本發(fā)明涉及分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種簡便、快速、同時檢測飲料中非法添加的十種色素的方法。

背景技術(shù)：

食品摻假問題屢有發(fā)生，目前食品摻假問題是僅次于微生物污染的第二大食品問題。目前食品市場使用的調(diào)色劑多是人工合成色素，因其具有價格低廉、著色力強、穩(wěn)定性好等特點，常被替代天然色素用于食品調(diào)色。在飲料加工中，合成色素的使用十分普遍，違法使用非食用色素的現(xiàn)象也是屢見不鮮。一些不法商販為了牟取暴利、降低成本，私自添加人工合成色素。大量的研究報告指出，幾乎所有的合成色素都不能向人體提供營養(yǎng)物質(zhì)，某些合成色素甚至?xí)：θ梭w健康，導(dǎo)致生育力下降、畸胎、致癌等。

針對上述飲料中人工色素添加的現(xiàn)象，目前常用檢測方法主要有：(1)高效液相色譜法(hplc)及其相應(yīng)聯(lián)用技術(shù)、(2)高效毛細管電泳法(hpec)、(3)分光光度法等。綜合比較這些方法，hplc法精密準確，但前處理過程復(fù)雜，分析周期長，檢測成本較高，難以實現(xiàn)現(xiàn)場普及；hpec法簡便、快速、高效、試劑消耗少，但重現(xiàn)性差，所建方法難以在實際應(yīng)用中普及；分光光度法儀器簡單，費用低，易于推廣，但多種色素共存時難以同時檢測，而且數(shù)據(jù)處理方法十分復(fù)雜，業(yè)內(nèi)接受程度低。

縱觀上述傳統(tǒng)方法，并結(jié)合現(xiàn)場快檢的實際需求，用于飲料中人工合成色素非法添加快速檢測的方法應(yīng)當(dāng)具備專屬性強、靈敏度高、簡便、快速、能同時檢測多種非法添加色素等優(yōu)點。近年來，表面增強拉曼光譜法(sers)因其快速、靈敏等優(yōu)勢已在分析檢測領(lǐng)域得到越來越多的應(yīng)用，邵勇等采用sers法實現(xiàn)了飲料中堿性嫩黃o的檢測(邵勇，陳勇，鄭艷，齊小花，鄒明強，張孝芳，楊玲輝.表面增強拉曼散射法快速檢測飲料中堿性嫩黃o^*.食品與發(fā)酵工業(yè)，2015.41(10)：160-176)。然而由于該技術(shù)只具有特征檢測功能，對飲料中多種色素的同時檢測存在較大難度。薄層色譜-表面增強拉曼光譜法(tlc-sers)將tlc法與sers法聯(lián)用，先通過tlc實現(xiàn)飲料復(fù)雜體系的簡單分離，再利用sers實現(xiàn)待檢成分的定性鑒別，兩種方法互相補充，經(jīng)濟、快速、簡便、靈敏度高、專屬性強，具備了復(fù)雜體系快速分析的良好潛質(zhì)。

目前尚無利用tlc同時分離飲料中常見非法添加的多種色素的檢測方法，更沒有將tlc法與sers法聯(lián)用檢測色素的方法。利用此法進行飲料中非法添加色素的檢測時，受薄層色譜展開條件的限制，一般僅能同時對飲料中的少數(shù)幾種色素進行分離，當(dāng)添加色素的種類未知或種類較多時，一般的薄層色譜條件無法將其很好地分離開，也就無法對其進行進一步的sers檢測，導(dǎo)致色素漏檢、誤檢的情況發(fā)生，在某種程度上限制了該技術(shù)在飲料非法添加色素檢測領(lǐng)域中的推廣。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于解決上述問題，提供一種可快速同時檢測飲料非法添加十種色素的方法，用于飲料非法添加的分析及現(xiàn)場檢測。

