本發(fā)明涉及抗生素殘留檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種檢測(cè)牛奶中磺胺類抗生素殘留的方法。

背景技術(shù)：

牛奶中抗生素殘留問(wèn)題在世界范圍內(nèi)一直沒(méi)有被徹底攻克，已成為行業(yè)發(fā)展以及食品安全的隱患之一。抗生素主要指能抑制或殺死其他微生物的一類化學(xué)物質(zhì)，如青霉素、四環(huán)素、金霉素、鏈霉素、氯霉素、磺胺類藥物等。在醫(yī)學(xué)上，抗生素被廣泛的應(yīng)用于預(yù)防和治療多種微生物感染性疾病以及某些癌癥。在奶業(yè)的源頭中，抗生素使用頻率很高，特別是治療牛乳房炎，常常大劑量反復(fù)使用。據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有十多種抗生素以一種或多種聯(lián)合的形式采用粉劑、涂擦劑、注射劑，以及乳導(dǎo)管注入等方式加以應(yīng)用，導(dǎo)致抗生素殘留相當(dāng)嚴(yán)重，在奶牛飼料中，也含有抗生素添加劑。

牛奶中不允許殘留抗生素，主要有兩個(gè)原因：第一，占人口一定比例的人對(duì)抗菌素尤其是青霉素過(guò)敏，人們長(zhǎng)期飲用或食用抗生素殘留的牛奶或奶制品，也就相當(dāng)于長(zhǎng)期低劑量的攝取抗生素，其危害性主要有：①使人體產(chǎn)生耐藥性，給今后患病使用抗生素治療帶來(lái)不良影響；②抗生素對(duì)過(guò)敏體質(zhì)的人會(huì)出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，危及健康；③破壞人體內(nèi)正常菌群的平衡狀態(tài)，使菌群失調(diào)，甚至造成二重感染，使重癥患者病情難以控制。

第二，發(fā)酵奶制品(酸奶和干酪)的生產(chǎn)依賴于乳酸菌的生長(zhǎng)，而乳酸菌的生長(zhǎng)受抗菌素的強(qiáng)烈抑制，常導(dǎo)致發(fā)酵失敗。

牛奶中存在的磺胺類抗生素屬于痕量物質(zhì)，發(fā)達(dá)國(guó)家多采用高效液相色譜儀-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行研究，但該方法成本相對(duì)較高，目前對(duì)殘留獸用磺胺類抗生素的檢測(cè)研究多在動(dòng)物性食品領(lǐng)域，在牛奶中的推廣使用有一定的局限性；也存在用微生物培養(yǎng)的方法檢測(cè)牛奶中磺胺類抗生素，但該方法耗時(shí)較長(zhǎng)，靈敏度也較差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種檢測(cè)牛奶中磺胺類抗生素殘留的方法，解決現(xiàn)有的方法成本相對(duì)較高、檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)的問(wèn)題。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種檢測(cè)牛奶中磺胺類抗生素殘留的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：將牛奶加入離心管中，加入酸溶液和氯化鈉，離心，離心后的上清液于雞心瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入體積比為3:1的乙腈和甲苯混合液，超聲溶解，得提取液；層析柱中加入無(wú)水硫酸鈉后，用體積比為3:1的乙腈和甲苯混合液進(jìn)行活化，加入提取液，用體積比為3:1的乙腈和甲苯混合液進(jìn)行淋洗，收集淋洗液于雞心瓶中備用，將雞心瓶中的淋洗液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，加入甲醇溶解超聲后，得預(yù)處理溶液；

(2)色譜測(cè)定：測(cè)定的色譜條件為：高效液相色譜儀；反相色譜柱；流速：0.6～1.0ml/min；溫度：室溫；SPD-20A紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm；流動(dòng)相：為0.5％的乙酸溶液：乙腈：0.005～0.03mol/L的鹽溶液＝80：35：50，進(jìn)樣量20μl；

(3)計(jì)算：取預(yù)處理溶液1ml置100ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取磺胺類抗生素對(duì)照品，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

