本發(fā)明涉及一種中藥的檢測方法，特別涉及一種婦平膠囊中莪術含量的檢測方法及包含該含量檢測方法的婦平膠囊的檢測方法。
背景技術：
：婦平膠囊是一種清熱解毒、化瘀消腫的中成藥，用于治療盆腔炎、附件炎等病癥，處方中包含金蕎麥、紫花地丁、莪術、敗醬草、杠板歸、大血藤、一枝黃花，現(xiàn)行質(zhì)量標準(國家標準部分[外科婦科分冊]ws-10003(zd-2003)-2002)中以槲皮素(c15h10o7)的含量來反映產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。但經(jīng)對處方中各味藥材進行研究，除大血藤外均含有槲皮素，故不能穩(wěn)定的控制產(chǎn)品質(zhì)量，產(chǎn)品的安全性、有效性得不到保障。為解決上述問題，中國專利201410205683.4，婦平膠囊質(zhì)量標準檢測方法中采用高效液相法對槲皮素進行含量測定，解決了上述問題。但隨著社會對用藥安全的要求不斷提高，藥品需要增加建立有專屬性強的含量測定，以控制藥品質(zhì)量，因此，婦平膠囊中僅槲皮素的含量測定不能很好的對藥品質(zhì)量進行控制。該處方中以莪術為君藥，故對藥品中莪術含量進行控制很有必要。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的是提供一種婦平膠囊中莪術的檢測方法，目的是解決現(xiàn)有技術問題，提供一種在婦平膠囊中專屬性強的含量測定，以控制婦平膠囊的質(zhì)量。本發(fā)明的另一個目的是提供一種婦平膠囊的檢測方法。本發(fā)明解決問題采用的技術方案是：婦平膠囊中莪術的檢測方法，采用高效液相色譜法通過梯度洗脫對莪術進行含量測定。所述含量測定中采用的色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水為流動相，洗脫時間25min，洗脫開始時乙腈∶水＝60∶40，洗脫結束時乙腈∶水＝80∶20，；檢測波長為214nm，理論板數(shù)按吉馬酮計算，應不低于5000。含量測定中：對照品溶液的制備；取吉馬酮對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。供試品溶液的制備；取本品20粒的內(nèi)容物，研細，取2g，精密稱定，照揮發(fā)油測定法試驗，加水50ml，置250ml燒瓶中，測定管中加乙酸乙酯3ml，緩緩加熱至沸，并保持微沸2小時，放冷，分取乙酸乙酯液，低溫30～40℃揮去乙酸乙酯，殘渣加甲醇溶解，轉移至10ml容量瓶中，定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每粒含莪術以吉馬酮(c15h22o)計算，不得少于0.05mg。婦平膠囊的檢測方法，包含上述的莪術的含量測定方法。本發(fā)明的有益效果：莪術作為婦平膠囊中的君藥，其有效成分的含量直接影響到藥品的質(zhì)量，因此在婦平膠囊中對莪術的含量進行測定，可以更好的控制婦平膠囊的藥品質(zhì)量，提高產(chǎn)品的安全性、有效性。附圖說明圖1：線性關系考察中標準曲線。具體實施方式實施例1婦平膠囊，由金蕎麥300g、紫花地丁300g、莪術150g、敗醬草300g、杠板歸300g、大血藤300g、一枝黃花300g制備成1000粒膠囊。婦平膠囊的原質(zhì)量標準(見國家標準部分[外科婦科分冊]ws-10003(zd-2003)-2002)中含量測定為hplc法測定樣品中槲皮素的含量，但經(jīng)對處方中各味藥材進行研究，除大血藤外均含有槲皮素，故產(chǎn)品進行槲皮素含量控制專屬性不強，接國家藥典委要求需增加建立專屬性強的含量測定，經(jīng)對處方進行分析，該處方中以莪術為君藥，故擬對藥品中莪術含量進行研究，查閱資料莪術主要含揮發(fā)油，油中主要成分為莪術呋喃烯酮(curzenone)占44.93％，龍腦(borneol)占4.28％，牻牛兒酮(吉馬酮)(pormacrone)占6.16％，還含α-和β-蒎烯(pinene)，樟烯(camphene)，檸檬烯(limonene)，1，8-按葉素(1，8-cineole)，松油烯(terpinen)，異龍腦(isborneol)，丁香烯(caryophyllene)，姜黃烯(curcumene)，丁香烯環(huán)氧化物(caryophylleneepoxide)，姜黃酮(turme)，芳姜黃酮(ar-turmerone)，莪術二酮(cudione)，莪術醇(curcumol)，異莪術醇(isocurcumenol)以及莪術烯醇(curcurmenol)，異莪術烯醇(isourecumenol)等。另含二呋喃黃素類(curcuminoids)化合物，經(jīng)考慮，擬對藥品中吉馬酮含量進行研究，得到以下婦平膠囊中莪術的含量測定方法。