂部的下表面上形成的流量分配器，該分配器覆蓋頂部的開口，其中，保持器具有用于在保持器的頂部和底部被對準(zhǔn)時將第一和第二部分可釋放地相互固定的裝置，使得頂部的底面和底部的頂面被對準(zhǔn)并相互鄰近地布置，以使頂部和底部在一起。

在某些實施例中，用于可釋放地固定的裝置可以包括在外面形成并圍繞多孔支撐體開口的密封材料。保持器的頂部和底部可以由單塊材料制成，并且保持器可以具有折痕部，折痕部延伸保持器的寬度以形成第一部分和第二部分。該折痕部可以是鉸鏈。

在某些實施例中，流量分配器可以具有下表面和上表面，并且流量分配器的上表面可以被附接于保持器的頂部的底面，使得第一部分的厚度形成流量分配器的上表面上的一個或多個阱。頂部的開口居中地位于頂部的外邊緣內(nèi)。

在某些實施例中，用于執(zhí)行免疫測定的設(shè)備可以包括保持器和用于保持器的載體，該保持器由選自由塑料和紙組成的組的材料形成，該保持器可以具有頂部和底部，每個頂部和底部可以具有外邊緣、頂面和底面以及在頂面與底面之間的厚度，所述部分中的至少一個可以具有從外邊緣向內(nèi)的實心部分，至少頂部可以具有從外邊緣向內(nèi)的開口、在底部的頂面上形成的多孔支撐體和在頂部的下表面上形成的流量分配器，該分配器覆蓋頂部的開口，其中，保持器可以具有用于在保持器的頂部和底部被對準(zhǔn)時將第一和第二部分可釋放地相互固定的裝置，使得頂部的底面和底部的頂面被對準(zhǔn)并相互鄰近地布置，以使頂部和底部在一起。

在某些實施例中，該設(shè)備還可以包括由頂板和底板組成的用于保持器的載體，頂板和底板每個具有寬度和長度、頂面和底面以及在頂面與底面之間的厚度、外邊緣和至少一個開口，所述板具有大于保持器的長度和寬度的長度和寬度，載體的頂板具有在寬度和長度方面基本等于保持器的頂部開口的開口，頂板的底面和底板的頂面每個具有在兩個板相互鄰近時相互對準(zhǔn)的一個或多個密封，并且所述密封被以大于頂板開口但小于保持器外尺寸的寬度和長度布置在每個表面上，板中的至少一個具有鄰近于板的外邊緣且從該板的密封向外形成的密封，以及用于將頂板和底板可釋放地保持在一起的裝置。

在某些實施例中，頂板的底面和底板的頂面中的密封可以是凸緣密封。

在某些實施例中，可以存在被附接于頂板的上表面的至少一個水平指示設(shè)備，并且其可以包括360度指示器?？梢源嬖趦蓚€水平指示器，一個沿著頂板的頂面的長度且另一個沿著頂板的頂面的寬度。

在某些實施例中，公開了一種用于執(zhí)行真空輔助免疫測定的設(shè)備，該設(shè)備包括真空歧管和由塑料或紙形成的保持器，該保持器具有折痕部，折痕部延伸保持器的寬度以形成第一部分和第二部分，每個部分具有在保持器沿著折痕部被折疊閉合時對準(zhǔn)的開口，多孔支撐體覆蓋第一開口且流量分配器覆蓋第二開口，其中，該保持器具有用于在保持器沿著折痕部被折疊閉合時將第一和第二部分可釋放地相互固定的裝置，以使第一和第二部分在一起。流量分配器可以是膜。

在某些實施例中，公開了一種用于執(zhí)行免疫測定的設(shè)備，該設(shè)備包括具有底座的真空歧管，該底座具有上支撐表面和在支撐體下面的排水溝（drain），上支撐表面用于支撐包含將要被處理的保持器的一個或多個載體，上表面包含從其中延伸通過的一個或多個中心開口，并且所述一個或多個中心開口與一個或多個載體對準(zhǔn)。

