本發(fā)明涉及檢測試劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種臨床感染檢測試劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：丙型肝炎(HepatitisCvirus，HCV)是一種隱匿性、傳染性、持續(xù)性、進(jìn)展性疾病，主要經(jīng)血液傳播的由丙型肝炎病毒感染引起的疾病，丙型肝炎慢性化率可高達(dá)50％至80％，可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌(HCC)，對患者的健康和生命危害極大，已成為嚴(yán)重的社會(huì)和公共衛(wèi)生問題。丙型肝炎的感染呈世界性分布，是歐美及日本等國家終末期肝病的最主要原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球HCV的感染率約為3％，每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5萬例。中國CDC報(bào)告丙型肝炎病例在最近5年內(nèi)翻了5倍，總感染人數(shù)達(dá)4000萬，且不能排除存在漏報(bào)的可能。我國血清流行病學(xué)調(diào)查資料顯示，我國一般人群抗-HCV陽性率為3.2％?？?HCV陽性率隨年齡增長而逐漸上升，由1歲組的2.0％至50至59歲組的3.9％。男女間無明顯差異。HCV的傳播途徑包括經(jīng)血液傳播、性傳播和母嬰傳播。HCV感染的常用的實(shí)驗(yàn)室檢測包括血清生化學(xué)檢測、抗-HCV檢測、HCVRNA檢測及基因型芯片檢測等，但現(xiàn)有的HCV診斷方法敏感性不高、價(jià)格貴、用時(shí)長。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種臨床感染檢測試劑及其制備方法，克服了上述現(xiàn)有技術(shù)之不足，其能有效解決現(xiàn)有的丙型肝炎診斷方法敏感性不高、價(jià)格貴、用時(shí)長的問題。本發(fā)明的技術(shù)方案之一是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種臨床感染檢測試劑，按下述方法得到：第一步，配制溶液：1)MES緩沖液的配制：配制濃度為10mmol/L至60mmol/L的MES緩沖液；2)蛋白酶的配制：配制濃度為5U/ml至10U/ml的蛋白酶；3)醋酸鹽緩沖液的配制：配制濃度為20mmol/L至50mmol/L的醋酸鹽緩沖液；4)溴甲酚紫的配制：配制濃度為2mmol/L至15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制濃度為30mmol/L至80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗滌液的配制：配制濃度為0.1g/L至1g/L的洗滌液；7)硫酸汞溶液的制備：稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得1mol/L至5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亞汞溶液的制備：稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得3mol/L至8mol/L的硝酸亞汞溶液；9)硝酸鎳溶液的制備：稱取硝酸鎳溶于雙蒸水中獲得1mol/L至8mol/L的硝酸鎳溶液；第二步，將第一步得到的所需量的MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5混合，即得本發(fā)明臨床感染檢測試劑。下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之一的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)：上述第一步中配制濃度為30mmol/L至40mmol/L的MES緩沖液；或/和，配制濃度為7U/ml至9U/ml的蛋白酶；或/和，配制濃度為30mmol/L至40mmol/L的醋酸鹽緩沖液。上述第一步中配制濃度為5mmol/L至10mmol/L的溴甲酚紫；或/和，配制濃度為50mmol/L至70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；或/和，配制濃度為0.3g/L至0.7g/L的洗滌液。上述第一步中稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得2mol/L至4mol/L的硫酸汞溶液；或/和，稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得4mol/L至7mol/L的硝酸亞汞溶液。上述第二步中MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2混合。