本發(fā)明的第一方面，提供一種可快速同時檢測飲料非法添加十種色素的方法，包括以下步驟：

a、制備十種色素的標準品溶液、待檢飲料樣品溶液、以及納米增強基底溶液，所述的納米增強基底溶液包括有機相銀溶膠和水相銀溶膠；

b、將標準品溶液和待檢飲料樣品溶液分別點于薄層板上，以展開劑進行展開，展開劑中乙酸乙酯：正丁醇：乙醇：氨水：水的體積比為3±0.5：3±0.5：2±0.5：2.5：1，展開時間在30-35min，展開后，取出揮干，放置于日光燈或紫外燈(254nm/365nm)下檢視，標記樣品色譜條帶中與對照標準品溶液rf值相同的位置，滴加銀溶膠5μl；

c、用便攜式拉曼光譜儀對滴加銀溶膠的位置直接進行檢測，積分時間5～15s(優(yōu)選10s)，激光功率為100～300mw(優(yōu)選100mw)，將所得圖譜與對照標準品溶液的sers譜進行對比分析，得出結(jié)果。

若待檢飲料樣品中與某種色素對應(yīng)斑點處的表面增強拉曼光譜與對照標準品的表面增強拉曼光譜的主要特征峰一致，初步可以判定該待檢飲料樣品中含有此種色素。

步驟a中所述的標準品溶液的制備：取酸性紅、誘惑紅、赤蘚紅、胭脂紅、莧菜紅、新紅、羅丹明對照品適量，加水-乙醇(1:1)溶解，分別制成每1mg/ml的溶液，作為標準品溶液備用；取日落黃、檸檬黃、亮藍對照品適量，加水溶解，分別制成每1mg/ml的溶液，作為標準品溶液備用。

步驟a中所述的待檢飲料樣品的前處理：稱取飲料樣品400ml置于500ml的燒杯中，對碳酸飲料加熱超聲除去二氧化碳。加入0.2g/ml的檸檬酸調(diào)節(jié)ph至6，加熱至60℃，加入5g的聚酰胺粉末，充分攪勻，以g3垂融玻璃漏斗抽濾，以60℃的ph為4的去離子水洗滌三次(100ml/每次)，然后再用甲醇-甲酸(3:2)洗滌三次(100ml/每次)再用水洗滌三次。用無水乙醇-氨水-水(7:2:1)溶解吸收3-5次(100ml/每次)。收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸干，在蒸干過程中每隔30min取樣一次，直至蒸干，將獲取的濃縮液進行薄層展開，確定出適宜檢測的最佳濃度。

步驟a中所述的有機相銀溶膠的制備：精密稱取8.5mgpvp(聚乙烯吡咯烷酮)、17mg的硝酸銀，溶于5ml水中，得質(zhì)量比為2:1的agno3/pvp混合溶液。量取50mldmf(n,n-二甲基甲酰胺)至250ml的三頸瓶中，加熱至微沸騰。迅速加入上述的agno3/pvp溶液并持續(xù)沸騰一段時間，自然冷卻至室溫后置于棕色瓶中避光低溫保存。

步驟a中所述的水相銀溶膠的制備：稱取36mg硝酸銀溶于5ml去離子水中，稱取100mg二水合檸檬酸鈉溶于10ml去離子水。將5ml硝酸銀溶液置于三頸瓶中加水190ml加熱至微沸后加入4ml檸檬酸鈉溶液，繼續(xù)加熱50-60min即可。

優(yōu)選的，步驟b中所述的薄層板選取的是默克薄層硅膠鋁板。

優(yōu)選的，步驟b中所述的展開劑中乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水的體積比為3:3:2:2.5:1，飽和時間為30min，展開時間為33min，日光燈或紫外燈(254nm/365nm)。

采用便攜式拉曼光譜儀進行檢測時，其積分時間和激光功率根據(jù)不同物質(zhì)需有所不同，針對本發(fā)明的飲料中色素的檢測，可采用的積分時間為5～15s，激光功率為100～300mw。拉曼光譜預(yù)處理方法包括譜段選取(300cm^-1-1700cm^-1)、基線校正(airpls法)、平滑(sgolay法)。

