本發(fā)明屬于氯氰菊酯農(nóng)藥檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測蔬菜或水果中氯氰菊酯含量的茚三酮比色法。

背景技術(shù)：

氯氰菊酯 (CyperMethrin) 是一種擬除蟲菊酯類殺蟲劑，其生物活性較高，具有觸殺和胃毒作用，并且具有殺蟲譜廣、擊倒速度快的特點而廣泛適用于棉花、蔬菜、果樹、茶樹、森林等多種植物上的害蟲的防治。但是研究發(fā)現(xiàn)，氯氰菊酯對人體呼吸系統(tǒng)、眼睛和皮膚有較大的刺激作用，與皮膚接觸可能致敏，并且接觸量大時會引起頭痛、頭昏、惡心、嘔吐、雙手顫抖，全身抽搐或驚厥、昏迷、休克等癥狀。另外，氯氰菊酯對光穩(wěn)定，加熱超過220℃時，易分解生成劇毒的氰化物氣體；并且氯氰菊酯對水生生物有極高毒性，使用不當(dāng)可能對水體環(huán)境產(chǎn)生長期性的不良影響。

由于氯氰菊酯存在上述問題，國內(nèi)外都致力于氯氰菊酯含量的檢測方法的研究，含氯氰菊酯的樣品尤其是蔬菜和水果的前處理方法及檢測方法也在不斷改進(jìn)。目前國內(nèi)外對蔬菜和水果中氯氰菊酯的儀器分析檢測方法有氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜法等，其中最常用的是氣相色譜。以上各種檢測方法準(zhǔn)確度高，但存在儀器設(shè)備昂貴、前處理方法復(fù)雜、對人員專業(yè)技術(shù)要求高、檢測成本高等缺點。

因此，建立簡便、快捷、準(zhǔn)確的檢測方法成為了蔬菜和水果中氯氰菊酯檢測迫切需要解決的重要內(nèi)容。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種快速檢測蔬菜或水果中氯氰菊酯含量的茚三酮比色法，本發(fā)明使用茚三酮作為顯色劑，方法靈敏度高，反應(yīng)條件溫和易于控制，本發(fā)明提供的方法成本低、快速簡單、所需設(shè)備少，易于操作。

為實現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種快速檢測蔬菜或水果中氯氰菊酯含量的茚三酮比色法，具體方法為：

S1: 采用正己烷提取蔬菜或水果樣品中的氯氰菊酯得提取液備用；

S2：吸取適量提取液，水浴揮發(fā)至干，加水，然后加堿解液進(jìn)行堿解；

S3：調(diào)節(jié)步驟S2溶液的pH為11.5～12.5，加入緩沖溶液和茚三酮溶液，定容后混合均勻反應(yīng)，最后與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較即得氯氰菊酯含量；

其中，所述堿解液的濃度為150～220g/L。

本發(fā)明首先提取蔬菜或水果中殘留的氯氰菊酯，然后將氯氰菊酯在堿性條件下進(jìn)行分解，在特定的體系環(huán)境中，CN^-催化茚三酮發(fā)生氧化還原反應(yīng)而顯色，再與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較，得出樣品中菊酯的含量；本發(fā)明選用堿解液的濃度為150～220g/L，當(dāng)堿解液的濃度在此范圍之內(nèi)時，可免除后序步驟中的加熱操作，減少操作程序，并且縮短操作時間，方便快速。

在本發(fā)明中，提取溶液的選擇至關(guān)重要，發(fā)明人在試驗過程中，共試過幾種提取液，包括甲醇、乙腈、丙酮、水、正己烷，其中丙酮有干擾，容易出現(xiàn)假陽性，而除了正己烷，其他溶劑提取效果不好。因此，采用正己烷提取蔬菜或水果中的氯氰菊酯，具體操作為于樣品杯中放入樣品，加入正己烷，振蕩提取。

優(yōu)選地，步驟S1中的堿解液為氫氧化鈉。

在本發(fā)明中，堿解液的濃度至關(guān)重要，直接影響到檢測結(jié)果；堿解液的濃度過低會導(dǎo)致待測物不易消解，如果想達(dá)到同樣的消解程度就必須提高反應(yīng)溫度、延長反應(yīng)時間等，而堿解液濃度過高則會破壞待測物。因此優(yōu)選地，步驟S2中的堿解液的濃度為200g/L。

優(yōu)選地，步驟S2中，所述堿解液與水浴揮發(fā)前的提取液的體積比為1:1～3:1。

優(yōu)選地，步驟S2中，所述堿解時間為10～25min。

優(yōu)選地，使用鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系pH，所述鹽酸溶液的濃度為20～30%。