附圖說明

圖1是根據(jù)某些實施例的載體的分解圖；

圖2是根據(jù)某些實施例的處于打開位置的載體的透視圖；

圖3是根據(jù)某些實施例的處于閉合位置的載體的透視圖；

圖4是根據(jù)某些實施例的載體的用橫截面示出的透視圖；

圖4a是根據(jù)某些實施例的具有傘閥的載體的用橫截面示出的透視圖；

圖5是根據(jù)某些實施例的包括印跡膜的印跡膜保持器的透視圖；

圖5a是根據(jù)某些實施例的示出了流量分配器的印跡膜保持器的透視圖；

圖5b是根據(jù)某些實施例的印跡膜保持器的從底側(cè)看的透視圖；

圖6是根據(jù)某些實施例的包括圖5的保持器的處于打開位置的載體的透視圖；

圖7是根據(jù)某些實施例的載體的底側(cè)的分解透視圖；

圖8是根據(jù)某些實施例的蓋體就位情況下的載體的底側(cè)的透視圖；

圖9是根據(jù)某些實施例的歧管的透視圖；

圖9a是根據(jù)某些實施例的具有收集器皿的歧管的透視圖；

圖10是根據(jù)某些實施例的包括載體的歧管的分解透視圖；以及

圖10a是根據(jù)某些實施例的歧管、保持器和載體的透視圖。

具體實施方式

首先轉(zhuǎn)到圖1，示出了根據(jù)某些實施例的載體10。在所示的實施例中，載體10包括蓋11、載體頂板12、載體底板13、蓋體14以及在載體頂板12上的氣泡水平儀15。根據(jù)某些實施例，載體10用于保持印跡保持器扁平，并向印跡保持器輸送諸如抗體、洗滌緩沖劑等之類的試劑。根據(jù)某些實施例，載體10是與歧管底座（下文討論）分開的獨(dú)立器件，其允許用戶同時設(shè)置多個印跡。因此，每個載體10能夠被選擇性地加載包含印跡的印跡保持器，添加其各自的抗體，并且然后進(jìn)行培育。

圖2示出了處于打開位置的載體10的實施例，在圖中的左側(cè)示出頂板12的底側(cè)且在右側(cè)示出底板13的頂側(cè)。在所示的實施例中，頂板12和底板13在16處被鉸鏈連接。如在本實施例中所示，鉸鏈?zhǔn)菍蓚€部分結(jié)合在一起的“活動（live）”鉸鏈。替代地，可以單獨(dú)地制作鉸鏈并使用粘合劑、熱結(jié)合或機(jī)械緊固件將其附接。其他實施例不使用鉸鏈（未示出）而是使用夾持件、彈性帶或協(xié)作接合緊固件（諸如縫槽和制動器）、摩擦配合銷等，在相應(yīng)的頂部和底部上或中形成以在使用期間將其保持在一起。其他相當(dāng)?shù)难b置對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是明顯的，并且也意圖包括它們。

根據(jù)某些實施例，載體頂板12可以具有一個或多個阱22，其能夠在使用期間被用于保持和/或輸送洗滌流體和試劑。（一個或多個）阱22可以被形成為具有直立壁22a、22b、22c和22d（圖1）的載體頂板12的頂面的一部分，或者作為單獨(dú)件，其被簡單地附接或放置在載體頂板12的頂上。蓋11能夠被放置在載體10上以覆蓋阱22并防止抗體及其他流體在延長的培育時段期間、特別是在整夜培育期間蒸發(fā)。

