本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種通過(guò)頂空氣相色譜法測(cè)定西格列汀原料藥中殘留溶劑的方法。
背景技術(shù)：
：藥品中的殘留溶劑是指在原料藥、制劑生產(chǎn)中所使用的，但在工藝過(guò)程中沒(méi)有完全除去的有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑在藥物合成反應(yīng)中是必不可少和非常關(guān)鍵的物質(zhì)，但當(dāng)藥品所含的殘留溶劑水平高于安全值時(shí)，不僅可能導(dǎo)致藥品的穩(wěn)定性降低從而影響質(zhì)量，而且會(huì)對(duì)人體或環(huán)境產(chǎn)生危害。因此對(duì)殘留溶劑的控制越來(lái)越受到人們的關(guān)注。人用藥物注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議(ICH)將藥物生產(chǎn)、純化過(guò)程中常用的69種有機(jī)溶媒按照對(duì)人體和環(huán)境的危害程度分為4類，對(duì)于第一、二、三類溶媒，在藥物終產(chǎn)品中的殘留量一定要控制在ICH要求的限度以內(nèi)。西格列汀是由默沙東公司研發(fā)上市的DPPIV抑制劑，是第一個(gè)批準(zhǔn)用于治療2型糖尿病的DPPIV抑制劑，2006年在美國(guó)上市。該品可以明顯降低患者血糖，并且對(duì)磺脲類藥物失效的患者仍有顯著的降糖作用。乙酸正丙酯、丁酮、二異丙基乙胺、1-戊醇是合成西格列汀中的溶劑，其中乙酸正丙酯、丁酮、1-戊醇屬于第3類溶劑。目前，僅有王兵報(bào)道了使用氣相色譜法測(cè)定磷酸西格列汀原料的殘留溶劑的方法(王兵，“氣相色譜法測(cè)定磷酸西格列汀原料的殘留溶劑”，《廣東化工》，2015，42(18)：163-164)，但是該方法是對(duì)于磷酸西格列汀中殘留的異丙醇、乙酸乙酯和叔丁基甲基醚中進(jìn)行檢測(cè)，并未報(bào)道對(duì)西格列汀原料藥中乙酸正丙酯、丁酮、二異丙基乙胺、1-戊醇四種溶劑進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)的方法。由于氣相色譜分析檢測(cè)有機(jī)殘留溶劑的方法具有特異性和專屬性，因此建立一種分析方法能夠同時(shí)對(duì)西格列汀原料藥中殘留溶劑乙酸正丙酯、丁酮、二異丙基乙胺、1-戊醇進(jìn)行檢測(cè)是十分必要和迫切的。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性良好，能同時(shí)檢測(cè)西格列汀原料藥中多種殘留溶劑的氣相色譜法，從而保證西格列汀原料藥的質(zhì)量、提高臨床用藥的安全性。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：將西格列汀配制成溶液后放置在頂空瓶中，加熱使揮發(fā)性有機(jī)溶劑從溶液中揮發(fā)出來(lái)，達(dá)到平衡后，取頂空瓶?jī)?nèi)上部氣體注入到氣相色譜儀中進(jìn)行分離測(cè)定。與溶液直接進(jìn)樣的方法相比，取頂空瓶?jī)?nèi)上部氣體注入到氣相色譜儀進(jìn)行分析不會(huì)因西格列汀及其分解物對(duì)色譜柱造成污染和干擾檢測(cè)結(jié)果，且進(jìn)樣體積增大，使殘留溶劑被檢出的能力和檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性均大大提高。測(cè)定方法包括以下步驟：1.溶液配制：對(duì)照品溶液的配制：精密稱取乙酸正丙酯、丁酮、二異丙基乙胺、1-戊醇，置量瓶中，加二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液A；精密量取對(duì)照品貯備液A適量，置量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液B；再精密量取對(duì)照品貯備液B3ml，置20ml頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。待測(cè)供試品溶液的配制：取待測(cè)樣品磷酸西格列汀，精密稱定，置20ml頂空瓶中，加二甲基亞砜3ml，密封，作為供試品溶液。2.測(cè)定：精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。3.計(jì)算：按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算測(cè)試品中乙酸正丙酯、丁酮、二異丙基乙胺、1-戊醇的含量。