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一種基于聚多巴胺復(fù)合膠囊標(biāo)記的凝血酶核酸適配體光電化學(xué)傳感器的制作方法

文檔序號(hào):12466394閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種基于聚多巴胺復(fù)合膠囊標(biāo)記的凝血酶核酸適配體光電化學(xué)傳感器,其特征在于,包括以下步驟:

(1)在聚多巴胺膠囊溶液中滴加1~3 mL的1 mol/L的硝酸鎘溶液,充分振蕩,離心除去上層清液,得到Cd2+@聚多巴胺復(fù)合膠囊;加入2 mL凝血酶核酸適配體溶液,在4°C恒溫振蕩箱中振蕩2~6 h,離心去除上清液,得到Cd2+@聚多巴胺復(fù)合膠囊標(biāo)記的凝血酶核酸適配體;加入2 mL的質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的牛血清白蛋白BSA溶液,常溫下振蕩1 h,離心除去上清液;再加入超純水2 mL,充分分散,得到Cd2+@聚多巴胺復(fù)合膠囊標(biāo)記的凝血酶核酸適配體溶液,4°C冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/p>

(2)將2.5×0.8 cm2的ITO電極依次浸沒在50°C的丙酮、水、乙醇和水中分別超聲清洗30 min,然后用高純氮?dú)獯蹈?;滴?0 μL的1~6 mg/mL的TiO2納米粒子懸浮液于ITO電極,用馬弗爐300~600°C煅燒后,得到TiO2納米粒子修飾的ITO電極,冷卻到室溫;

(3)在TiO2納米粒子修飾的ITO電極上,依次滴加6 μL的2~7 μmol/L凝血酶核酸適配體,質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的牛血清白蛋白,封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),超純水沖洗,4°C冰箱中晾干;

(4)滴加1×10-15~1×10-11 mol/L一系列不同濃度的凝血酶溶液,反應(yīng)30 min,超純水沖洗,4°C冰箱中晾干;

(5)滴加6 μL的Cd2+@聚多巴胺復(fù)合膠囊標(biāo)記的凝血酶核酸適配體溶液到電極表面,反應(yīng)20~40 min,超純水沖洗,4°C冰箱中晾干;

(6)滴加6 μL的0.1~1.0 mol/L的Na2S溶液,反應(yīng)10~30 min,用超純水沖洗,4°C冰箱中晾干,制備得到了一種基于聚多巴胺復(fù)合膠囊標(biāo)記的凝血酶核酸適配體光電化學(xué)傳感器。

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于聚多巴胺復(fù)合膠囊標(biāo)記的凝血酶核酸適配體光電化學(xué)傳感器,所述的聚多巴胺膠囊,其特征在于,包括以下步驟:

(1)將1~5 mL的質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為2.5%且直徑為300 nm的聚苯乙烯微球乙醇分散液加入到OP-10乳化劑中乳化5~15 min,然后分散到80 mL的10 mmol/L的pH 8.5三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中,超聲分散10 min;加入20~60 mg多巴胺,在室溫下磁力攪拌反應(yīng)2~48 h,離心分離,水洗三次,乙醇洗三次,得到聚多巴胺@聚苯乙烯微球,分散在乙醇中備用;

(2)將制備好的聚多巴胺@聚苯乙烯微球溶解分散到50~200 mL四氫呋喃中,磁力攪拌反應(yīng)6~48 h,離心分離,然后依次用四氫呋喃、乙醇和水分別離心洗滌三次,離心結(jié)束后除去上層清液,得到聚多巴胺膠囊,加超純水分散。

3.如權(quán)利要求1所述的一種基于聚多巴胺復(fù)合膠囊標(biāo)記的凝血酶核酸適配體光電化學(xué)傳感器,所述的TiO2納米粒子,其特征在于,包括以下步驟:

取0.01~0.03 mol原鈦酸四丁酯溶解在20~40 mL乙醇溶液中,然后在磁力攪拌下向上述溶液中逐滴滴加10 mL的超純水,30°C反應(yīng)60~180 min后,將懸濁液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯內(nèi)襯的高壓釜中,并保持在100~200°C條件下反應(yīng)2~24 h;收集所制備的沉淀物,并分別用無水乙醇和超純水徹底離心洗滌各三次,然后在50°C真空干燥箱中干燥24 h,研磨成粉末備用。

4.如權(quán)利要求1所述的一種基于聚多巴胺復(fù)合膠囊標(biāo)記的凝血酶核酸適配體光電化學(xué)傳感器用于凝血酶的檢測(cè)方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)采用三電極體系進(jìn)行檢測(cè),如權(quán)利要求1所制備的光電化學(xué)傳感器為工作電極,飽和甘汞電極為參比電極,鉑絲電極為輔助電極,利用光電化學(xué)工作站進(jìn)行檢測(cè),光電檢測(cè)采用i-t測(cè)試手段,偏壓設(shè)置為0 V,光源為白光,每隔10 s進(jìn)行開關(guān)燈;

(2)在10 mL含0.1 mol/L抗壞血酸的pH 7.4的PBS緩沖溶液中,通過光電化學(xué)工作站檢測(cè)1×10-15~1×10-11 mol/L一系列不同濃度的凝血酶標(biāo)準(zhǔn)溶液,通過記錄開關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同光電流信號(hào),繪制工作曲線;

(3)將待測(cè)樣品溶液代替凝血酶標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)的結(jié)果可通過工作曲線的查得。

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