載體底板13包括多孔支撐體4，其可以是簡單篩子、格柵、流量導(dǎo)向格柵或燒結(jié)多孔結(jié)構(gòu)，諸如porex?膜或者粗或大孔的微孔過濾器，諸如紡織或無紡紙、聚丙烯或聚乙烯織物、玻璃墊或紙或者1-10微米微孔過濾器。此類支撐體可以由聚合物、玻璃、陶瓷或金屬材料制成，包括但不限于諸如不銹鋼或合金鋼、鋁等金屬以及諸如聚乙烯、聚丙烯、聚砜、聚醚砜、苯乙烯、尼龍等聚合物。圖2示出了流量導(dǎo)向格柵的形式的多孔支撐體4，其包括一系列凹槽72和開口74。開口74位于從多孔支撐體4的周界向內(nèi)的位置。開口74與凹槽72流體連通，使得流體被收集在凹槽72中并被指引通過開口74。凹槽72收集用過的流體并將用過的流體輸送到開口74，其將流體指引到廢物室或收集托盤（未示出）。如果研究人員希望收集流體中的一種或多種，則可以適當(dāng)?shù)貙⑹占斜P定位成這樣做。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識到的是可以使用其他圖案的凹槽或開口，因為期望的結(jié)果是將用過的流體指引至開口或一系列開口，其將用過的流體指引到預(yù)定目的地。

載體頂板12和支撐體4的外邊緣可以由與支撐體4相同的材料制成。當(dāng)使用整體式鉸鏈時，其必須由諸如聚乙烯、聚丙烯、彈性體的柔性材料或諸如abs、k樹脂等沖擊改性材料中的一個制成。當(dāng)使用單獨(dú)的鉸鏈、夾持件、彈性帶、粘性膜或其他固定裝置時，其可以根據(jù)期望由金屬、塑料或彈性體制成。

根據(jù)某些實施例，第一凸緣密封30a被定位于如所示的載體頂板12的上側(cè)上，并且可與繞著載體底板13上的多孔支撐體4定位的第二凸緣密封30b協(xié)作，當(dāng)頂板和底板在印跡保持器被接合的情況下處于閉合位置時維持不透流體系統(tǒng)。因此，凸緣密封30a和30b被定位成使得當(dāng)載體頂板12相對于載體底板13旋轉(zhuǎn)至閉合位置時，兩個密封相互配準(zhǔn)或?qū)?zhǔn)以將載體密封。在某些實施例中，每個凸緣密封30a、30b優(yōu)選地由諸如硅樹脂或熱塑性彈性體（tpe）的柔性彈性體制成，并且是v形的，v的一個支腿短于另一個。每個v形凸緣密封的長端座置在載體頂板和底板的相應(yīng)凹坑中（圖4）。每個v形密封的短支腿是凸起的、可容易變形的特征。在載體閉合和密封位置，載體頂板上的v的較短支腿將接觸印跡保持器的頂面。載體底板上的v的較短支腿將接觸印跡保持器的底部并偏斜，如在圖4中最好地看到的。密封的傾斜幾何結(jié)構(gòu)在偏斜時施加力以拉動保持器50或使其伸展，其“敲擊（drum）”膜并保持其平坦。平坦膜避免可能在膜表面上產(chǎn)生尖頂和凹處的變形，所述尖頂和凹處聚集抗體體積，這進(jìn)而導(dǎo)致印跡膜區(qū)域或多或少暴露于抗體，導(dǎo)致不良且不一致的結(jié)果。此密封防止泄露并使得能夠?qū)崿F(xiàn)長期（例如，整夜）培育。密封的設(shè)計還允許低力密封機(jī)構(gòu)和載體10所需的低夾持力。這幫助維持保持器和印跡膜的平坦性?？舍尫砰V鎖35或其他鎖定機(jī)構(gòu)將載體鎖定在閉合位置（圖3）。根據(jù)某些實施例，能夠使用單個凸緣密封，優(yōu)選地用于底板的凸緣密封30b。底部凸緣密封30b用于使印跡保持器伸展。一旦被伸展，界面被設(shè)計成使得載體頂部和底部將印跡保持器夾持就位。在圖4中還示出了外凸緣密封300a、300b。

