本發(fā)明涉及一種用于檢測胃泌素17(G-17)的試劑盒，具體涉及一種基于化學(xué)發(fā)光法檢測胃泌素17的試劑盒。
背景技術(shù)：
：胃泌素是一種重要胃腸激素，最早是EdkinsJS等人發(fā)現(xiàn)并且命名。隨后，DockrayGJ等人研究發(fā)現(xiàn)胃泌素基因定位于17號染色體的長臂，全長為4.1kb，能夠編碼101個氨基酸殘基組成的多肽-胃泌素原。胃泌素原經(jīng)過一系列的加工和修飾從而形成了具有生物活性的成熟多肽。胃泌素的合成經(jīng)歷了胃泌素原、甘氨酸延伸型胃泌素和成熟胃泌素三個階段，前兩種胃泌素作為胃泌素合成及加工的中間產(chǎn)物，是未酰胺化的胃泌素，而成熟的胃泌素是酰胺化的胃泌素，羧基端的酰胺化是胃泌素家族成員發(fā)揮其生物活性所必需的。胃泌素有多種亞型，包括胃泌素34、胃泌素71、胃泌素52、胃泌素14、胃泌素17等，在人體中含量最多(約90％)且作用最為重要的是胃泌素17。胃泌素由存在于胃幽門部粘膜的G細胞(gastrincontainingcell)分泌，進入血中再作用于胃，促進胃液分泌。G細胞主要分布在胃竇部，十二指腸和空腸上段粘膜內(nèi)也有少量G細胞。胃的幽門竇受到食物等的機械性刺激，幽門部的pH偏堿性時就進行胃泌素的分泌。其結(jié)果，胃液特別是鹽酸的分泌變得旺盛，而當(dāng)胃內(nèi)部的pH降低時鹽酸和胃泌素的分泌就停止。此外，胃泌素也具有促進胃蛋白酶分泌、胰液分泌、膽液分泌、胰島素分泌等的作用。胃竇粘膜內(nèi)的胃泌素主要是G-17，十二指腸粘膜中有G-17和G-34約各占一半。從生物效應(yīng)來看，G-17刺激胃分泌的作用要比G-34強5-6倍，G-34在體內(nèi)被清除的速度很慢(半衰期約為50min)，G-17的半衰期通常只有6min。G-17為由17個氨基酸殘基組成的多肽，有兩種(胃泌素Ⅰ和Ⅱ)：一種酪氨酸殘基進行了硫酸基取代，一種未進行所述取代，兩者在生理活性上并沒有差異。對各種哺乳動物的G-17的一級結(jié)構(gòu)的研究表明，均為17個氨基酸組成，僅在自氨末端的第5位和第10位的氨基酸殘基因動物而異。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測胃泌素17的試劑盒。本發(fā)明提供了一種用于檢測人胃泌素17的試劑盒(試劑盒甲)，包括組件1和組件2；所述組件1為包被有G-17-BSA的微孔板；所述G-17-BSA為多肽，自N末端至C末端依次含有如下兩個區(qū)段：G-17多肽和牛血清白蛋白成熟肽；所述G-17多肽為：在序列表的序列1所示多肽的N末端第一個氨基酸殘基末端連接一個焦谷氨酸得到的多肽；所述組件2為酶結(jié)合物溶液；所述酶結(jié)合物溶液中含有HRP標(biāo)記的小鼠抗G-17單克隆抗體。所述G-17-BSA具體可為將G-17多肽的C末端與牛血清白蛋白成熟肽的N末端連接形成的多肽。牛血清白蛋白成熟肽具體可如序列表的序列2所示。所述酶結(jié)合物溶液中還含有酪蛋白、Proclin-300和BSA。所述酶結(jié)合物溶液由溶質(zhì)和溶劑組成；所述溶劑為pH7.4、0.02M的PBS緩沖液；所述溶質(zhì)及其在酶結(jié)合物溶液中的濃度如下：HRP標(biāo)記的小鼠抗G-17單克隆抗體的體積百分含量為0.02％、酪蛋白0.1g/100ml、Proclin-300的體積百分含量為0.02％、BSA2g/100ml。所述包被有G-17-BSA的微孔板的制備方法如下：(1)用pH9.6、0.05mol/L的CB緩沖液稀釋G-17-BSA，得到蛋白濃度為2μg/ml的包被液；(2)取微孔板，每孔加入100μl步驟(1)制備的包被液，2-8℃靜置18-24h，然后棄除孔內(nèi)液體；(3)完成步驟(2)后，取所述微孔板，每孔加入200μl封閉液，2-8℃靜置18-24h，然后棄除孔內(nèi)液體；封閉液由溶質(zhì)和溶劑組成；所述溶劑為pH7.4、0.02M的PBS緩沖液；所述溶質(zhì)及其在封閉液中的濃度如下：蔗糖8g/100ml、BSA0.5g/100ml、酪蛋白0.5g/100ml；(4)完成步驟(3)后，取所述微孔板，在20-30℃、濕度<40％的環(huán)境中干燥18-24h。