本發(fā)明涉及一種治療便秘的中成藥首薈通便膠囊質(zhì)量檢測方法，屬于中藥制劑分析領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：中醫(yī)認(rèn)為，便秘是由于大腸傳導(dǎo)失司所致，表現(xiàn)為大便秘結(jié)不通，排便周期延長，糞質(zhì)干硬，或糞質(zhì)不硬，但便而不暢或有排便不盡感。便秘作為一種常見的臨床癥狀，可伴隨在各種急慢性疾病的發(fā)病過程中，給患者的工作生活帶來極大不便，尤其在老年患者，可誘發(fā)心腦血管疾病，增加大腸癌的患病率，并可導(dǎo)致抑郁或焦慮，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。西醫(yī)的常規(guī)藥物治療、水療灌腸及手術(shù)療法可暫時性地緩解功能性便秘的臨床癥狀，但不能從根本上解決便秘的發(fā)生，且存在停藥后復(fù)發(fā)率高與藥物副作用明顯的問題。中醫(yī)獨特而多樣的治療方式在功能性便秘的治療上起到了不可替代的作用，具有療效顯著、副作用小、不存在藥物依賴等優(yōu)勢。中國專利CN100453105C公開了一種具有通便排毒、減肥降脂功能的組合物及制備方法，現(xiàn)已獲得生產(chǎn)批準(zhǔn)，產(chǎn)品為首薈通便膠囊。該產(chǎn)品是由何首烏、蘆薈、決明子、枸杞子、阿膠、人參、白術(shù)、枳實八味中藥組方，經(jīng)提取加工制成的復(fù)方中藥制劑，可針對性治療功能性便秘。首薈通便膠囊處方為名老中醫(yī)的臨床經(jīng)驗方，該方依據(jù)中醫(yī)藥理論，融匯臨床經(jīng)驗，在潤腸通便、瀉濁排毒之品中輔以補血潤燥之品，佐以補氣健脾之品，使以降濁消痞之藥味，達(dá)到補瀉兼施，以通為用，降中有升，瀉中有補，一走一守，一急一緩，相互制約，相互為用，補不留滯，瀉不傷正之功。從而引導(dǎo)全方作用于脾胃，使中焦脾胃恢復(fù)升清降濁的正常功能。首薈通便膠囊療效確切，起效快，對毒邪內(nèi)蘊、陰液虧虛所致的便秘具有良好的治療作用。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是在中國專利CN100453105C的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究制劑的質(zhì)量檢測方法。為了對產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行全面、有效地控制，本發(fā)明人經(jīng)過大量的試驗，研究了制劑中有效成分的定性定量檢測方法，建立了中藥首薈通便膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明的目的是提供一種治療便秘的中成藥首薈通便膠囊的質(zhì)量檢測方法，所述首薈通便膠囊是由何首烏、蘆薈、決明子、枸杞子、阿膠、人參、白術(shù)、枳實八味中藥組方，經(jīng)提取加工制成的。該質(zhì)量檢測方法是以薄層色譜法鑒別制劑中人參、枳實、蘆薈和阿膠，同時采用高效液相色譜法測定制劑中何首烏的2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量和枳實的柚皮苷含量，實現(xiàn)對首薈通便膠囊質(zhì)量進(jìn)行全面地評價和控制，從而為首薈通便膠囊的真?zhèn)舞b別和內(nèi)在質(zhì)量檢測提供全面、可靠的依據(jù)，保證了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性及臨床用藥的安全性、有效性。本發(fā)明技術(shù)方案以薄層色譜鑒別首薈通便膠囊中人參、枳實、蘆薈和阿膠，具體包括下列步驟：1、人參鑒別1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，加甲醇30mL超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶散，加正丁醇80mL混勻，置分液漏斗中，用5％氫氧化鈉溶液洗滌4次，每次30mL，棄去堿液，再用正丁醇飽和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，加氧化鋁1g拌勻，揮干溶劑，加于中性氧化鋁柱上，用水30mL洗脫，洗脫液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液；2)對照品溶液的制備：取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液；3)點樣、展開：吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：甲醇：水＝13：7：2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。2、枳實鑒別1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，加甲醇50mL，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液25mL，加稀鹽酸0.5mL，搖勻，通過732型氫型陽離子交換樹脂柱，依次用甲醇、水洗至溶液無色澄明，再用甲醇：濃氨試液＝100：3的洗脫液200mL洗脫，甲醇-濃氨試液洗脫液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，離心，上清液作為供試品溶液；2)對照品溶液的制備：取辛弗林對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；3)點樣、展開：吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一含4％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：甲醇：濃氨溶液＝20：5：1.5的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。3、蘆薈鑒別1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，加乙酸乙酯60mL，超聲30分鐘，濾過，濾液水浴濃縮至約20mL，用5％碳酸鈉溶液洗滌3次，每次15mL，棄去碳酸鈉液，再用1％氫氧化鈉溶液提取3次，每次15mL，合并堿液，用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液；2)對照品溶液的制備：取蘆薈對照藥材0.2g，同法制成對照藥材溶液；再取蘆薈苷對照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液；3)點樣、展開：吸取供試品溶液5μL、對照藥材溶液2μL、對照品溶液5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：甲醇：水＝100：17：9為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％氫氧化鉀甲醇溶液，立即置紫外燈于365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。