步驟c所述的便攜式拉曼光譜儀的型號為bws415-785h(美國必達泰克公司)，激發(fā)波長785nm，激光功率0～300mw。

本發(fā)明優(yōu)點在于：

本發(fā)明采用薄層色譜與表面增強拉曼光譜聯(lián)用法，通過大量、反復(fù)的實驗，摸索出了可快速同時將飲料中十種非法添加色素分離的色譜條件以及表面增強拉曼光譜的檢測條件，使得本發(fā)明提供的薄層色譜與表面增強拉曼聯(lián)用的條件適用于飲料中非法添加的檢測，并適用于這十種成分單個摻偽或多個同時非法添加的情況，避免了現(xiàn)有技術(shù)同時檢測多個非法添加成分時，需要分別對各個成分進行條件摸索的麻煩，且該方法操作簡單，適用于現(xiàn)場直接檢測，同時，本發(fā)明提供的分離及檢測條件具有簡便快捷、靈敏度高、專屬性強的優(yōu)點。

附圖說明

圖1為不同比例流動相(乙酸乙酯：正丁醇：乙醇：氨水：水)的薄層色譜圖，其中a為4:3:1:1:1，b為3:3:3:2:2，c為1:3:3:1:1，d為1:4:3:1:1，e為1:2:3:1:1，f為0.5:3:3:1:1，g為3:3:2:2.5:1，以上均在紫外燈254nm下檢視結(jié)果，h為3:3:2:2.5:1在日光燈下檢視結(jié)果。從左到右依次為：酸性紅、誘惑紅、赤蘚紅、胭脂紅、莧菜紅、新紅、羅丹明、亮藍、日落黃、檸檬黃)。

圖2為模擬陽性樣品中各色譜斑點及相應(yīng)對照品的sers檢測結(jié)果圖，其中1為日落黃標準品，2為檸檬黃標準品，3為胭脂紅標準品，5-a、5-b、5-c分別為模擬陽性樣品中對應(yīng)斑點。

圖3為模擬陽性飲料樣品的薄層色譜圖，其中1為日落黃標準品，2為檸檬黃標準品，3為胭脂紅標準品，4為陰性對照，5為模擬陽性飲料樣品。

圖4為模擬陽性樣品在的薄層色譜圖(左邊)及相應(yīng)sers檢測結(jié)果圖(右)，其中1為日落黃標準品，2為檸檬黃標準品，3為胭脂紅標準品，4為陰性對照，5為模擬陽性飲料樣品。

圖5為最優(yōu)流動相條件下模擬陽性樣品在紫外燈(254nm)下的薄層色譜圖。

圖6為模擬樣品(1)與真實樣品(2)中各斑點sers檢測結(jié)果圖。

圖7不同比例展開劑下的tlc結(jié)果：(a)4:3:1:1:1；(b)3:3:3:2:2；(c)1:3:3:1:1；(d)1:4:3:1:1；(e)1:2:3:1:1；(f)0.5:3:3:1:1；(g)3:3:2:2.5:1，以上均在日光燈下檢視；(h)3:3:2:2.5:1紫外燈254nm下檢視。

圖8模擬陽性樣品中十種色素的sers圖譜。

圖9樂虎飲料的tlc(a)及sers(b)結(jié)果。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的具體實施方式作詳細說明。

實施例1

實驗方法：

1.溶液的制備

標準品溶液的制備：取酸性紅、誘惑紅、赤蘚紅、胭脂紅、莧菜紅、新紅、羅丹明對照品適量，加水-乙醇(1：1)溶解，分別制成每1mg/ml的溶液，作為標準品溶液備用；取日落黃、檸檬黃、亮藍對照品適量，加水溶解，分別制成每1mg/ml的溶液，作為標準品溶液備用。