圖5、5a和5b示出了根據(jù)某些實施例的保持器2。保持器2包括框架40，框架40具有被構(gòu)造成支撐蛋白質(zhì)印跡膜45的周界邊緣。在某些實施例中，框架40由塑料或紙構(gòu)成。在某些實施例中，框架40的材料可以是生物樹脂、紙板、hips、紙或能夠支撐膜并保持其平坦的任何其他適當(dāng)剛性材料。根據(jù)某些實施例，諸如gvpp膜的流量分配器46被層壓或附接于框架，并且能夠?qū)⒂≯E膜45定位于其上面。流量分配器46被附接于框架，并且當(dāng)印跡保持器被閉合時，印跡膜被夾在流量分配器46與多孔支撐體47之間。印跡保持器上的多孔支撐體47被支撐并與載體底板的多孔支撐體4接觸。流量分配器46用于使阻斷溶液和抗體均勻地分布在印跡膜上。其還在施加真空時調(diào)節(jié)這些溶液的流量。保持器2還包括多孔支撐體47，諸如沿著一個邊緣被結(jié)合到框架的一塊聚丙烯無紡網(wǎng)格，允許用戶容易接近以添加印跡膜，并且其支撐印跡膜且防止其在真空力下被損壞。支撐體47是多孔的以允許液體通過印跡保持器2的自由流動。在圖6中示出了適當(dāng)?shù)匚挥谳d體10中的保持器2。

在某些實施例中，能夠通過將壓敏粘合劑層壓到聚丙烯網(wǎng)格的背面來制作保持器2，使得在向保持器添加印跡膜之后，用戶去除背襯條以暴露壓敏粘合劑，并且然后將網(wǎng)格密封到流量分配器（例如，gvpp膜）以產(chǎn)生密封封套。為了去除印跡膜，可包括穿孔和拉鏈以撕開封套。

在某些實施例中，將薄蔬菜紙、蠟紙或紙材料的其他薄片紙張材料層壓到聚丙烯網(wǎng)格的一側(cè)。當(dāng)保持器被用水潤濕時（如在過程中要求的），潤濕的紙背襯粘到gvpp膜，產(chǎn)生臨時密封。在該過程完成之后，印跡膜易于去除而不必撕裂任何東西或處理粘的粘合劑。保持器然后被去掉，因為在紙背襯干燥之后，其卷曲且保持器變得不可使用。

圖7和8圖示出載體底板13的底側(cè)。在圖7中可見的是多孔支撐體4中的多個開口74。蓋體14被用來覆蓋開口以防止培育期間的抗體泄漏，特別是當(dāng)長時間培育時，諸如整夜，如在圖8中看到的。根據(jù)某些實施例，開口74被環(huán)形凸起環(huán)49圍繞，并且蓋體14具有被構(gòu)造成與環(huán)形環(huán)49配合的相應(yīng)環(huán)形縫槽60（圖4），并且因此蓋體能夠被壓到環(huán)上以將其固定到載體板13。

替代地，可以取消蓋體14，并且可使用傘閥144來在培育期間保持流體，如圖4a中所示。當(dāng)真空被開啟時，閥打開且流體流出。優(yōu)選地，由于epdm（乙烯丙烯二烯系單體）的硬度以及能夠在真空被關(guān)閉時快速地閉合，閥由epdm制成。這幫助防止背壓和空氣夾帶，背壓和空氣夾帶（在硅樹脂閥的情況下）造成印跡保持器彎曲并導(dǎo)致不利的抗體聚集?？贵w聚集（不均勻覆蓋）導(dǎo)致最終印跡讀出上的不均勻信號，夾帶空氣附近的區(qū)域?qū)⒕哂腥跣盘枺：模┎⑶揖哂芯奂贵w的區(qū)域?qū)⒕哂袕?qiáng)信號（醒目的）。

如圖9和10中所示，根據(jù)某些實施例，歧管8是能夠被附接于適當(dāng)?shù)恼婵赵矗ㄎ词境觯┑恼婵掌绻?。歧?可以包括廢物收集設(shè)備（未示出），諸如位于歧管中的容器（未示出）以收集被拉動通過載體10的液體。