4、阿膠鑒別1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，加甲醇10mL，超聲處理30分鐘，離心，棄去甲醇液，沉淀用0.1moL/L鹽酸溶液10mL溶解，超聲處理10分鐘，離心，上清液水浴蒸干，殘渣用6moL/L鹽酸溶液4mL溶解，轉(zhuǎn)移至5mL安瓿瓶中，熔封，置沸水浴中煮沸1小時，取出，加水4mL，搖勻，濾過，用少量水洗滌濾器及濾渣，濾液蒸干，殘渣加甲醇10mL使溶解，作為供試品溶液；2)對照品溶液的制備：取甘氨酸對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液；3)點樣、展開：吸取上述兩種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丙醇：醋酸＝7：3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。本發(fā)明同時采用高效液相色譜法測定首薈通便膠囊中何首烏的2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量和枳實的柚皮苷的含量，包括下列步驟：1、何首烏的2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量測定1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50mL水，稱定重量，超聲處理30分鐘，冷卻，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液20mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，再用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，分別用乙酸乙酯20mL、20mL、20mL、15mL提取4次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣用稀乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，搖勻，濾過，作為供試品溶液；2)對照品溶液的制備：精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，置容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得；3)HPLC色譜條件：以乙腈：甲醇：水＝20：5-10：70-75為流動相；檢測波長為320nm；進(jìn)樣量10μL；流速1mL/min；4)測定方法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10uL，注入液相色譜儀，按照步驟3)所述色譜條件測定，即得。優(yōu)選地，步驟3)以乙腈：甲醇：水＝20：8：72為流動相。2、枳實的柚皮苷含量測定1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約0.7g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；2)對照品溶液的制備：精密稱取柚皮苷對照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻即得；3)HPLC色譜條件：流動相為乙腈：0.1％磷酸溶液＝20：80；檢測波長為283nm；4)測定方法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，按照步驟3)所述色譜條件測定，即得。本發(fā)明建立了首薈通便膠囊質(zhì)量檢測方法，該方法采用薄層色譜法分別對制劑中人參、枳實、蘆薈和阿膠進(jìn)行定性鑒別，達(dá)到多成分聯(lián)合控制；同時利用HPLC定量測定制劑中何首烏的2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量和枳實的柚皮苷含量，能夠進(jìn)一步有效控制首薈通便膠囊的質(zhì)量，實現(xiàn)對制劑質(zhì)量進(jìn)行全面地評價，從而最大限度地保證了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性及臨床用藥的安全性、有效性。本發(fā)明所采用的檢測方法科學(xué)合理，條件可控，專屬性強，穩(wěn)定性高，具有很強的實用性。本質(zhì)量檢測方法的應(yīng)用，可確保首薈通便膠囊的臨床療效，更好地滿足醫(yī)療和市場的需要。附圖說明圖1為首薈通便膠囊中人參的薄層色譜圖，按從左到右的順序，其中1是樣品，2是人參皂苷Rg1對照品，3是缺人參的陰性制劑樣品；圖2為首薈通便膠囊中枳實的薄層色譜圖，按從左到右的順序，其中1是缺枳實的陰性制劑樣品，2是辛弗林對照品，3是樣品；圖3為首薈通便膠囊中蘆薈的薄層色譜圖，按從左到右的順序，其中1是缺蘆薈的陰性制劑樣品，2是樣品，3是蘆薈苷對照品，4是蘆薈對照藥材；圖4為首薈通便膠囊中阿膠的薄層色譜圖，按從左到右的順序，其中1、3甘氨酸對照品，2是缺阿膠的陰性制劑樣品，4、5是樣品；圖5為首薈通便膠囊何首烏2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的高效液相色譜圖，從上往下依次是2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品的高效液相色譜圖、缺何首烏陰性制劑樣品的高效液相色譜圖、首薈通便膠囊何首烏2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的高效液相色譜圖；圖6為首薈通便膠囊枳實柚皮苷的高效液相色譜圖，從上往下依次是柚皮苷對照品的高效液相色譜圖、首薈通便膠囊枳實柚皮苷的高效液相色譜圖、缺枳實陰性制劑樣品的高效液相色譜圖。具體實施方式實施例12，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的HPLC方法學(xué)研究1)藥品與試劑：2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品0081-9304(中國藥品生物制品檢定所)，乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。2)儀器：AgiLent1100高效液相色譜儀，VWD檢測器。3)色譜條件：色譜柱：KromasiLC18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙腈-甲醇-水(20：8：72)；檢測波長：320nm；流速：1mL/min。4)溶液制備4.1)樣品前處理方法的比較與確定4.1.1)取首薈通便膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50mL水，稱重，超聲處理30分鐘，冷卻，再稱重，用水補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清夜20mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，再用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，加乙酸乙酯提取(20mL，20mL，20mL，15mL)4次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣用50％乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，搖勻，濾過，即得。4.1.2)取首薈通便膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50mL水，稱重，置水浴中加熱30分鐘，并時加振搖，放冷，再稱重，用水補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清夜20mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，再用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，加乙酸乙酯提取(20mL，20mL，20mL，15mL)4次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣用50％乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，搖勻，濾過，即得。