所述試劑盒中還包括組件3和\或組件4和\或組件5。所述組件3為20×濃縮洗液；20×濃縮洗液由溶質(zhì)和溶劑組成；溶劑為pH7.4、0.2mol/L的PBS緩沖液；所述溶質(zhì)及其在20×濃縮洗液中的濃度如下：Tween20的體積百分含量為1％。所述組件4為發(fā)光液A和發(fā)光液B；發(fā)光液A由溶質(zhì)和溶劑組成；所述溶劑為pH8.0、0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液；所述溶質(zhì)及其在發(fā)光液A中的濃度如下：魯米諾3mg/ml、對碘苯酚0.25mg/ml、四苯硼鈉0.5mg/ml；發(fā)光液B由溶質(zhì)和溶劑組成；所述溶劑為pH8.0、0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液；所述溶質(zhì)及其在發(fā)光液B中的濃度如下：過氧化脲0.5mg/ml。所述組件5為G-17標(biāo)準(zhǔn)品溶液；G-17標(biāo)準(zhǔn)品溶液由S0溶液、S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液和S5溶液組成；S0溶液為含1g/100mlBSA和體積百分含量為0.02％的Proclin-300的pH7.4、0.02M的PBS緩沖液；S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液和S5溶液均為含G-17、1g/100mlBSA和體積百分含量為0.02％的Proclin-300的pH7.4、0.02M的PBS緩沖液；S1溶液中，G-17的濃度為20pg/ml；S2溶液中，G-17的濃度為100pg/ml；S3溶液中，G-17的濃度為200pg/ml；S4溶液中，G-17的濃度為500pg/ml；S5溶液中，G-17的濃度為1000pg/ml。所述試劑盒還包括記載有如下操作方法的載體：(1)制作標(biāo)準(zhǔn)方程①取包被有G-17-BSA的微孔板，每孔加入50μlG-17標(biāo)準(zhǔn)品溶液和100μl酶結(jié)合物溶液，振蕩混勻，然后37℃靜置60分鐘；②完成步驟①后，用洗滌液洗滌5遍，扣干；所述洗滌液為用蒸餾水或去離子水將20×濃縮洗液稀釋至20倍體積得到的溶液；③完成步驟②后，每孔加入50μl發(fā)光液A和50μl發(fā)光液B，振蕩混勻，然后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上檢測發(fā)光值；使用log-logit線性擬合方式進行數(shù)據(jù)處理，制作標(biāo)準(zhǔn)方程：ln[百分結(jié)合率/(1-百分結(jié)合率)]＝Blog10濃度+A；A、B為直線參數(shù)；S1溶液至S5溶液中任一溶液對應(yīng)的發(fā)光值除以S0溶液對應(yīng)的發(fā)光值，為百分結(jié)合率；(2)檢測待測溶液待測溶液為待測液體樣本、待測液體樣本的稀釋液或待測固體樣本的溶解液；①取包被有G-17-BSA的微孔板，每孔加入50μl待測溶液和100μl酶結(jié)合物溶液，振蕩混勻，然后37℃靜置60分鐘；②完成步驟①后，用洗滌液洗滌5遍，扣干；③完成步驟②后，后，每孔加入50μl發(fā)光液A和50μl發(fā)光液B，振蕩混勻，然后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上檢測發(fā)光值；根據(jù)步驟(1)得到的標(biāo)準(zhǔn)方程，計算待測溶液中的人胃泌素17濃度。本發(fā)明還保護一種用于檢測人胃泌素17的試劑盒(試劑盒乙)，包括所述G-17-BSA和所述小鼠抗G-17單克隆抗體。本發(fā)明還保護一種輔助診斷待測者是否患有發(fā)生胃體萎縮的慢性胃炎或發(fā)生胃竇萎縮的慢性胃炎的試劑盒(試劑盒丙)，包括以上任一所述的試劑盒甲或試劑盒乙。