根據(jù)某些實施例，歧管8具有底座42，其具有排水溝和支撐表面44，一個或多個載體10被放置在支撐表面44上。支撐表面44包括一個或多個阱或載體接收區(qū)域55a、55b（在圖9中示出兩個），其可以包括接收載體底板13的底側(cè)以將載體10以穩(wěn)定方式保持在歧管8中的多個直立肋56。還示出了用于管理和監(jiān)視歧管8和該過程的任選的相應(yīng)控制機(jī)構(gòu)62。如果期望的話，該設(shè)備能夠與自動化液體搬運(yùn)器等一起使用。在歧管8被再分成一個或多個阱或載體接收區(qū)域的情況下，歧管能夠處理超過一個保持器，以并行操作載體與不同的印跡膜或一個印跡膜的子部分，通常用至少一種不同試劑來處理每個膜。歧管8可具有公共壓力源，或者可單獨(dú)地對每個站載體接收區(qū)域進(jìn)行壓力控制。

在另一實施例中，歧管具有找平腳，找平腳當(dāng)結(jié)合載體的一個實施例的一個或多個水平指示器來使用時允許歧管和載體在水平面中水平。在一個實施例中，歧管具有一系列腳，其能夠被沿著豎直方向調(diào)整，從而當(dāng)載體被附接于歧管時相對于載體上的（一個或多個）水平指示器使歧管水平。在另一實施例中，所述一系列腳具有螺釘，螺釘配合到歧管底部的螺紋部分中以允許腳被沿著豎直方向單獨(dú)地升高或下降。

在本文公開的實施例中可以使用各種方法。關(guān)鍵因素是它們均依賴于液體的真空或正壓驅(qū)動過濾以接近膜的大的內(nèi)表面區(qū)域，允許遍及整個深度的所有分子的3d相互作用而不是如過去發(fā)生的那樣在表面處的僅2d相互作用。在使用正壓的情況下，底座可以是可容納載體的封閉室，并且蓋11可變成壓力歧管以向載體的阱22施加壓力。

最簡單方法是使用本文所公開的實施例來執(zhí)行洗滌循環(huán)中的一個或多個。通常，每個洗滌循環(huán)由一個或多個洗滌步驟組成。一般地，每個循環(huán)使用2-5個步驟。

另一方法是在需要使液體移動穿過印跡膜的每個步驟中使用本文公開的實施例，諸如在抗體的培育之后或在洗滌步驟中。

在所有這些過程中，可使用適合于使（一種或多種）液體穿過設(shè)備并進(jìn)入歧管的任何驅(qū)動力。這可根據(jù)被選擇用于印跡的膜和所使用的歧管、過濾的期望速度、以及研究人員可用的真空或正壓源而變化。

一般地，可用真空可以在100和760mmhg（133毫巴和1013毫巴）之間改變。閥、壓力限制器等的使用還可以用來針對所使用的膜將真空保持在允許范圍內(nèi)。一個實施例的優(yōu)選真空歧管使用約100mmhg的真空。其他適當(dāng)?shù)恼婵掌绻馨ǖ幌抻诳蓮鸟R薩諸塞州billerica的millipore公司獲得的multiscreen?和multiscreen?hts真空歧管。

一般地，正壓由從約2psi至約15psi范圍內(nèi)的壓力下的空氣線路來供應(yīng)。閥、壓力限制器等的使用還可以用來針對所使用的膜將壓力保持在允許范圍內(nèi)。此類壓力系統(tǒng)包括但不限于可從馬薩諸塞州billerica的millipore公司獲得的amicon?攪拌單元設(shè)備和可從馬薩諸塞州hopkinton的caliperlifesciences公司獲得的正壓過濾單元。