將上述二種方法制成的供試液分別注入液相色譜儀測定，結(jié)果見表1。表1不同提取方法2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量測定結(jié)果從測定結(jié)果，兩種方法提取效率一致，但方法2供試品溶液顏色深，提取的雜質(zhì)較多，乙醚萃取時易乳化，故確定采用1法作為樣品的前處理方法。4.2)供試品溶液的制備取首薈通便膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50mL水，稱重，超聲處理30分鐘，冷卻，再稱重，用水補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清夜20mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，再用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，加乙酸乙酯萃取(20mL，20mL，20mL，15mL)4次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣用50％乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，搖勻，濾過，即得。4.3)對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品(購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，編號：0081-9304)適量，加稀乙醇制成每1mL含0.1280mg的溶液，即得。4.4)陰性對照溶液的制備取不含何首烏藥材的陰性對照，照供試品溶液的制備項下同法操作，制成陰性對照溶液，從色譜圖可以看出，在2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷位置處無干擾，見圖5。5)線性關(guān)系考察精密稱取對照品適量，加稀乙醇配成下列濃度，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，分別進(jìn)樣5μL，測定峰面積，如表2。以測得峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝17527.62018X+2.08542，r＝0.99996，即2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.0128～0.128mg/mL范圍內(nèi)線性良好。結(jié)果見表2。表2線性關(guān)系考察結(jié)果序號濃度(mg/mL)峰面積10.0128229.23120.0256449.96930.04096724.54240.10241782.68250.1282255.443以測得峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝17527.62018X+2.08542，r＝0.99996，即2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷濃度在0.0128～0.1280mg/mL范圍內(nèi)線性良好。6)精密度試驗精密吸取濃度為0.0475mg/mL對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次5μL，峰面積RSD＝0.635％，表明儀器精密度良好。結(jié)果見表3。表3精密度試驗結(jié)果7)穩(wěn)定性試驗取同一樣品溶液，分別于配制后0，2，4，6，8h測定，結(jié)果表明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表4。表4穩(wěn)定性試驗結(jié)果8)重復(fù)性試驗分別取同一批號的樣品6份，照“樣品測定”項下的樣品制備方法操作，分別測定，計算含量，RSD為0.510％。結(jié)果見表5。表5重復(fù)性試驗結(jié)果9)回收率試驗精密稱取已知含量的樣品6份，分別加0.575mg/mL的二苯乙烯苷對照品1mL，同“供試品溶液的制備”項下的制備方法測定，得2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷平均回收率為98.51％，RSD為0.723％。結(jié)果見表6表6回收率試驗結(jié)果實施例2柚皮苷的高效液相測定方法學(xué)研究1)藥品與試劑：柚皮苷對照品110722-200610(中國藥品生物制品檢定所)，乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。2)儀器：AgiLent1100高效液相色譜儀，VWD檢測器3)色譜條件：色譜柱：KromasiLC18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙腈-0.1％磷酸溶液(20：80)；檢測波長：283nm；流速：1mL/min。4)溶液制備4.1)供試品溶液的制備取首薈通便膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.7g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。4.2)對照品溶液的制備精密稱取柚皮苷對照品(購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，編號：110722-200610)適量，加甲醇制成每1mL含0.0636mg的溶液，即得。4.3)陰性對照溶液的制備取不含枳實藥材的陰性對照，照供試品溶液的制備項下同法操作，制成陰性對照溶液，從色譜圖可以看出，在柚皮苷位置處無干擾。見圖6。4.4)線性關(guān)系考察精密稱取柚皮苷對照品適量，加甲醇配成0.0318mg/mL，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，分別進(jìn)樣2μL、4μL、8μL、12μL、16μL、20μL，測定峰面積，如表7。以測得峰面積為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝1719.98869X-1.18632，r＝1.00000，柚皮苷進(jìn)樣量在0.0128～0.128μg范圍內(nèi)線性良好。表7線性關(guān)系考察序號進(jìn)樣量(μg)峰面積10.0636108.2020.1272217.7230.2544434.6540.3816654.0650.5050873.5460.63601093.275)精密度試驗精密吸取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次5μL，峰面積RSD＝0.638％，表明儀器精密度良好。結(jié)果見表8。表8精密度試驗結(jié)果6)穩(wěn)定性試驗取同一樣品溶液，分別于配制后0h，2h，4h，6h，8h，測定，結(jié)果表明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表9。表9穩(wěn)定性試驗結(jié)果7)重復(fù)性試驗分別取同一批號的樣品6份，照“樣品測定”項下的樣品制備方法操作，分別測定，計算含量，RSD為1.18％。結(jié)果見表10。