本發(fā)明的技術(shù)方案之二是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種臨床感染檢測試劑的制備方法，按下述步驟進(jìn)行：第一步，配制溶液：1)MES緩沖液的配制：配制濃度為10mmol/L至60mmol/L的MES緩沖液；2)蛋白酶的配制：配制濃度為5U/ml至10U/ml的蛋白酶；3)醋酸鹽緩沖液的配制：配制濃度為20mmol/L至50mmol/L的醋酸鹽緩沖液；4)溴甲酚紫的配制：配制濃度為2mmol/L至15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制濃度為30mmol/L至80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗滌液的配制：配制濃度為0.1g/L至1g/L的洗滌液；7)硫酸汞溶液的制備：稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得1mol/L至5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亞汞溶液的制備：稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得3mol/L至8mol/L的硝酸亞汞溶液；9)硝酸鎳溶液的制備：稱取硝酸鎳溶于雙蒸水中獲得1mol/L至8mol/L的硝酸鎳溶液；第二步，將第一步得到的所需量的MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5混合，即得本發(fā)明臨床感染檢測試劑。下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之二的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)：上述第一步中配制濃度為30mmol/L至40mmol/L的MES緩沖液；或/和，配制濃度為7U/ml至9U/ml的蛋白酶；或/和，配制濃度為30mmol/L至40mmol/L的醋酸鹽緩沖液。上述第一步中配制濃度為5mmol/L至10mmol/L的溴甲酚紫；或/和，配制濃度為50mmol/L至70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；或/和，配制濃度為0.3g/L至0.7g/L的洗滌液。上述第一步中稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得2mol/L至4mol/L的硫酸汞溶液；或/和，稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得4mol/L至7mol/L的硝酸亞汞溶液。上述第二步中MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2混合。本發(fā)明制得的檢測試劑中原材料易得，低廉，制備過程簡單，獲得的試劑性能穩(wěn)定，用于丙型肝炎檢測具有普適性強(qiáng)、靈敏度高和特異性好特點(diǎn)，檢測過程簡單、快捷，成本低、重復(fù)性好，時(shí)間短，易于判斷，特別適合于大規(guī)模的人群普查及丙型肝炎臨床輔助診斷和療效動(dòng)態(tài)檢查。具體實(shí)施方式本發(fā)明不受下述實(shí)施例的限制，可根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案與實(shí)際情況來確定具體的實(shí)施方式。實(shí)施例1，該臨床感染檢測試劑按下述制備方法得到：第一步，配制溶液：1)MES緩沖液的配制：配制濃度為10mmol/L至60mmol/L的MES緩沖液；2)蛋白酶的配制：配制濃度為5U/ml至10U/ml的蛋白酶；3)醋酸鹽緩沖液的配制：配制濃度為20mmol/L至50mmol/L的醋酸鹽緩沖液；4)溴甲酚紫的配制：配制濃度為2mmol/L至15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制濃度為30mmol/L至80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗滌液的配制：配制濃度為0.1g/L至1g/L的洗滌液；7)硫酸汞溶液的制備：稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得1mol/L至5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亞汞溶液的制備：稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得3mol/L至8mol/L的硝酸亞汞溶液；9)硝酸鎳溶液的制備：稱取硝酸鎳溶于雙蒸水中獲得1mol/L至8mol/L的硝酸鎳溶液；第二步，將第一步得到的所需量的MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5混合，即得本發(fā)明臨床感染檢測試劑。實(shí)施例2，該臨床感染檢測試劑按下述制備方法得到：第一步，配制溶液：1)MES緩沖液的配制：配制濃度為10mmol/L或60mmol/L的MES緩沖液；2)蛋白酶的配制：配制濃度為5U/ml或10U/ml的蛋白酶；3)醋酸鹽緩沖液的配制：配制濃度為20mmol/L或50mmol/L的醋酸鹽緩沖液；4)溴甲酚紫的配制：配制濃度為2mmol/L或15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制濃度為30mmol/L或80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗滌液的配制：配制濃度為0.1g/L或1g/L的洗滌液；7)硫酸汞溶液的制備：稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