為了使用根據(jù)本文公開的實施例的設(shè)備，人們簡單地獲取保持器，將其打開并將（一個或多個）印跡膜放置在表面中的一個上，使得當(dāng)設(shè)備在（一個或多個）膜周圍被閉合時，印跡膜的下表面鄰近于多孔支撐體且印跡膜的上表面鄰近于流量分配器，從而在印跡與流量分配器之間不具有氣泡。這兩個表面之間的氣泡能夠?qū)е聼o流量區(qū)域。印跡保持器然后被放置在載體內(nèi)，該載體然后被用閂鎖機(jī)構(gòu)牢固地閉合。該設(shè)備被放置在具有壓力源（真空或正壓）的歧管上或中。優(yōu)選地，（一個或多個）印跡膜已被預(yù)先潤濕。壓力（真空或正壓）被開啟并且諸如洗滌液或試劑的液體被放置在載體的阱中。該壓力持續(xù)直至液體已經(jīng)移動穿過該設(shè)備和（一個或多個）膜。然后壓力被關(guān)掉。

當(dāng)使用不止一個印跡膜時，能夠?qū)⑺鼈兇?lián)地相互重疊地布置，并且能夠容易地使包含相同期望試劑的足夠液體在一個過程步驟中移動穿過多個層。一般地，當(dāng)使用不止一個層時，優(yōu)選的是人們每次使用2層和10層之間，優(yōu)選地在2層和5層之間。

可在壓力源被關(guān)閉或壓力源僅被短暫地開啟的情況下添加液體，從而使液體進(jìn)入（一個或多個）膜并被允許進(jìn)行培育（諸如在一級或二級抗體的情況下可能要求的）。壓力然后被開啟以去除液體和/或用隨后使用的另一種液體將其替換。優(yōu)選地，在洗滌期間，真空被留在開啟狀態(tài)，并且隨后添加剩余洗液。

任選地，如果人們希望，人們可將收集器皿70放置在設(shè)備下面（圖9a），優(yōu)選地在歧管本身中或下游，諸如抗體收集托盤。其然后可被用來收集一種或多種未結(jié)合試劑，其可能昂貴且可被收集并再循環(huán)以供在未來試驗中使用。器皿還能夠被再分成多個室，多個室與印跡膜的相應(yīng)部分對準(zhǔn)并流體連通。

另外或替代地，人們可在保持器下面的下游流動路徑中放置吸收劑基質(zhì)，吸收劑基質(zhì)能夠可逆地結(jié)合昂貴的一種或多種未結(jié)合試劑。該基質(zhì)優(yōu)選地采取整塊的形式，諸如襯墊、插塞或紙片，其被定位成使得經(jīng)過印跡膜和保持器的所有液體均經(jīng)過基質(zhì)。其然后可被去除且試劑被洗提或者如果期望的話，其可在印跡膜的測試完成之后使結(jié)合的試劑就地被洗提。

還可以將其他過程與本文公開的實施例的設(shè)備一起使用。

該膜在其空隙中包含將要被檢測的一種或多種物質(zhì)。一般地，這些物質(zhì)由于被從用于電泳或色譜法的實心支撐體印跡或者被直接施加而存在于空隙中，通常以檢測特定類型材料的存在、不存在或量，諸如抗體或特定蛋白質(zhì)，即如上所述的dot-blot型試驗。然而，膜的定義不限于這些情況，而是適用于膜在其空隙中包含將要被檢測的一種或多種物質(zhì)的任何情況。在被設(shè)想供在本文公開的實施例中使用的膜類型中包括一般被用來對電泳凝膠進(jìn)行印跡的膜，諸如硝化纖維、尼龍或各種其他聚合膜，諸如聚偏二氟乙烯（pvdf），由馬薩諸塞州billerica的millipore公司作為immobilon?膜來出售。

多種材料可被用來復(fù)制在各種樣本上執(zhí)行的電泳凝膠的結(jié)果，如本領(lǐng)域中所理解的。最常見地，樣本包含諸如單獨(dú)蛋白質(zhì)、抗體、核酸、低聚核苷酸、復(fù)雜碳水化合物類等生物物質(zhì)，但是該技術(shù)的應(yīng)用不限于這些物質(zhì)。該技術(shù)可應(yīng)用于在其內(nèi)部包含將要被檢測的物質(zhì)的任何膜，無論膜或靶物質(zhì)的化學(xué)組成如何。