模擬陽性樣品溶液制備：取各種飲料溶液樣品(不含色素添加)適量，精密量取適量易添加色素標準品加入至飲料樣品中，作為模擬陽性樣品溶液備用。

納米銀膠溶液的制備

有機相銀溶膠的制備：精密稱取8.5mgpvp(聚乙烯吡咯烷酮)、17mg的硝酸銀，溶于5ml水中，得質(zhì)量比為2:1的agno3/pvp混合溶液。量取50mldmf(n,n-二甲基甲酰胺)至250ml的三頸瓶中，加熱至微沸騰。迅速加入上述的agno3/pvp溶液并持續(xù)沸騰一段時間，自然冷卻至室溫后置于棕色瓶中避光低溫保存。

水相銀溶膠的制備：稱取36mg硝酸銀溶于5ml去離子水中，稱取100mg二水合檸檬酸鈉溶于10ml去離子水。將5ml硝酸銀溶液置于三頸瓶中加水190ml加熱至微沸后加入4ml檸檬酸鈉溶液，繼續(xù)加熱50-60min即可。

單個非法添加成分標準品溶液的制備：精密稱量對照品色素溶于50％乙醇或水中，得到濃度分別為1mg/ml的十種色素的標準品溶液。

模擬陽性樣品溶液的制備：將十種摻偽成分的標準品混合后溶解于不含色素的飲料的基質(zhì)溶液中。

真實待檢飲料樣品的制備(前處理)：稱取飲料樣品400ml置于500ml的燒杯中，對碳酸飲料加熱超聲除去二氧化碳。加入0.2g/ml的檸檬酸調(diào)節(jié)ph至6，加熱至60℃，加入5g的聚酰胺粉末，充分攪勻，以g3垂融玻璃漏斗抽濾，以60℃的ph為4的去離子水洗滌三次(100ml/每次)，然后再用甲醇-甲酸(3:2)洗滌三次(100ml/每次)再用水洗滌三次。用無水乙醇-氨水-水(7：2：1)溶解吸收3-5次(100ml/每次)。收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸干，在蒸干過程中每隔30min取樣一次，直至蒸干，將獲取的濃縮液進行薄層展開，確定出適宜檢測的最佳濃度的真實樣品。

2.確定十種非法添加成分的薄層板展開條件

利用色素標準品溶液對十種色素的薄層展開條件進行詳細的摸索，本實驗對薄層展開的三個體系進行優(yōu)化和各個體系的各種展開比例也進行了優(yōu)化。對二氯甲烷-甲醇-氨水體系和正丁醇-乙醇-氨水體系的各個展開比例進行薄層考察。但在這兩種展開體系的各個比例下的分離效果始終不甚理想。而對乙酸乙醇-正丁醇-乙醇-氨水-水這個體系進行探究時發(fā)現(xiàn)經(jīng)過對不同的比例進行優(yōu)化之后十種色素完全分離，各個比例的展開效果如圖1所示：

3.確定模擬陽性樣品溶液中十種非法添加成分的表面增強拉曼光譜圖譜

將納米銀膠溶液滴加于上述薄層板的斑點處，依次利用便攜式拉曼光譜儀對各個斑點進行檢測，激發(fā)波長785nm，激光功率300mw，得到模擬陽性樣品中十種非法添加成分的表面增強拉曼光譜。

4.模擬陽性飲料樣品中非法添加成分的確定

將模擬陽性樣品溶液以及優(yōu)化出的真實飲料樣品溶液分別滴加于薄層板上，對薄層板上模擬陽性樣品中的非法添加成分的標準品以及飲料中與標準品比移值相同的點進行定位，定位位置記為待檢位點，并采集真實飲料樣品的表面增強拉曼光譜圖，和標準品的表面增強拉曼光譜進行對比后，確定飲料中的非法添加成分，結(jié)果表明十種非法添加成分別為：①胭脂紅；②誘惑紅；③酸性紅；④赤蘚紅；⑤新紅；⑥羅丹明；⑦莧菜紅；⑧日落黃；⑨檸檬黃；⑩亮藍。