表10重復(fù)性試驗結(jié)果8)回收率試驗精密稱取已知含量的樣品6份，分別加3.86mg/mL的柚皮苷對照品1mL，同“供試品溶液的制備”項下的制備方法測定，得柚皮苷平均回收率為99.57％，RSD為0.392％。結(jié)果見表11。表11回收率試驗結(jié)果實施例3首薈通便膠囊中人參薄層色譜鑒別1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物17g，研細(xì)，加甲醇30mL超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶散，加正丁醇80mL混勻，置分液漏斗中，用5％氫氧化鈉溶液洗滌4次，每次30mL，棄去堿液，再用正丁醇飽和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，加氧化鋁1g拌勻，揮干溶劑，加于中性氧化鋁柱(100～200目，5g，內(nèi)徑1.5cm)上，用水30mL洗脫，洗脫液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。2)對照品溶液的制備：另取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。3)點樣、展開：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：甲醇：水＝13：7：2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。4)結(jié)果：圖1為首薈通便膠囊中人參的薄層色譜圖，結(jié)果表明：含有人參的樣品在與人參皂苷Rg1對照品色譜對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。色譜分離良好，人參的特征斑點突出，建立的TLC方法可以作為首薈通便膠囊中人參的質(zhì)量檢測方法。實施例4首薈通便膠囊中枳實薄層色譜鑒別1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物9g，研細(xì)，加甲醇50mL，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液25mL，加稀鹽酸0.5mL，搖勻，通過732型氫型陽離子交換樹脂柱(柱內(nèi)徑1.5cm，濕法裝柱至18cm)，依次用甲醇、水洗至溶液無色澄明，再用甲醇-濃氨試液(100：3)200mL洗脫，甲醇-濃氨試液洗脫液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，離心，上清液作為供試品溶液。2)對照品溶液的制備：取辛弗林對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。3)點樣、展開：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一含4％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：甲醇：濃氨溶液＝20：5：1.5的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。4)結(jié)果：圖2為首薈通便膠囊中枳實的薄層色譜圖，結(jié)果表明：含有枳實的樣品在與辛弗林對照品色譜對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。色譜分離良好，枳實的特征斑點突出，建立的TLC方法可以作為首薈通便膠囊中枳實的質(zhì)量檢測方法。實施例5首薈通便膠囊中蘆薈薄層色譜鑒別1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物13g，研細(xì)，加乙酸乙酯60mL，超聲30分鐘，濾過，濾液水浴濃縮至約20mL，用5％碳酸鈉溶液洗滌3次，每次15mL，棄去碳酸鈉液，再用1％氫氧化鈉溶液提取3次，每次15mL，合并堿液，用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。2)對照品溶液的制備：另取蘆薈對照藥材0.2g，同法制成對照藥材溶液。再取蘆薈苷對照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。3)點樣、展開：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，吸取供試品溶液5μL、對照藥材溶液2μL、對照品溶液5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：甲醇：水＝100：17：9為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％氫氧化鉀甲醇溶液，立即置紫外燈(365nm)下檢視。4)結(jié)果：圖3為首薈通便膠囊中蘆薈的薄層色譜圖，結(jié)果表明：含有蘆薈的樣品在與蘆薈苷對照品色譜和蘆薈對照藥材色譜對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。色譜分離良好，蘆薈的特征斑點突出，建立的TLC方法可以作為首薈通便膠囊中蘆薈的質(zhì)量檢測方法。實施例6首薈通便膠囊中阿膠薄層色譜鑒別1)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物0.7g，研細(xì)，加甲醇10mL，超聲處理30分鐘，離心，棄去甲醇液，沉淀用0.1moL/L鹽酸溶液10mL溶解，超聲處理10分鐘，離心，上清液水浴蒸干，殘渣用6moL/L鹽酸溶液4mL溶解，轉(zhuǎn)移至5mL安瓿瓶中，熔封，置沸水浴中煮沸1小時，取出，加水4mL，搖勻，濾過，用少量水洗滌濾器及濾渣，濾液蒸干，殘渣加甲醇10mL使溶解，作為供試品溶液。2)對照品溶液的制備：另取甘氨酸對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。3)點樣、展開：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丙醇：醋酸＝7：3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。4)結(jié)果：圖4為首薈通便膠囊中阿膠的薄層色譜圖，結(jié)果表明：含有蘆薈的2份樣品在與2份甘氨酸對照品色譜對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。色譜分離良好，阿膠的特征斑點突出，建立的TLC方法可以作為首薈通便膠囊中阿膠的質(zhì)量檢測方法。實施例7高效液相色譜法測定首薈通便膠囊中何首烏的2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：甲醇：水＝20：5：70)為流動相；檢測波長為320nm。理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于2000。2)對照品溶液的制備：精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，加稀乙醇制成每1mL含0.06mg的溶液，即得。3)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50mL水，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30分鐘，冷卻，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液20mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，再用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，用乙酸乙酯提取(20mL，20mL，20mL，15mL)4次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣用稀乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，搖勻，濾過，即得。