含量測定方法：莪術：照高效液相色譜法(通則0512)測定。一、儀器與試藥高效液相色譜儀：ultimate3000型，ultimatedad3000檢測器，柱溫箱tcc3000rs，進樣器wps-3000sl；色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料(大連依利特hypersil250mm×4.6mm0.5μm)電子天平：mettler-toledo(梅特勒-托利多)ab104-n(樣品)、mettler-toledo(梅特勒-托利多)ab135-s(對照品)；吉馬酮對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100081-200907)；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純；樣品為貴州景誠藥業(yè)有限公司提供。二、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相，按下列梯度洗脫，檢測波長為214nm，理論板數(shù)按吉馬酮計算，應不低于5000。時間(min)乙腈(％)水(％)0～2560～8040～20對照品溶液的制備取吉馬酮對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20粒的內(nèi)容物，研細，取2g，精密稱定，照揮發(fā)油測定法(通則2204甲法)試驗，加水50ml，置250ml燒瓶中，測定管中加乙酸乙酯3ml，緩緩加熱至沸，并保持微沸2小時，放冷，分取乙酸乙酯液，低溫(30～40℃)揮去乙酸乙酯，殘渣加甲醇溶解，轉移至10ml容量瓶中，定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每粒含莪術以吉馬酮(c15h22o)計算，不得少于0.05mg。以下試驗及數(shù)據(jù)是對上述莪術含量測定方法的方法學考察。1.色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗方案優(yōu)選：(1)檢測波長選定檢測波長選定為214nm。(2)流動相選擇乙腈和水：表1流動相選擇表2梯度1表3梯度2時間(min)乙腈(％)水(％)0～2560～8040～20結果：根據(jù)表1的結果可看出流動相采用梯度2，分離效果好，故選用梯度2的流動相及流動時間。2.對照品溶液：對照品溶液的制備取吉馬酮對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。3.供試品溶液：供試品溶液的制備取20粒本品內(nèi)容物，研細，取2g，精密稱定，照揮發(fā)油測定法(《中國藥典》2010年版一部附錄xd甲法)試驗，加水50ml，置250ml燒瓶中，測定管中加乙酸乙酯3ml，緩緩加熱至沸，并保持微沸2小時，放冷，分取乙酸乙酯液，低溫(30～40℃)揮去乙酸乙酯，殘渣加甲醇溶解，轉移至10ml容量瓶中，定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。(1)制備方法選擇方法1取本品約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。方法2取本品約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入石油醚超聲處理三次，每次50ml，超聲30min，過濾，合并濾液揮干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。方法3取本品約2g，精密稱定，置索氏提取器中，精密加入石油醚適量：回流提取2h，放冷，過濾，濾液揮干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。方法4取本品約2g，精密稱定，照揮發(fā)油測定法(《中國藥典2010年版一部附錄xd甲法》)加水100ml置燒瓶中，測定管中加乙酸乙酯3ml，緩緩加熱至騰，并保持微沸2h，放冷，分取乙酸乙酯層溶液加甲醇溶解定容至10ml，即得。方法5取本品約2g，精密稱定，照揮發(fā)油測定法(《中國藥典2010年版一部附錄xd甲法》)加水100ml置燒瓶中，測定管中加乙酸乙酯3ml，緩緩加熱至沸騰，并保持微沸2h，放冷，分取乙酸乙酯層溶液，低溫揮去乙酸乙酯，殘渣加甲醇溶解，轉移至10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。