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一種快速顯示橡膠樹樹皮乳管的組織化學方法與流程

文檔序號:12118019閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種快速顯示橡膠樹樹皮乳管的組織方法,包括如下步驟:

a)將橡膠樹樹皮修切成長0.5cm×寬0.5cm的切片組織塊,置于盛有固定液的離心管中;

b)打開離心管蓋子,放入連接真空泵的玻璃干燥器中,抽氣1-2min;

c)換新鮮的固定液,在室溫條件下固定4-6h后,用緩沖液浸洗3次,每次30min;

d)將步驟c)中的材料從固定液過渡到不同濃度梯度的保護劑中;

e)將步驟d)中最高濃度保護劑中的材料,用OCT包埋劑中包埋,置于-20℃冷凍臺,冷凝20分鐘;

f)取出步驟e)中的材料,按常規(guī)冰凍切片方法進行切片;

g)用室溫的普通載玻片粘取切片;

h)用封片劑封片,熒光顯微鏡觀察。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法,其中,步驟a)中,所述橡膠樹樹皮指用單面刀片從橡膠樹萌條上縱向切割的帶有部分木質部的樹皮;所述切片組織塊的兩端平切。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法,其中,步驟b)中,所述固定液是4wt%多聚甲醛和2.5wt%戊二醛的0.01M的pH 7.2磷酸緩沖液。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法,其中,步驟c)中,所述緩沖液具體為0.01M的pH 7.2磷酸緩沖液。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法,其中,步驟d)中,所述不同濃度梯度的保護劑選自2wt%蔗糖水溶液、6wt%蔗糖水溶液、10wt%蔗糖水溶液、12wt%蔗糖水溶液、14wt%蔗糖水溶液、16wt%蔗糖水溶液和20wt%蔗糖水溶液的任意三種或三種以上。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法,其中,步驟e)中,所述冷凍臺溫度為-18至-22℃;所述冷凝時間為15-30min。

7.根據(jù)權利要求1所述的方法,其中,步驟h)中,所述封片劑為甘油選自5wt%甘油水溶液。

8.根據(jù)權利要求1-7中任一所述的方法,其中,所述橡膠樹為1-3年生的幼樹。

9.根據(jù)權利要求1-7中任一所述的方法,其中,在熒光顯微鏡的白光下觀察,乳管中的物質棕褐色;在熒光顯微鏡的488nm藍光激發(fā)下,乳管中的物質呈綠色。

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