優(yōu)選地，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液。

在本發(fā)明的步驟S3中，緩沖液對調(diào)節(jié)反應(yīng)體系pH值至關(guān)重要，是后續(xù)與茚三酮反應(yīng)的關(guān)鍵控制環(huán)節(jié)。緩沖液使用量過少，不足以起到維持pH穩(wěn)定的效果；緩沖液使用量過多，增加反應(yīng)溶液體積，降低反應(yīng)靈敏度。

優(yōu)選地，所述緩沖溶液的濃度為0.05～0.2mol/L，更為優(yōu)選地，所述緩沖溶液的濃度為0.1mol/L。

優(yōu)選地，所述緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的體積比為1:9～6:4。

本實驗利用茚三酮自身氧化還原反應(yīng)進(jìn)行結(jié)果顯示，茚三酮溶液與氯氰菊酯農(nóng)藥殘留量在一定程度上呈線性關(guān)系，茚三酮的量應(yīng)滿足通常氯氰菊酯的測定范圍，過少的量不足以滿足測定的需要，過多的量會形成基質(zhì)干擾并使標(biāo)準(zhǔn)曲線彎曲，影響檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性；本發(fā)明中，加入氯化亞錫主要為了保持反應(yīng)體系穩(wěn)定性，減少氧氣等外部條件干擾。因此優(yōu)選地，所述茚三酮溶液的濃度為20g/L～60g/L（加入氯化亞錫的質(zhì)量為0.2～1.0g/L）。

優(yōu)選地，步驟S3中，加入緩沖溶液和茚三酮溶液，定容后混合均勻反應(yīng)10～30min后再與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較得出氯氰菊酯含量；更為優(yōu)選地，所述反應(yīng)時間為15min。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

（1）本發(fā)明選用茚三酮作為顯色劑，反應(yīng)速度快，方法靈敏度高；

（2）本發(fā)明提供的方法的反應(yīng)條件溫和易于控制，步驟簡單，所需設(shè)備少，易于操作；

（3）本發(fā)明所選用的試劑及顯色劑成本低，方法快速簡單；

（4）可根據(jù)本發(fā)明提供的方法的原理，研發(fā)出一種速測試劑盒，用于蔬菜和水果中氯氰菊酯的快速檢測。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋說明，但具體實施例并不對本發(fā)明作任何限定。除非特別說明，所有本發(fā)明提供的實施例中，提供的原材料均可從市面采購獲得。

以下各實施例和對照例中，本發(fā)明選用的樣品使用加標(biāo)法測定后得出的氯氰菊酯的含量為4mg/kg。具體方法為稱取樣品5g,加入標(biāo)物20ug，正己烷為10mL。

實施例1

（1）于樣品杯中放入蔬菜樣品，加入提取液正己烷，振蕩提取；

（2）吸取1mL提取液于比色管中，水浴揮發(fā)至干，水浴溫度為75℃，加入1mL純水；然后向比色管中加入0.5mL質(zhì)量濃度為200g/L的氫氧化鈉溶液，堿解15min；

（3）加入0.85mL 體積分?jǐn)?shù)為25%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系pH為11.9，混合均勻；然后加入0.5mL緩沖溶液和0.5mL質(zhì)量濃度為40g/L的茚三酮溶液，定容至5mL后混合均勻，15min后與標(biāo)準(zhǔn)色卡比較，從而得出氯氰菊酯含量為4mg/kg。

在本實施例中，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液，緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的體積比為8：2。

實施例2

（1）于樣品杯中放入蔬菜樣品，加入提取液正己烷，振蕩提??；

（2）吸取1mL提取液于比色管中，水浴揮發(fā)至干，水浴溫度為70℃，加入1mL純水；然后于比色管中加入0.5mL質(zhì)量濃度為210g/L的氫氧化鈉溶液，堿解10min；

（3）加入0.85mL體積分?jǐn)?shù)為20%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系pH為11.5，混合均勻；然后加入0.5mL緩沖溶液和0.5mL質(zhì)量濃度為20g/L的茚三酮溶液，定容至5mL后混合均勻，15min后與標(biāo)準(zhǔn)色卡比較，從而得出氯氰菊酯含量為4mg/kg。

在本實施例中，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液，緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的體積比為9：1。

實施例3

（1）于樣品杯中放入蔬菜樣品，加入提取液正己烷，振蕩提?。?/p>

（2）吸取1mL提取液于比色管中，水浴揮發(fā)至干，水浴溫度為80℃，加入1mL純水；然后于比色管中加入0.5mL質(zhì)量濃度為180g/L的氫氧化鈉溶液，堿解15min；

（3）加入0.51mL體積分?jǐn)?shù)為30%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系pH為12.0，混合均勻；然后加入0.5mL緩沖溶液和0.5mL質(zhì)量濃度為50g/L的茚三酮溶液，定容至5mL后混合均勻，15min后與標(biāo)準(zhǔn)色卡比較，從而得出氯氰菊酯含量為4mg/kg。

在本實施例中，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液，緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的體積比為6：4。