其中，優(yōu)選地，所述鹽溶液采用乙酸銨、乙酸鈉、草酸銨、草酸鈉、氯化銨、亞硫酸銨溶液中的任意一種或多種。

其中，優(yōu)選地，所述磺胺類抗生素指磺胺甲基嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺鄰二甲氧嘧啶和磺胺喹惡啉中的一種。

其中，優(yōu)選地，所述離心轉(zhuǎn)速是1000～2500r/min，離心時(shí)間為5～10min。

其中，優(yōu)選地，所述酸溶液中的酸為乙酸、磷酸、鹽酸、硫酸、硝酸或鹽酸乙醇。

其中，優(yōu)選地，所述酸溶液的體積濃度為1～20％。

本發(fā)明的有益效果：

1.本發(fā)明在牛奶進(jìn)入液相檢測(cè)前進(jìn)行預(yù)處理，該預(yù)處理固相萃取效果好，凈化后基線穩(wěn)定，回收率高，又可以避免其它雜質(zhì)峰的干擾和重疊。

2.本發(fā)明利用磺胺類抗生素在高效液相色譜儀紫外檢測(cè)器270nm波長(zhǎng)下檢測(cè)效果最佳，通過(guò)對(duì)流動(dòng)相及各組分配比、流速、溫度等條件的優(yōu)化組合，確定目標(biāo)藥物的最佳檢測(cè)條件。

3.本發(fā)明所用的樣品量及各種試劑的用量少，對(duì)環(huán)境危害小，檢測(cè)速度快，準(zhǔn)確率高，操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的內(nèi)容僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例

本實(shí)施例提供一種牛奶中磺胺類抗生素殘留的檢測(cè)方法，本實(shí)施例在空白牛奶樣中分別加入磺胺甲基嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺鄰二甲氧嘧啶和磺胺喹惡啉，制得兩個(gè)混合奶樣，單個(gè)奶樣中四個(gè)藥物的濃度相同，一號(hào)奶樣中每種藥物的濃度分別為0.5μg/L，二號(hào)奶樣中每種藥物的濃度分別為2μg/L。

(1)預(yù)處理：將上述各牛奶樣分別加入離心管中，加入體積濃度為10％乙酸溶液和氯化鈉，離心，離心后的上清液于雞心瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入體積比為3:1的乙腈和甲苯混合液，超聲溶解，得提取液；層析柱中加入無(wú)水硫酸鈉后，用體積比為3:1的乙腈和甲苯混合液進(jìn)行活化，加入提取液，用體積比為3:1的乙腈和甲苯混合液進(jìn)行淋洗，收集淋洗液于雞心瓶中備用，將雞心瓶中的淋洗液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，加入甲醇溶解超聲后，得預(yù)處理溶液；

(2)色譜測(cè)定：測(cè)定的色譜條件為：高效液相色譜儀；反相色譜柱；流速：0.6～1.0ml/min；溫度：室溫；SPD-20A紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm；流動(dòng)相：為0.5％的乙酸溶液：乙腈：0.005～0.03mol/L的草酸鈉溶液＝80：35：50，進(jìn)樣量20μl；

(3)計(jì)算：取預(yù)處理溶液1ml置100ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取磺胺類抗生素對(duì)照品，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

四種藥物的回收率測(cè)試結(jié)果如下表所示：

由上述檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)，本發(fā)明方法檢測(cè)效率高，一次可以分離4種磺胺類抗生素；抗生素峰無(wú)雜質(zhì)峰干擾；分析速度快，一次色譜分離過(guò)程可在50min完成，可以快速定量檢測(cè)，另外，采用液相譜儀檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度高。

在發(fā)明人研發(fā)過(guò)程中，流動(dòng)相中的鹽溶液采用乙酸銨、乙酸鈉、草酸銨、草酸鈉、氯化銨、亞硫酸銨溶液中的任意一種或多種對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯的影響。在預(yù)處理過(guò)程中，采用乙酸、磷酸、鹽酸、硫酸、硝酸或鹽酸乙醇溶液對(duì)檢測(cè)結(jié)果也無(wú)明顯的影響。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。