所述試劑盒丙還包括記載有如下判斷標(biāo)準(zhǔn)的載體：如果血清中胃泌素17的濃度高于120pg/ml，待測者疑似患有發(fā)生胃體萎縮的慢性胃炎；如果血清中胃泌素17的濃度低于40pg/ml，待測者疑似患有發(fā)生胃竇萎縮的慢性胃炎；如果血清中胃泌素17的濃度為50-100pg/ml，待測者疑似不患有發(fā)生胃體萎縮的慢性胃炎且不患有發(fā)生胃竇萎縮的慢性胃炎。本發(fā)明還保護一種酶結(jié)合物溶液，由溶質(zhì)和溶劑組成；所述溶劑為pH7.4、0.02M的PBS緩沖液；所述溶質(zhì)及其在酶結(jié)合物溶液中的濃度如下：HRP標(biāo)記的小鼠抗G-17單克隆抗體的體積百分含量為0.02％、酪蛋白0.1g/100ml、Proclin-300的體積百分含量為0.02％、BSA2g/100ml。HRP標(biāo)記的小鼠抗G-17單克隆抗體的制備方法：將小鼠抗G-17單克隆抗體進行HRP標(biāo)記,然后將體積調(diào)整為小鼠抗G-17單克隆抗體的初始體積(也就是說，每1ml小鼠抗G-17單克隆抗體得到1mlHRP標(biāo)記的小鼠抗G-17單克隆抗體)。小鼠抗G-17單克隆抗體具體可為：Biorbyt公司的貨號為orb302695的Gastrin-17antibody。人胃泌素17具體可為在序列表的序列1所示多肽的N末端第一個氨基酸殘基末端連接一個焦谷氨酸得到的多肽。本發(fā)明提供的試劑盒可定量測定人血清樣本中的胃泌素17的濃度，具有高敏感性、高特異性、操作方便的特點，從各項性能指標(biāo)和臨床試驗的結(jié)果來看，試劑盒適用于臨床常規(guī)檢測。本發(fā)明提供的試劑盒可用于檢測人血液樣本中的胃泌素17(gastrin-17)的含量，從而可用于評估或預(yù)測胃粘膜狀態(tài)或狀況，診斷萎縮性胃炎高危人群的篩查，從而可用于評價消化道系統(tǒng)生理病理狀態(tài)。具體實施方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。BSA即牛血清白蛋白。小鼠抗G-17單克隆抗體(Gastrin-17antibody)：Biorbyt公司，貨號orb302695。G-17：人工合成G-17多肽(人胃泌素17)，序列如下：Glp-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe(焦谷氨酸-甘氨酸-脯氨酸-色氨酸-亮氨酸-谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸-丙氨酸-酪氨酸-甘氨酸-色氨酸-甲硫氨酸-天冬氨酸—苯丙氨酸)。G-17多肽為：在序列表的序列1所示多肽的N末端第一個氨基酸殘基末端連接一個焦谷氨酸得到的多肽。G-17-BSA：人工合成G-17-BSA多肽。G-17-BSA多肽為將G-17多肽的C末端與BSA的N末端連接形成的多肽。BSA如序列表的序列2所示。胃蛋白酶原(PGⅠ)：Fitzgerald公司，貨號30R-AP038。胃蛋白酶原(PGⅡ)：Fitzgerald公司，貨號30R-AP039。實施例1、試劑盒的制備一、試劑盒組件的制備1、包被有G-17-BSA的微孔板。包被有G-17-BSA的微孔板的制備方法如下：(1)用pH9.6、0.05mol/L的CB緩沖液稀釋G-17-BSA，得到蛋白濃度為2μg/ml的包被液。(2)取微孔板，每孔加入100μl步驟(1)制備的包被液，2-8℃靜置18-24h，然后棄除孔內(nèi)液體。(3)完成步驟(2)后，取所述微孔板，每孔加入200μl封閉液，2-8℃靜置18-24h，然后棄除孔內(nèi)液體。封閉液：溶劑為pH7.4、0.02M的PBS緩沖液；溶質(zhì)及其在封閉液中的濃度如下：蔗糖8g/100ml、BSA0.5g/100ml、酪蛋白0.5g/100ml。(4)完成步驟(3)后，取所述微孔板，在20-30℃、濕度<40％的環(huán)境中干燥18-24h。(5)每個鋁箔袋放入一個完成步驟(4)的微孔板和一包干燥劑，進行真空密封包裝。