其中，所述氣相色譜條件為：色譜柱：(5％苯基)甲基聚硅氧烷為固定相、30m×0.53mm×5μmHP-5毛細(xì)管柱；柱溫：采用程序升溫，起始溫度40℃，維持8～10min，以20℃/min升溫至130～140℃，維持5min，以40℃/min升溫至240℃，維持5min。檢測(cè)器：FID檢測(cè)器檢測(cè)器溫度：250℃進(jìn)樣口溫度：200℃頂空瓶平衡溫度：95℃，平衡時(shí)間：30min定量環(huán)溫度：170℃?zhèn)鬏斁€溫度：170℃色譜柱流量：3～4mL/min分流比：10～12：1載氣：氮?dú)膺M(jìn)樣量：1mL本發(fā)明由于原料藥西格列汀樣品涉及殘留溶劑種類多，沸點(diǎn)比較廣，丁酮、乙酸正丙酯、二異丙基乙胺、1-戊醇的沸點(diǎn)分別是79℃、101℃、127℃、137℃。為適應(yīng)原料藥西格列汀中殘留溶劑的檢測(cè)，需要選擇比較合適的檢測(cè)條件，發(fā)明人對(duì)所采用的色譜柱、起始柱溫、升溫速率等進(jìn)行調(diào)整，經(jīng)過(guò)對(duì)各控制條件的優(yōu)化，最終確定了上述最適合的色譜條件。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的西格列汀中殘留溶劑的測(cè)定方法操作快速簡(jiǎn)單，靈敏度高，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可定性或定量地同時(shí)檢測(cè)出西格列汀中殘留溶劑乙酸正丙酯、丁酮、二異丙基乙胺、1-戊醇的含量，為控制原料藥西格列汀生產(chǎn)工藝中有機(jī)溶劑殘留提供了良好的參考，保證西格列汀原料藥的質(zhì)量，從而提高了臨床用藥的安全性，為提高西格列汀原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了方法依據(jù)。附圖說(shuō)明圖1以對(duì)照品溶液為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，記錄色譜圖，乙酸正丙酯、丁酮、二異丙基乙胺、1-戊醇依次出峰，空白溶劑無(wú)干擾。圖2定量限試驗(yàn)記錄的譜圖圖3實(shí)施例2測(cè)定原料藥磷酸西格列汀中殘留溶劑試驗(yàn)記錄的譜圖具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，但并不限定本發(fā)明。實(shí)施例1儀器與試藥:Agilent7890A氣相色譜儀；Agilent7697A頂空進(jìn)樣器；磷酸西格列汀(批號(hào)：105160401)；所有試劑均為HPLC級(jí)。色譜條件：色譜柱：(5％苯基)甲基聚硅氧烷為固定相、30m×0.53mm×5μmHP-5毛細(xì)管柱；柱溫：采用程序升溫，起始溫度40℃，維持8min，以20℃/min升溫至130℃，維持5min，以40℃/min升溫至240℃，維持5min；檢測(cè)器：FID檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；頂空瓶平衡溫度：95℃，平衡時(shí)間：30min；定量環(huán)溫度：170℃；傳輸線溫度：170℃；色譜柱流量：3mL/min；分流比：10：1；載氣：氮?dú)?。溶液配制?對(duì)照品貯備液的配制精密稱取乙酸正丙酯0.25g，丁酮0.25g，二異丙基乙胺0.1g，1-戊醇0.25g，置20ml量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液A。精密量取對(duì)照品貯備液A1ml，置25ml量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液B。2對(duì)照品溶液的配制精密量取對(duì)照品貯備液B3ml，置20ml頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。3供試品溶液配制取待測(cè)樣品0.3g，精密稱定，置20ml頂空瓶中，加DMSO3ml，密封，作為供試品溶液。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以對(duì)照品溶液為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，精密量取該溶液，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1，乙酸正丙酯、丁酮、二異丙基乙胺、1-戊醇依次出峰，保留時(shí)間分別為5.548、7.327、10.037、14.005min，空白溶劑無(wú)干擾。