將模擬陽性樣品溶液中十種非法添加成分的表面增強拉曼光譜圖譜和十種非法添加成分的表面增強拉曼光譜的圖譜庫進行比對的步驟對于建立十種非法添加成分的表面增強拉曼光譜圖譜庫，是將十種非法添加成分的標準品溶液分別點于薄層板上，得到各自的斑點，更具優(yōu)化出的最佳采集條件采集所述斑點處的拉曼光譜，分別得到十種標準品的表面增強拉曼光譜，建立十種非法添加成分的表面增強拉曼光譜的圖譜庫。將模擬陽性樣品中十種非法添加成分的表面增強拉曼光譜和十種非法添加成分的表面增強拉曼光譜圖譜庫進行比對，確定模擬陽性樣品溶液中十種非法添加成分的表面增強拉曼光譜圖譜。

實驗中薄層板選取的是默克薄層硅膠鋁板；展開劑中乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水(3:3:2:2.5:1)，飽和時間為30min，展開時間為30-35min，紫外燈波長為365nm。

便攜式拉曼光譜儀檢測時積分時間和激光強度為不同物質(zhì)不同。拉曼光譜預(yù)處理方法包括譜段選取(300cm^-1-1700cm^-1)、基線校正(airpls法)、平滑(sgolay法)。

所采用的便攜式拉曼光譜儀的型號為bws415-785h(美國必達泰克公司)，激發(fā)波長785nm。

假設(shè)飲料非法添加中含有日落黃、胭脂紅、檸檬黃，具體解釋快速同時飲料中非法添加色素的方法，步驟如下：

步驟一：配制基質(zhì)溶液、對照品溶液(日落黃、胭脂紅、檸檬黃的標準品溶液)及一般黃色飲料的模擬陽性樣品溶液，按照上述方法進行制備；

步驟二，日落黃、胭脂紅、檸檬黃標準品表面增強拉曼光譜圖譜的確定。將1mg/ml的日落黃、胭脂紅、檸檬黃標準品溶液點于薄層板上，得到斑點，再將5ul納米銀膠溶液滴加于斑點上，利用便攜式拉曼光譜儀對薄層板上的斑點進行檢測，日落黃、胭脂紅、檸檬黃的激光功率是300mw，積分時間10s，得到該對照品的表面增強拉曼光譜，具體如圖2所示。

步驟三：確定模擬陽性樣品溶液的薄層板展開條件

將基質(zhì)溶液、對照品溶液(日落黃、胭脂紅、檸檬黃標準品溶液)及模擬陽性樣品溶液，分別點于默克薄層硅膠鋁板上，根據(jù)展開劑：乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水(3:3:2:2.5:1)(體積比)進行展開，展開后，取出揮干，放置于紫外燈下檢視定位，具體如圖3所示。由圖可知，基質(zhì)溶液并未在薄層板上出現(xiàn)斑點，說明該飲料中的成分不會對非法添加的色素檢測產(chǎn)生影響。同時，在最優(yōu)的展開劑下，模擬陽性樣品中的十種摻非法添加色素可以完全分開，且模擬陽性樣品溶液中的日落黃、胭脂紅、檸檬黃斑點恰好和日落黃、胭脂紅、檸檬黃標準品的斑點一一對應(yīng)。

步驟四：表面增強拉曼光譜比對

用移液槍分別吸取納米銀膠溶液5μl滴加在薄層板上對照品日落黃、胭脂紅、檸檬黃斑點及模擬陽性樣品色譜條帶中與之相對應(yīng)的斑點處，依次利用便攜式拉曼光譜儀對各個斑點進行檢測，激發(fā)波長785nm，激光功率300mw，積分時間10s，得到日落黃、胭脂紅、檸檬黃對照品與模擬陽性樣品中與日落黃、胭脂紅、檸檬黃對應(yīng)斑點處的表面增強拉曼光譜圖譜，具體如圖4所示。