2、酶結(jié)合物溶液：溶劑為pH7.4、0.02M的PBS緩沖液；溶質(zhì)及其在酶結(jié)合物溶液中的濃度如下：HRP標(biāo)記的小鼠抗G-17單克隆抗體0.02％(體積百分含量)、酪蛋白0.1g/100ml、Proclin-3000.02％(體積百分含量)、BSA2g/100ml。HRP標(biāo)記的小鼠抗G-17單克隆抗體的制備方法：將小鼠抗G-17單克隆抗體按照常規(guī)方法進行HRP標(biāo)記,然后將體積調(diào)整為小鼠抗G-17單克隆抗體的初始體積(也就是說，每1ml小鼠抗G-17單克隆抗體得到1mlHRP標(biāo)記的小鼠抗G-17單克隆抗體)。3、G-17標(biāo)準(zhǔn)品溶液(S0溶液-S5溶液)。S0溶液為含1g/100mlBSA和0.02％(體積百分含量)Proclin-300的pH7.4、0.02M的PBS緩沖液。S1溶液至S5溶液為含G-17、1g/100mlBSA和0.02％(體積百分含量)Proclin-300的pH7.4、0.02M的PBS緩沖液。S1溶液中，G-17的濃度為20pg/ml。S2溶液中，G-17的濃度為100pg/ml。S3溶液中，G-17的濃度為200pg/ml。S4溶液中，G-17的濃度為500pg/ml。S5溶液中，G-17的濃度為1000pg/ml。4、20×濃縮洗液：溶劑為pH7.4、0.2mol/L的PBS緩沖液；溶質(zhì)及其在20×濃縮洗液中的濃度如下：Tween201％(體積百分含量)。5、發(fā)光液A：溶劑為pH8.0、0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液；溶質(zhì)及其在發(fā)光液A中的濃度如下：魯米諾3mg/ml、對碘苯酚0.25mg/ml、四苯硼鈉0.5mg/ml。6、發(fā)光液B：溶劑為pH8.0、0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液；溶質(zhì)及其在發(fā)光液B中的濃度如下：過氧化脲0.5mg/ml。二、試劑盒的制備試劑盒的組件見表1。表1包被有G-17-BSA的微孔板孔陣列：12×8酶結(jié)合物溶液12ml×1瓶G-17標(biāo)準(zhǔn)品溶液S0溶液-S5溶液：各1.0ml×1瓶20×濃縮洗液50ml×1瓶發(fā)光液A6ml×1瓶發(fā)光液B6ml×1瓶封板膜若干自封袋1個說明書1個試劑盒的保存條件：2-8℃。試劑盒的有效期：12個月。三、試劑盒的使用方法(即說明書記載的內(nèi)容)洗滌液的制備方法：用蒸餾水或去離子水將20×濃縮洗液稀釋至20倍體積。1、制作標(biāo)準(zhǔn)方程(1)取包被有G-17-BSA的微孔板，每孔加入50μlG-17標(biāo)準(zhǔn)品溶液和100μl酶結(jié)合物溶液，輕輕振蕩混勻，用封板膜封板，然后37℃靜置60分鐘。(2)完成步驟(1)后，用洗滌液充分洗滌5遍，扣干。(3)完成步驟(2)后，每孔加入50μl發(fā)光液A和50μl發(fā)光液B，輕輕振蕩混勻，然后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上測定發(fā)光值。使用log-logit線性擬合方式進行數(shù)據(jù)處理。方程式為:ln[百分結(jié)合率/(1-百分結(jié)合率)]＝Blog10(濃度)+A。A、B為直線參數(shù)。S1溶液至S5溶液中任一溶液對應(yīng)的發(fā)光值除以S0溶液對應(yīng)的發(fā)光值，為百分結(jié)合率。2、檢測待測溶液待測溶液可以為待測液體樣本(例如血清)、待測液體樣本的稀釋液、待測固體樣本的溶解液等。待測液體樣本為血清時，適用于新鮮血清樣本,靜脈采血后24小時內(nèi)分離。(1)取包被有G-17-BSA的微孔板，每孔加入50μl待測溶液和100μl酶結(jié)合物溶液，輕輕振蕩混勻，用封板膜封板，然后37℃靜置60分鐘。(2)完成步驟(1)后，用洗滌液充分洗滌5遍，扣干。(3)完成步驟(2)后，每孔加入50μl發(fā)光液A和50μl發(fā)光液B，輕輕振蕩混勻，然后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上測定發(fā)光值。