各組分均可以得到良好分離，分離度見(jiàn)下表1：表1各溶劑的分離度組分名稱分離度乙酸正丙酯/丁酮7.86二異丙基乙胺13.371-戊醇27.58定量限試驗(yàn)：分別取乙酸正丙酯、丁酮、二異丙基乙胺、1-戊醇適量，精密稱定，用DMSO溶解并制成適宜濃度的溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，記錄色譜圖(圖2)，以S/N＝10計(jì)算定量限，結(jié)果見(jiàn)下表2：表2各溶劑的定量限組分名稱定量限(ug/mL)乙酸正丙酯1.760丁酮2.505二異丙基乙胺0.6411-戊醇11.42回收率試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液A0.5ml、1.0ml、1.2ml，分別置于25ml量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，搖勻，備用。精密量取上述各溶液3ml，置裝有0.3g待測(cè)樣品的20ml頂空瓶中，密封，得到3個(gè)濃度的加樣溶液。每個(gè)濃度平行配制3份。取上述加樣溶液及供試品溶液頂空進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)下表3-6。結(jié)果表明此方法的準(zhǔn)確度良好。表3乙酸正丙酯回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表4丁酮回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表5二異丙基乙胺回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表61-戊醇回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果實(shí)施例2西格列汀原料藥殘留溶劑的測(cè)定色譜條件：色譜柱：(5％苯基)甲基聚硅氧烷為固定相、30m×0.53mm×5μmHP-5毛細(xì)管柱；柱溫：采用程序升溫，起始溫度40℃，維持8min，以20℃/min升溫至130℃，維持5min，以40℃/min升溫至240℃，維持5min；檢測(cè)器：FID檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；頂空瓶平衡溫度：95℃，平衡時(shí)間：30min；定量環(huán)溫度：170℃；傳輸線溫度：170℃；色譜柱流量：3mL/min；分流比：10：1；載氣：氮?dú)狻Ｈ芤号渲疲喊磳?shí)施例1的方法配制溶液。測(cè)定：精密量取西格列汀供試品溶液和對(duì)照品溶液分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖(見(jiàn)圖3)。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，殘留溶劑測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表7：表7供試品溶劑殘留情況含量％乙酸正丙酯丁酮二異丙基乙胺1-戊醇供試品0.004未檢出未檢出未檢出參考例1色譜條件：色譜柱：(6％氰丙基苯基)甲基聚硅氧烷為固定相、60m×0.32mm×1.8μmDB-624毛細(xì)管柱；柱溫：采用程序升溫，起始溫度50℃，維持8min，以20℃/min升溫至130℃，維持5min，以40℃/min升溫至240℃，維持5min；檢測(cè)器：FID檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；頂空瓶平衡溫度：90℃，平衡時(shí)間：30min；定量環(huán)溫度：200℃；傳輸線溫度：200℃；色譜柱流量：3mL/min；分流比：10：1；載氣：氮?dú)?。溶液配制：按?shí)施例1的方法配制溶液。測(cè)定：精密量取對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定。采用該色譜條件，丁酮峰前有谷包，其檢測(cè)受到干擾。參考例2色譜條件：色譜柱：(5％苯基)甲基聚硅氧烷為固定相、50m×0.32mm×0.52μmHP-5毛細(xì)管柱；柱溫：采用程序升溫，起始溫度40℃，維持8min，以20℃/min升溫至100℃，維持5min，以40℃/min升溫至240℃，維持5min；檢測(cè)器：FID檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；頂空瓶平衡溫度：90℃，平衡時(shí)間：30min；定量環(huán)溫度：200℃；傳輸線溫度：200℃；色譜柱流量：3mL/min；分流比：10：1；載氣：氮?dú)狻Ｈ芤号渲疲喊磳?shí)施例1的方法配制溶液。測(cè)定：精密量取對(duì)照品溶液，進(jìn)行測(cè)定。采用該色譜柱時(shí)，1-戊醇峰峰型嚴(yán)重拖尾，無(wú)法達(dá)到其檢測(cè)靈敏度。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3