兩者圖譜進行對比，可以看出模擬陽性樣品中與日落黃、胭脂紅、檸檬黃對應(yīng)斑點處的表面增強拉曼光譜與對照品的表面增強拉曼光譜的主要特征峰一致，可以判定該方法的專屬性良好。

通過大量、反復(fù)的實驗，摸索出了最優(yōu)的色譜條件：以乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水(3:3:2:2.5:1)的混合溶液為展開劑，采用默克薄層硅膠鋁板，展開時間33min，可分離飲料中非法添加的十種色素；探索出表面增強拉曼光譜的檢測條件：激光功率和積分時間根據(jù)不同物質(zhì)有所不同，可對飲料中的十種非法添加色素進行定性鑒別。

實驗中確定了最優(yōu)的色譜條件和表面增強拉曼光譜的檢測條件，發(fā)明人通過實驗還發(fā)現(xiàn)只要乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水＝3±0.5:3±0.5:2±0.5:2.5:1的范圍內(nèi)，展開時間在30-35min的范圍內(nèi)，就可以實現(xiàn)10種摻偽成分的分離，但分離效果不如最優(yōu)色譜條件。

以檢測真實樣品為例，具體解釋快速同時檢飲料中十種非法添加色素的方法，包括以下步驟：

步驟一，制備待檢樣品溶液、模擬陽性樣品溶液以及納米銀膠溶液，依據(jù)前述方法進行制備。

步驟二：確定薄層板展開條件

將待檢樣品溶液、模擬陽性樣品溶液分別點于默克薄層硅膠鋁板上，根據(jù)展開劑：乙酸乙酯；正丁醇：乙醇：氨水：水(3:3:2:2.5:1)進行展開，展開后，取出揮干，放置于紫外燈下檢視定位，結(jié)果如圖5所示

步驟三：薄層色譜與表面增強拉曼光譜聯(lián)用法的檢測；

用移液槍分別吸取納米銀膠溶液5μl滴加在薄層板上模擬陽性樣品溶液中胭脂紅、日落黃、檸檬黃斑點處及真實飲料樣品色譜條帶中與胭脂紅、日落黃、檸檬黃對應(yīng)斑點處，依次利用便攜式拉曼光譜儀對各個斑點進行檢測，激光功率300mw，積分時間10s，得到模擬陽性樣品溶液中色素與真實樣品中與色素對應(yīng)斑點處的表面增強拉曼光譜圖譜，具體如圖6所示。

兩者圖譜進行對比，可以看出真實樣品中與胭脂紅、日落黃、檸檬黃對應(yīng)斑點處的表面增強拉曼光譜與對照品的表面增強拉曼光譜的主要特征峰一致，初步可以判定該真是飲料樣品中含有胭脂紅、日落黃、檸檬黃。

實施例2

一、實驗方法

1.溶液的制備

標準品溶液的制備：取酸性紅、誘惑紅、赤蘚紅、胭脂紅、莧菜紅、新紅、羅丹明對照品適量，加水-乙醇(1:1)溶解，分別制成每1mg/ml的溶液，作為標準品溶液備用；取日落黃、檸檬黃、亮藍對照品適量，加水溶解，分別制成每1mg/ml的溶液，作為標準品溶液備用。

模擬陽性樣品溶液制備：取各種飲料溶液樣品(不含色素添加)適量，精密量取適量易添加色素標準品加入至飲料樣品中，作為模擬陽性樣品溶液備用。

真實飲料樣品的制備(前處理)：稱取飲料樣品400ml置于500ml的燒杯中，對碳酸飲料加熱超聲除去二氧化碳。加入0.2g/ml的檸檬酸調(diào)節(jié)ph至6，加熱至60℃，加入5g的聚酰胺粉末，充分攪勻，以g3垂融玻璃漏斗抽濾，以60℃的ph為4的去離子水洗滌三次(100ml/每次)，然后再用甲醇-甲酸(3:2)洗滌三次(100ml/每次)再用水洗滌三次。用無水乙醇-氨水-水(7:2:1)溶解吸收3-5次(100ml/每次)。收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸干，在蒸干過程中每隔30min取樣一次，直至蒸干，將獲取的濃縮液進行薄層展開，確定出適宜檢測的最佳濃度的真實樣品。