根據(jù)步驟1得到的標(biāo)準(zhǔn)方程，計算待測溶液中的G-17濃度。四、試劑盒的工作原理用G-17-BSA包被微孔板制成固相，加入待測溶液和酶結(jié)合物，待測溶液中的G-17和包被在微孔板上的G-17-BSA與HRP標(biāo)記的小鼠抗G-17單克隆抗體競爭性結(jié)合，加入發(fā)光液，測定其發(fā)光值，根據(jù)校準(zhǔn)曲線即可算出待測溶液中胃泌素17的含量，發(fā)光值隨待測溶液中G-17濃度的增加而降低。實施例2、應(yīng)用實施例1制備的試劑盒檢測不同人群的血清中的胃泌素17含量208例正常人組成體檢組，為排除胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃泌素瘤、胃竇粘膜增生等胃病的健康者，且均為知情同意的志愿者。143例經(jīng)醫(yī)院確診的發(fā)生胃體萎縮的慢性胃炎患者組成胃體萎縮組，且均為知情同意的志愿者。168例經(jīng)醫(yī)院確診的發(fā)生胃竇萎縮的慢性胃炎患者組成胃竇萎縮組，且均為知情同意的志愿者。待測溶液為血清。采用實施例1制備的試劑盒并按實施例1中的試劑盒的使用方法進行操作。各組人群的血清中胃泌素17的濃度見表2?？山⑷缦螺o助診斷標(biāo)準(zhǔn)：如果血清中胃泌素17的濃度高于120pg/ml，待測者疑似患有發(fā)生胃體萎縮的慢性胃炎；如果血清中胃泌素17的濃度低于40pg/ml，待測者疑似患有發(fā)生胃竇萎縮的慢性胃炎；如果血清中胃泌素17的濃度為50-100pg/ml，待測者疑似不患有發(fā)生胃體萎縮的慢性胃炎且不患有發(fā)生胃竇萎縮的慢性胃炎。表2例數(shù)血清中胃泌素17的濃度(pg/ml)體檢組20871.00±17.26胃體萎縮組143267.21±103.46胃竇萎縮組16820.41±10.15實施例3、試劑盒的性能待測試劑盒為：實施例1制備的三個批次的試劑盒(批次一、批次二和批次三)。一、最低檢測限(1)取包被有G-17-BSA的微孔板，每孔加入50μlS0溶液和100μl酶結(jié)合物溶液，輕輕振蕩混勻，用封板膜封板，然后37℃靜置60分鐘。每個待測試劑盒，S0溶液設(shè)置20個復(fù)孔。(2)完成步驟(1)后，用洗滌液充分洗滌5遍，扣干。(3)完成步驟(2)后，每孔加入50μl發(fā)光液A和50μl發(fā)光液B，輕輕振蕩混勻，然后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上測定發(fā)光值。各孔的發(fā)光值見表3。使用log-logit線性擬合方式進行數(shù)據(jù)處理。計算20孔S0溶液相應(yīng)的發(fā)光值的平均值(Mean)和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，由擬合方程計算出發(fā)光值為Mean-2×SD時的濃度值為最低檢測限。三個批次的試劑盒的最低檢測限均在15pg/ml以下。表3二、分析特異性在人血液中容易對G-17的檢測造成干擾的物質(zhì)主要有胃蛋白酶原(PGⅠ)和胃蛋白酶原(PGⅡ)。(1)取包被有G-17-BSA的微孔板，每孔加入50μl特定溶液和100μl酶結(jié)合物溶液，輕輕振蕩混勻，用封板膜封板，然后37℃靜置60分鐘。特定溶液為S0溶液、S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液、S5溶液、PGⅠ溶液或PGⅡ溶液。PGⅠ溶液的制備方法：將PGⅠ溶于pH7.4、0.02M的PBS緩沖液，得到濃度為200ng/ml的PGⅠ溶液。PGⅡ的制備方法：將PGⅡ溶于pH7.4、0.02M的PBS緩沖液，得到濃度為50ng/ml的PGⅡ溶液。每個待測試劑盒，每種特定溶液設(shè)置2個復(fù)孔。(2)完成步驟(1)后，用洗滌液充分洗滌5遍，扣干。