得1mol/L或5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亞汞溶液的制備：稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得3mol/L或8mol/L的硝酸亞汞溶液；9)硝酸鎳溶液的制備：稱取硝酸鎳溶于雙蒸水中獲得1mol/L或8mol/L的硝酸鎳溶液；第二步，將第一步得到的所需量的MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1或1.6:0.1或0.7:0.2或0.3:0.7或1.5:1或1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5混合，即得本發(fā)明臨床感染檢測試劑。實(shí)施例3，作為上述實(shí)施例優(yōu)化，第一步中配制濃度為30mmol/L至40mmol/L的MES緩沖液。實(shí)施例4，作為上述實(shí)施例優(yōu)化，第一步中配制濃度為7U/ml至9U/ml的蛋白酶。實(shí)施例5，作為上述實(shí)施例優(yōu)化，第一步中配制濃度為30mmol/L至40mmol/L的醋酸鹽緩沖液。實(shí)施例6，作為上述實(shí)施例優(yōu)化，第一步中配制濃度為5mmol/L至10mmol/L的溴甲酚紫。實(shí)施例7，作為上述實(shí)施例優(yōu)化，第一步中配制濃度為50mmol/L至70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷。實(shí)施例8，作為上述實(shí)施例優(yōu)化，第一步中配制濃度為0.3g/L至0.7g/L的洗滌液。實(shí)施例9，作為上述實(shí)施例優(yōu)化，第一步中稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得2mol/L至4mol/L的硫酸汞溶液。實(shí)施例10，作為上述實(shí)施例優(yōu)化，第一步中稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得4mol/L至7mol/L的硝酸亞汞溶液。實(shí)施例11，作為上述實(shí)施例優(yōu)化，第二步中MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2混合。實(shí)施例12，該臨床感染檢測試劑按下述制備方法得到：第一步，配制溶液：1)MES緩沖液的配制：配制濃度為10mmol/L的MES緩沖液；2)蛋白酶的配制：配制濃度為5U/ml的蛋白酶；3)醋酸鹽緩沖液的配制：配制濃度為20mmol/L的醋酸鹽緩沖液；4)溴甲酚紫的配制：配制濃度為2mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制濃度為30mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗滌液的配制：配制濃度為0.1g/L的洗滌液；7)硫酸汞溶液的制備：稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得1mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亞汞溶液的制備：稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得3mol/L的硝酸亞汞溶液；9)硝酸鎳溶液的制備：稱取硝酸鎳溶于雙蒸水中獲得1mol/L的硝酸鎳溶液；第二步，將第一步得到的所需量的MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1:0.1:0.2:0.7:1:0.1:0.2:0.7混合，即得本發(fā)明臨床感染檢測試劑。實(shí)施例13，該臨床感染檢測試劑按下述制備方法得到：第一步，配制溶液：1)MES緩沖液的配制：配制濃度為60mmol/L的MES緩沖液；2)蛋白酶的配制：配制濃度為10U/ml的蛋白酶；3)醋酸鹽緩沖液的配制：配制濃度為50mmol/L的醋酸鹽緩沖液；4)溴甲酚紫的配制：配制濃度為15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制濃度為80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗滌液的配制：配制濃度為1g/L的洗滌液；7)硫酸汞溶液的制備：稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亞汞溶液的制備：稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得8mol/L的硝酸亞汞溶液；9)硝酸鎳溶液的制備：稱取硝酸鎳溶于雙蒸水中獲得8mol/L的硝酸鎳溶液；第二步，將第一步得到的所需量的MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1.6:0.7:0.3:1.5:1.6:0.7:0.3:1.5混合，即得本發(fā)明臨床感染檢測試劑。