2.納米增強基底的制備

有機相銀溶膠的制備：精密稱取8.5mgpvp(聚乙烯吡咯烷酮)、17mg的硝酸銀，溶于5ml水中，得質(zhì)量比為2:1的agno3/pvp混合溶液。量取50mldmf(n,n-二甲基甲酰胺)至250ml的三頸瓶中，加熱至微沸騰。迅速加入上述的agno3/pvp溶液并持續(xù)沸騰一段時間，自然冷卻至室溫后置于棕色瓶中避光低溫保存。

水相銀溶膠的制備：稱取36mg硝酸銀溶于5ml去離子水中，稱取100mg二水合檸檬酸鈉溶于10ml去離子水。將5ml硝酸銀溶液置于三頸瓶中加水190ml加熱至微沸后加入4ml檸檬酸鈉溶液，繼續(xù)加熱50-60min即可。

3.檢測方法

取標準品溶液和樣品溶液各1μl，點于同一硅膠板上，以適當(dāng)?shù)恼归_劑展開后取出，晾干，置于日光燈或紫外燈(254nm/365nm)下檢視，標記樣品色譜條帶中與對照品rf值相同的位置，滴加銀溶膠5μl，用便攜式拉曼光譜儀對滴加銀膠的位置直接進行檢測，積分時間10s，激光功率100mw，將所得圖譜與對照品的sers譜進行對比分析，得出結(jié)果。

4.數(shù)據(jù)預(yù)處理方法

采用matlab7.6軟件對所得光譜進行適當(dāng)預(yù)處理，如譜段選取(300-1700cm^-1)、平滑(sgolay法)、基線校正(airpls法)和歸一化(min-maxnormalization法)；作圖軟件使用origin8.0版。

二、實驗結(jié)果

1.薄層色譜條件的優(yōu)化

實驗中嘗試了多種不同極性的展開系統(tǒng)(如二氯甲烷-甲醇-氨水和正丁醇-乙醇-氨水)對十種色素的分離效果，均不理想。最終摸索出了乙酸乙醇-正丁醇-乙醇-氨水-水這一體系，并開展了一系列展開比例的優(yōu)化，最終確定了3:3:2:2.5:1為最佳比例，此時，各色素rf值分布較均勻。不同比列的展開效果如圖7所示(從左到右點樣順序依次為：酸性紅、誘惑紅、赤蘚紅、胭脂紅、莧菜紅、新紅、羅丹明、亮藍、日落黃、檸檬黃)。

2.模擬陽性樣品的tlc-sers檢測

采用選定的色譜條件對模擬陽性樣品進行薄層展開，得到如圖7g類似的rf值結(jié)果，在各對照品相應(yīng)位置滴加納米銀溶膠，并進行sers檢測，得到結(jié)果如圖8。十種色素的信號均較豐富，且模擬樣品中測得的圖譜與相應(yīng)對照品sers譜的相似度均在0.99以上，說明所建立的色譜條件具有較好的分離效果，能排除飲料基質(zhì)的影響，可用于飲料樣品的檢測。

3.真實飲料樣品的tlc-sers檢測

采用建立的tlc-sers方法對功能性飲料樂虎進行了檢測，所得結(jié)果如下圖9所示。由結(jié)果可知，樂虎飲料中含有檸檬黃和日落黃。

以上已對本發(fā)明創(chuàng)造的較佳實施例進行了具體說明，但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所述實施例，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不違背本發(fā)明創(chuàng)造精神的前提下還可做出種種的等同的變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。