實施例4

（1）于樣品杯中放入蔬菜樣品，加入提取液正己烷，振蕩提??；

（2）吸取1mL提取液于比色管中，水浴揮發(fā)至干，水浴溫度為85℃，加入1mL純水；然后于比色管中加入0.5mL質(zhì)量濃度為160g/L的氫氧化鈉溶液，堿解20min；

（3）加入0.50mL體積分?jǐn)?shù)為25%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系pH為12.5，混合均勻；然后加入0.5mL緩沖溶液和0.5mL質(zhì)量濃度為60g/L的茚三酮溶液，定容至5mL后混合均勻，15min后與標(biāo)準(zhǔn)色卡比較，從而得出氯氰菊酯含量為4mg/kg。

在本實施例中，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液，緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的質(zhì)量比為7：3。

對照例1

（1）于樣品杯中放入蔬菜樣品，加入提取液正己烷，振蕩提??；

（2）吸取1mL提取液于比色管中，水浴揮發(fā)至干，水浴溫度為75℃，加入1mL純水；

（2）于比色管中加入0.5mL質(zhì)量濃度為80g/L的氫氧化鈉溶液，堿解15min；

（3）加入0.85mL 體積分?jǐn)?shù)為25%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系pH為11.9，混合均勻；然后加入0.5mL緩沖溶液和0.5mL質(zhì)量濃度為40g/L的茚三酮溶液，定容至5mL后混合均勻，15min后與標(biāo)準(zhǔn)色卡比較，在本對照例中，雖然可以顯色，但是顯色顏色較淺，無法準(zhǔn)確對應(yīng)所測定樣品的含量。

在本對照例中，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液，緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的體積比為8：2。

對照例2

（1）于樣品杯中放入蔬菜樣品，加入提取液正己烷，振蕩提??；

（2）吸取1mL提取液于比色管中，水浴揮發(fā)至干，水浴溫度為75℃，加入1mL純水；然后向比色管中加入0.5mL質(zhì)量濃度為200g/L的氫氧化鈉溶液；

（3）立即向步驟（2）中加入0.85mL體積分?jǐn)?shù)為25%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系pH為11.9，混合均勻；然后加入0.5mL緩沖溶液和0.5mL質(zhì)量濃度為40g/L的茚三酮溶液，定容至5mL后混合均勻，放置15min后不顯色，與空白管顏色相同。

在本對照例中，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液，緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的體積比為8：2。

對照例3

（1）于樣品杯中放入蔬菜樣品，加入提取液正己烷，振蕩提??；

（2）吸取1mL提取液于比色管中，水浴揮發(fā)至干，水浴溫度為75℃，加入1mL純水；然后向比色管中加入0.5mL質(zhì)量濃度為200g/L的氫氧化鈉溶液，堿解15min；

（3）加入0.85mL體積分?jǐn)?shù)為25%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系pH為11.9，混合均勻；然后加入碳酸鈉、碳酸氫鈉（固體）和茚三酮（固體），溶解，定容至5mL后混合均勻，15min后與標(biāo)準(zhǔn)色卡比較，在本對照例中，雖然可以顯色，但是顯色顏色較淺，無法準(zhǔn)確對應(yīng)所測定樣品的含量。

在本對照例中，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液，緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的體積比為8：2。

對照例4

（1）于樣品杯中放入蔬菜樣品，加入提取液正己烷，振蕩提??；

（2）吸取1mL提取液于比色管中，水浴揮發(fā)至干，水浴溫度為75℃，加入1mL純水；于比色管中加入0.5mL質(zhì)量濃度為2g/L的氫氧化鈉溶液，沸水浴堿解15min；

（3）然后加入0.5mL緩沖溶液和0.5mL質(zhì)量濃度為40g/L的茚三酮溶液，定容至5mL后混合均勻，40℃水浴15min后與標(biāo)準(zhǔn)色卡比較，由于顏色顯色較淺，無法準(zhǔn)確測量出所測定樣品的含量。

在本對照例中，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液，緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的體積比為8：2。

對照例5

（1）于樣品杯中放入蔬菜樣品，加入提取液正己烷，振蕩提?。?/p>

（2）吸取1mL提取液于比色管中，水浴揮發(fā)至干，水浴溫度為75℃，加入1mL純水；然后向比色管中加入0.5mL質(zhì)量濃度為200g/L的氫氧化鈉溶液，堿解15min；

（3）加入0.85mL 體積分?jǐn)?shù)為25%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系pH為10，混合均勻；然后加入0.5mL緩沖溶液和0.5mL質(zhì)量濃度為40g/L的茚三酮溶液，定容至5mL后混合均勻，15min后與標(biāo)準(zhǔn)色卡比較，由于顏色顯色較淺，無法準(zhǔn)確測量出所測定樣品的含量。

在本對照例中，所述緩沖溶液為碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液，緩沖溶液中碳酸鈉與碳酸氫鈉的體積比為8：2。