(3)完成步驟(2)后，每孔加入50μl發(fā)光液A和50μl發(fā)光液B，然后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上測定發(fā)光值。各孔的發(fā)光值見表4。表4使用log-logit線性擬合方式進行數(shù)據(jù)處理。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算PGⅠ溶液或PGⅡ溶液對應(yīng)的發(fā)光值對應(yīng)的G-17濃度，即為PGⅠ或PGⅡ的交叉反應(yīng)值。結(jié)果見表5。結(jié)果表明，試劑盒與PGⅠ或PGⅡ的交叉反應(yīng)值均低于15pg/ml，不會對G-17的檢測造成干擾。表5交叉反應(yīng)值(pg/ml)批次一批次二批次三PGⅠ2.0611.567.88PGⅡ5.7611.917.64三、重復(fù)性和批間差重復(fù)性是用同一批試劑盒重復(fù)測定一份樣本得到的變異系數(shù)(CV)，每個質(zhì)控品需在一塊板內(nèi)隨機做10孔精密性測定，計算測定結(jié)果的平均濃度(Mean)與標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，批內(nèi)變異系數(shù)(CV)＝SD/Mean×100％。批間差是不同批次試劑盒間的重復(fù)性，隨機抽取三批試劑試劑盒，用這些試劑盒測定質(zhì)控品3次，計算測定結(jié)果的平均濃度(Mean)與標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，批間變異系數(shù)(CV)＝SD/Mean×100％。質(zhì)控品為G-17多肽。(1)取包被有G-17-BSA的微孔板，每孔加入50μl特定溶液和100μl酶結(jié)合物溶液，輕輕振蕩混勻，用封板膜封板，然后37℃靜置60分鐘。特定溶液為特定溶液甲或特定溶液乙。特定溶液甲為S0溶液、S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液或S5溶液。每個待測試劑盒，每種特定溶液甲設(shè)置2個復(fù)孔。特定溶液乙為不同濃度的質(zhì)控品溶液。質(zhì)控品溶液的制備方法：將質(zhì)控品溶于pH7.4、0.02M的PBS緩沖液，得到100pg/ml的低濃度質(zhì)控品溶液(Qc1)和500pg/ml的高濃度質(zhì)控品溶液(Qc2)。每個待測試劑盒，每種特定溶液乙設(shè)置10個復(fù)孔。(2)完成步驟(1)后，用洗滌液充分洗滌5遍，扣干。(3)完成步驟(2)后，每孔加入50μl發(fā)光液A和50μl發(fā)光液B，輕輕振蕩混勻，然后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上測定發(fā)光值。采用特定溶液甲時，各孔的發(fā)光值見表6。表6采用特定溶液乙時，各孔的發(fā)光值見表7。表7使用log-logit線性擬合方式進行數(shù)據(jù)處理。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算特定溶液乙中的G-17濃度。結(jié)果見表8。三個批次的試劑盒測定高濃度和低濃度兩個質(zhì)控，批內(nèi)變異系數(shù)都小于10％，表明試劑盒的均一性良好，結(jié)果具有重復(fù)性。綜合三批試劑盒兩種包裝規(guī)格測定高濃度和低濃度兩個質(zhì)控品的結(jié)果，批間變異系數(shù)小于15％，表明不同批次的試劑盒之間變異很小，測量結(jié)果具有重復(fù)性。表8綜上所述，本發(fā)明提供的試劑盒的主要性能指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)如下：最低檢測限：不高于15pg/ml；分析特異性：PGⅠ(200ng/ml)、PGⅡ(50ng/ml)交叉反應(yīng)值不大于15pg/ml；重復(fù)性：批內(nèi)變異系數(shù)不高于10％；批間差：批間變異系數(shù)不高于15.0％。當(dāng)前第1頁1 2 3