4)測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。首薈通便膠囊每粒(0.35g/粒)含何首烏以2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計，不得少于1.0mg。實施例8高效液相色譜法測定首薈通便膠囊中何首烏的2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：甲醇：水＝20：8：72為流動相；檢測波長為320nm。理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于2000。2)對照品溶液的制備：精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，加稀乙醇制成每1mL含0.06mg的溶液，即得。3)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50mL水，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30分鐘，冷卻，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液20mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，再用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，用乙酸乙酯提取(20mL，20mL，20mL，15mL)4次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣用稀乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，搖勻，濾過，即得。4)測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。首薈通便膠囊每粒(0.35g/粒)含何首烏以2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計，不得少于1.0mg。實施例9高效液相色譜法測定首薈通便膠囊中何首烏的2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：甲醇：水＝20：10：75為流動相；檢測波長為320nm。理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于2000。2)對照品溶液的制備：精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，加稀乙醇制成每1mL含0.06mg的溶液，即得。3)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50mL水，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30分鐘，冷卻，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液20mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，再用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，用乙酸乙酯提取(20mL，20mL，20mL，15mL)4次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣用稀乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，搖勻，濾過，即得。4)測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。首薈通便膠囊每粒(0.35g/粒)含何首烏以2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計，不得少于1.0mg。實施例10高效液相色譜法測定首薈通便膠囊中何首烏的2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：甲醇：水＝20：9：74為流動相；檢測波長為320nm。理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于2000。2)對照品溶液的制備：精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，加稀乙醇制成每1mL含0.06mg的溶液，即得。3)供試品溶液的制備：取首薈通便膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50mL水，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30分鐘，冷卻，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液20mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，再用稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，用乙酸乙酯提取(20mL，20mL，20mL，15mL)4次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣用稀乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，搖勻，濾過，即得。4)測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。首薈通便膠囊每粒(0.35g/粒)含何首烏以2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計，不得少于1.0mg。實施例11高效液相色譜法測定首薈通便膠囊中枳實的柚皮苷1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：0.1％磷酸溶液＝20：80為流動相；檢測波長為283nm。理論板數(shù)按柚皮苷峰計算應(yīng)不低于3000。2)對照品溶液的制備精密稱取柚皮苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.06mg的溶液，即得。3)供試品溶液的制備取首薈通便膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.7g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。4)測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測定，即得。首薈通便膠囊每粒(0.35g/粒)含枳實以柚皮苷(C27H32O14)計，不得少于3.7mg。以上實施例僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理及構(gòu)思的前提下，還可以做出若干修飾和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3