實(shí)施例14，該臨床感染檢測試劑按下述制備方法得到：第一步，配制溶液：1)MES緩沖液的配制：配制濃度為30mmol/L的MES緩沖液；2)蛋白酶的配制：配制濃度為9U/ml的蛋白酶；3)醋酸鹽緩沖液的配制：配制濃度為40mmol/L的醋酸鹽緩沖液；4)溴甲酚紫的配制：配制濃度為10mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制濃度為70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗滌液的配制：配制濃度為0.7g/L的洗滌液；7)硫酸汞溶液的制備：稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得4mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亞汞溶液的制備：稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得7mol/L的硝酸亞汞溶液；9)硝酸鎳溶液的制備：稱取硝酸鎳溶于雙蒸水中獲得3mol/L的硝酸鎳溶液；第二步，將第一步得到的所需量的MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1.2:0.3:0.2:1.0:1.2:0.3:0.2:1.0混合，即得本發(fā)明臨床感染檢測試劑。實(shí)施例15，該臨床感染檢測試劑按下述制備方法得到：第一步，配制溶液：1)MES緩沖液的配制：配制濃度為40mmol/L的MES緩沖液；2)蛋白酶的配制：配制濃度為9U/ml的蛋白酶；3)醋酸鹽緩沖液的配制：配制濃度為40mmol/L的醋酸鹽緩沖液；4)溴甲酚紫的配制：配制濃度為10mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制濃度為70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗滌液的配制：配制濃度為0.7g/L的洗滌液；7)硫酸汞溶液的制備：稱取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中獲得4mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亞汞溶液的制備：稱取硝酸亞汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中獲得7mol/L的硝酸亞汞溶液；9)硝酸鎳溶液的制備：稱取硝酸鎳溶于雙蒸水中獲得6mol/L的硝酸鎳溶液；第二步，將第一步得到的所需量的MES緩沖液、蛋白酶、醋酸鹽緩沖液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗滌液、硫酸汞溶液、硝酸亞汞溶液、硝酸鎳溶液按體積比為1:1.4:0.5:0.3:1.2:1.4:0.5:0.3:1.2混合，即得本發(fā)明臨床感染檢測試劑。上述實(shí)施例得到的本發(fā)明臨床感染檢測試劑在檢測丙型肝炎的試驗(yàn)如下：1.試驗(yàn)對象篩選要求:所有試驗(yàn)對象在測試前一天均未飲酒，且未服用氨基酸、激素類等藥物。1)經(jīng)臨床診斷確診為丙型肝炎(已經(jīng)臨床檢測手段確診)的患者共1754名，年齡20-80，男女各占一半；2)正常健康人組2130名，年齡20-80歲，男女各半為經(jīng)檢查健康合格者。2.試驗(yàn)方法1)以下試驗(yàn)均采用實(shí)施例12、實(shí)施例13、實(shí)施例14和實(shí)施例15制備的檢測試劑。2)所有試驗(yàn)對象均取新鮮潔凈尿液3mL加入裝有0.5m1根據(jù)本發(fā)明得到的實(shí)施例12、實(shí)施例13、實(shí)施例14和實(shí)施例15制備的檢測試劑的安瓶中，稍加振蕩靜置3分鐘至5分鐘(若溫度低于20℃，在37℃水浴中加熱)，震蕩后，沉淀物穩(wěn)定存在，結(jié)果及顏色如下表1所示。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1)肝炎篩查見表2所示：如上所示，在醫(yī)院所提供的1754名肝炎患者中，檢測出陽性患者有1742名，檢出率達(dá)98.63％，在正常組中檢出率皆低于5％，說明本發(fā)明提供的尿液中丙型肝炎標(biāo)志物檢測試劑進(jìn)行丙型肝炎的篩查靈敏度高，檢出率高，現(xiàn)有技術(shù)通過抽血來對丙型肝炎進(jìn)行檢測，此方法費(fèi)用昂貴且不適合大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查時(shí)使用，而本發(fā)明得到的臨床感染檢測試劑通過對肝炎患者的尿液直接進(jìn)行檢測，該過程操作方便，且對丙型肝炎檢測具有普適性強(qiáng)、靈敏度高和特異性好等特點(diǎn)。綜上所述，本發(fā)明得到的臨床感染檢測試劑原材料易得，低廉，制備過程簡單，獲得的試劑性能穩(wěn)定，用于丙型肝炎檢測具有普適性強(qiáng)、靈敏度高和特異性好等特點(diǎn)，檢測過程簡單、快捷，成本低、重復(fù)性好，時(shí)間短，易于判斷，特別適合于大規(guī)模的人群普查及丙型肝炎臨床輔助診斷和療效動(dòng)態(tài)檢查。以上技術(shù)特征構(gòu)成了本發(fā)明的實(shí)施例，其具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和實(shí)施效果，可根據(jù)實(shí)際需要增減非必要的技術(shù)特征，來滿足不同情況的需求。表1檢測標(biāo)準(zhǔn)符號(hào)顏色陰性-淺黃色或白色弱陽性±淺紅色或粉紅色陽性+紅色或紅棕色表2當(dāng)前第1頁1 2 3