當(dāng)采用表示電泳結(jié)果的復(fù)制品的膜時，可通過利用包含傳輸緩沖劑的膜、通過電洗提或通過凝膠的干法印跡來執(zhí)行要檢測的物質(zhì)從凝膠到膜的傳遞。用于這些傳輸?shù)募夹g(shù)在本領(lǐng)域中是公知的，并且并不構(gòu)成本文公開的實施例的一部分。

將要被供應(yīng)的液體可以包含檢測試劑，或者可以簡單地被作為洗液來提供。檢測試劑的性質(zhì)當(dāng)然取決于將要被檢測的物質(zhì)。通常，通過抗原與抗體或其免疫反應(yīng)部分之間的免疫反應(yīng)來檢測蛋白質(zhì)；通常用適當(dāng)?shù)牡途酆塑账嵩嚇觼頇z測核酸片段的存在。如果需要，可以用標(biāo)簽來補(bǔ)充檢測負(fù)責(zé)與要檢測物質(zhì)的即刻或特定反應(yīng)的物質(zhì)，并且可能需要多次施加檢測試劑，例如，規(guī)程可以包括通過供應(yīng)用酶（例如，一般地，辣根過氧化物酶）標(biāo)記的抗體來檢測抗原，并且然后通過供應(yīng)用于此酶的基質(zhì)來檢測此結(jié)合。在添加試劑時，雖然并非優(yōu)選，但可以僅使用正壓施主基質(zhì)來使膜的此組分暴露達(dá)限定的時間段。

在室溫下執(zhí)行本文公開的實施例的方法是最方便的，但是也可使用升高的和較低的溫度。這可通過將設(shè)備、其周圍環(huán)境（如在熱箱或冷卻箱中）或系統(tǒng)中使用的液體加熱來實現(xiàn)。

隨后可通過將先前結(jié)合的抗體從印跡剝離然后用抗體或其他試樣特定其他靶蛋白質(zhì)進(jìn)行后續(xù)培育而在本發(fā)明的設(shè)備和過程中用多個抗體或試樣來分析印跡。該剝離過程使抗原－抗體鍵斷裂，并且使抗體溶解在周圍緩沖劑中。這通常通過清潔劑與熱量的組合或通過暴露于高或低ph來實現(xiàn)。該設(shè)備與流量分配器組合使得能夠使用高或低ph方法來實現(xiàn)印跡的剝離。直接地（例如，使用與用于剝離的相同流量分配器）或隨后在儲存之后的印跡的后續(xù)重新探測可使用與初始探測相同的規(guī)程。用于條印跡的適當(dāng)工具套裝可在商標(biāo)名稱reblot?pluskit（種類#2500）、reblotplus-mildsolution（種類#2502）和reblotplus-strongsolution（種類#2504）下從chemiconinternational公司獲得。

在標(biāo)準(zhǔn)西式印跡法中，抗原或靶被傳輸?shù)侥ぶ误w，并用適當(dāng)?shù)脑嚇觼硖綔y，諸如抗體、蛋白質(zhì)（例如，蛋白質(zhì)a）或血凝素（蛋白質(zhì)或糖蛋白，其結(jié)合到碳水化合物部分）。在某些應(yīng)用中，使用反向格式（例如，反向陣列），其中，抗體或其他試樣被放置到膜或其他支撐體上（通常以陣列格式），并且抗原或靶被呈現(xiàn)給陣列上的固定抗體?？赏ㄟ^抗原或靶的標(biāo)記或通過使用該靶所特定的二級抗體來實現(xiàn)靶－試樣結(jié)合事件的可視化。反向陣列常常采用靶的混合物，例如用不同的熒光色標(biāo)記以使得能夠?qū)崿F(xiàn)并行處理的溶解產(chǎn)物。還可用本文公開的實施例來執(zhí)行反向試驗。