表4樣品處理方法選擇方法方法1方法2方法3方法4方法5峰面積9.0158.1646.91012.34212.08結論：方法1.2.3，峰面積小，提取不完全，方法4乙酸乙酯峰較大，影響圖譜效果，方法5提取較完全，雜峰影響較小，故采用方法5提取，處理方法為：取20粒本品內(nèi)容物，研細，取2g，精密稱定，照揮發(fā)油測定法(《中國藥典》2010年版一部附錄xd甲法)試驗，加水50ml，置250ml燒瓶中，測定管中加乙酸乙酯3ml，緩緩加熱至沸騰，并保持微沸2小時，放冷，分取乙酸乙酯層溶液，低溫揮去乙酸乙酯，殘渣加甲醇溶解，轉移至10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。(2)提取時間選擇分別取本品約2g，精密稱定，照上面擬定處理方法5處理，分別提取1小時，2小時，3小時，4小時，5小時進行對比實驗，結果見表5：表5樣品處理時間選擇時間方法1(1h)方法2(2h)方法3(3h)方法4(4h)方法5(5h)峰面積12.42112.72212.28812.69512.666結論：實驗表明，提取1小時與提取5小時無顯著差異，但為保證后面實驗能提取完全的安全考慮，選擇提取2小時。(3)揮干溫度選擇因吉馬酮為揮發(fā)油里的一組分，溫度高易揮發(fā)，故擬對揮干溫度進行選擇，選擇結果見表6：表6供試液揮干溫度選擇結論：實驗表明30～40℃揮干，峰面積最高，而30℃以下用時較長，故選用30～40℃揮干。4.空自試驗取處方不含莪術藥材的陰性樣品，照含量測定項下供試品溶液的制備方法，制成陰性對照樣品溶液，同法進行測定。結果見表7：表7空白實驗對照結果：實驗結果得出陰性樣品，溶劑在與對照品相同的保留時間位置，無其他干擾峰出現(xiàn)。5.線性關系考察精密吸取吉馬酮對照品溶液(濃度為41.2μg/ml)2μl、6μl、10μl、14μl、18μl、22ul分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，結果見表8表8標準曲線測定結果按峰面積y與濃度x進行回歸，得線性方程y＝38.14x-0.033相關系數(shù)r＝1.00，實驗結果表明，吉馬酮在0.0824-0.9064ug范圍內(nèi)具有良好的線性關系，見圖1。6.精密度試驗(1)儀器精密度試驗按照含量測定項下對照品溶液的制備方法，制備的對照品溶液，在上述色譜條件下，連續(xù)進樣6次，測定吉馬酮峰面積，計算rsd％值為0.21％，表明儀器精密度良好，測定結果見表9。表9精密度試驗測定結果結論：儀器的精密度良好。(2)重復性考察取同一批樣品(批號20140115)依法測定，平行操作6次，結果見表10。表10重復性測定結果結論：分析方法的重復性良好。7.穩(wěn)定性考察按含量測定項下供試品溶液的制備方法，制備藥液供試品溶液一份，室溫放置，在擬定色譜條件下于0，2，4，6，8，10，12h分別進樣，測定峰面積。計算rsd％為0.35％，穩(wěn)定性實驗結果見表11。表11穩(wěn)定性測定結果結果表明，供試品溶液在室溫下放置12h，穩(wěn)定。8.回收率試驗取批號(批號20140115)樣品約1g(含量0.122mg/g)，精密稱定，共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入甲醇配制的吉馬酮對照品0.1272mg，按照含量測定項下供試品溶液的制備方法，制備方法制備供試品。在上述色譜條件下測定，測得其平均回收率為99.45％，rsd％為0.59％，結果見表12。表12加樣回收率結論：在本方法中對照品回收率為98.64％～100.23％，rsd為0.59％，回收率符合規(guī)定要求。經(jīng)上述方法的驗證，修訂后的含量測定方法可以用于質(zhì)量標準中，質(zhì)量標準有了提高，質(zhì)量可控。9.樣品含量測定：按正文收載的方法對10批樣品進行含量測定，結果見表13表13樣品的測定結果實驗結果為十批次樣品中含量最低位0.055mg/粒，最高為0.201ml/粒，平均值為0.113mg/粒，故根據(jù)上表含量測定結果，擬訂婦平膠囊含莪術以吉馬酮(c15h22o)的指標，每粒含莪術以吉馬酮(c15h22o)計不得少于0.05mg。從上述考察方法中可以看出，該含量檢測方法穩(wěn)定、精確，由于整個婦平膠囊配方中只有莪術中含有吉馬酮，因此該含量測定方法具有專屬性，能更好的控制藥品質(zhì)量。實施例2婦平膠囊檢測方法，包括國家標準部分[外科婦科分冊]ws-10003(zd-2003)-2002中婦平膠囊的質(zhì)量標準及實施例1中莪術的含量測定。實施例3婦平膠囊檢測方法，包括中國專利201410205683.4，婦平膠囊質(zhì)量標準檢測方法中公開的檢測方法及實施例1中的莪術的含量測定。實施例2、3中，均在現(xiàn)有技術的婦平膠囊質(zhì)量標準中加入莪術的含量測定，由于整個婦平膠囊配方中只有莪術中含有吉馬酮，因此該含量測定方法具有專屬性，能更好的控制藥品質(zhì)量。當前第1頁12