本發(fā)明屬于分析化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及尿素和氮含量的快速檢測(cè)。
背景技術(shù)：
：牛奶中尿素氮含量（以來(lái)源于尿素的氮的含量來(lái)表達(dá)尿素含量）的檢測(cè)是評(píng)價(jià)奶牛日糧蛋白質(zhì)體系和牛群改良的重要指標(biāo)，有助于調(diào)節(jié)泌乳奶牛日糧營(yíng)養(yǎng)的全價(jià)性、奶牛產(chǎn)出的高效性和飼料成本投入的合理性。牛奶尿素氮指標(biāo)，不僅可以正確評(píng)價(jià)泌乳奶牛日糧蛋白體系中可降解蛋白與過(guò)瘤胃蛋白的合理配置，同時(shí)可以借助牛奶尿素氮指標(biāo)，進(jìn)一步評(píng)價(jià)和確定泌乳牛群繁殖效率、健康狀態(tài)、以及泌乳奶牛日糧蛋白質(zhì)利用的合理程度。牛奶尿素氮含量過(guò)低表明日糧中可降解蛋白量過(guò)低，日糧蛋白質(zhì)在瘤胃中消化受阻，會(huì)導(dǎo)致干物質(zhì)采食量的下降和產(chǎn)奶量的下降；牛奶尿素氮含量過(guò)高則表明日糧蛋白質(zhì)部分被浪費(fèi)，成本投入不合理。目前測(cè)定牛奶尿素氮主要方法有二乙酰－肟法、脲酶－波氏比色法、酶聯(lián)速率法、紅外光譜法。前三種檢測(cè)方法操作復(fù)雜、過(guò)程繁瑣、結(jié)果準(zhǔn)確性易受外界因素干擾；紅外光譜法操作簡(jiǎn)單快捷、結(jié)果較為準(zhǔn)確，但對(duì)設(shè)備要求較高。本發(fā)明使用一種試劑配方，與商品化血糖儀一起使用，可以快速簡(jiǎn)單的測(cè)定牛奶尿素氮含量，測(cè)試成本低、操作簡(jiǎn)便快速、受外界干擾小、結(jié)果與牛奶中心檢測(cè)方法測(cè)定的結(jié)果基本一致。此外，本發(fā)明的檢測(cè)方法還能應(yīng)用于血液、尿液等生物樣品中尿素含量檢測(cè)。血尿素和尿尿素測(cè)定是評(píng)價(jià)腎功能是否正常的一項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)，血尿素、尿尿素含量的快速便攜檢測(cè)有助于相關(guān)疾病排查及生理監(jiān)控。同時(shí)，本發(fā)明的檢測(cè)方法也可以用于這些生物樣本中氨含量的檢測(cè)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種檢測(cè)尿素和氨含量的試劑配方和使用方法。通過(guò)配方中試劑的酶反應(yīng)建立尿素和氨含量與商品化血糖儀輸出結(jié)果之間的定量關(guān)系，成功實(shí)現(xiàn)快速、簡(jiǎn)單測(cè)量牛奶中尿素和氨含量，測(cè)量結(jié)果與目前常用測(cè)試方法測(cè)定結(jié)果基本一致。該方法也可適用于尿液、血液等樣品中尿素含量的檢測(cè)。1.本發(fā)明的試劑配方含有以下物質(zhì)：1)輔酶（包括但不局限于：還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nadh）、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nadph）、以及nadh和nadph的鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等鹽類形式）2)α-酮類物質(zhì)（包括但不局限于：α-酮戊二酸及其鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等鹽類形式）3)尿素酶4)氨基酸脫氫酶（包括但不局限于：谷氨酸脫氫酶、甘氨酸脫氫酶等）或氨基酸轉(zhuǎn)氨酶（包括但不局限于：丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶等）2.通常將本發(fā)明的試劑配方制備成凍干粉或溶液，便于使用。例如制備成溶液時(shí)，可以使用以下幾種物質(zhì)和濃度范圍：1)0.5~500mmnadh（或其鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等鹽類形式）2)1~1000mmα-酮戊二酸（或其鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等鹽類形式）3)0.001~1000u/ml尿素酶4)0.001~1000u/ml谷氨酸脫氫酶5)ph5~9的磷酸鹽緩沖液，磷含量為1~2000mm3.使用上述1或2的試劑檢測(cè)牛奶、血液、尿液中尿素和氨含量的方法，包括以下步驟：1)將試劑與含尿素或氨的樣品本按1:9~9:1體積比混合后，于4~90℃反應(yīng)1~60分鐘后靜置至室溫2)使用商品化血糖儀對(duì)反應(yīng)后的樣品溶液進(jìn)行測(cè)量，得到信號(hào)并計(jì)算得出尿素或氨的含量附圖說(shuō)明圖1本發(fā)明提供的試劑中輔酶（以nadh為例）與檢測(cè)儀電信號(hào)讀數(shù)的線性關(guān)系圖圖2本發(fā)明提供試劑穩(wěn)定性隨時(shí)間關(guān)系圖圖3本發(fā)明提供的試劑及檢測(cè)儀器示意圖圖4本發(fā)明使用方法示意圖（以牛奶尿素氮為例）實(shí)施實(shí)例1.實(shí)施實(shí)例一：用本發(fā)明的配方和方法測(cè)定三元純牛奶中尿素氮含量：1）通過(guò)外標(biāo)法，向牛奶樣品中分別加入0mm、0.5mm、1mm、1.5mm尿素，測(cè)定牛奶尿素含量，并與北京奶牛中心測(cè)試結(jié)果比較。2）直接測(cè)試不同尿素氮含量牛奶，并與北京某檢測(cè)中心標(biāo)定的5種牛奶樣品比較。測(cè)試試劑配比為：0.5~500mmnadh鈉鹽、1~1000mmα-酮戊二酸二鈉鹽水合物、0.001~1000u/ml尿素酶、0.001~1000u/ml谷氨酸脫氫酶和ph5~9的磷酸鹽緩沖液（磷含量1~2000mm）。測(cè)試方法：將緩沖液和樣品牛奶按1:9~9:1加入凍干試劑中，混合后于4~90℃加熱反應(yīng)1~60分鐘，待恢復(fù)室溫后，取一滴用商品化血糖儀進(jìn)行尿素氮含量測(cè)定。測(cè)得血糖儀讀數(shù)經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到尿素氮含量結(jié)果如下（每個(gè)樣品三次測(cè)量平均值）：1）外標(biāo)法測(cè)試牛奶樣品2）直接測(cè)試不同尿素氮含量奶樣序號(hào)某檢測(cè)中心測(cè)試尿素氮含量（mg/dl）本發(fā)明測(cè)試尿素氮含量（mg/dl)偏差19.19.87.69%212.112.21.01%315.615.5-0.06%417.717.1-3.39%521.321.40.05%2.實(shí)施實(shí)例二：用本發(fā)明的配方和方法測(cè)定21種不同奶牛原乳中尿素氮含量并與北京某檢測(cè)中心測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。測(cè)試試劑配比為：0.5~500mmnadh鈉鹽、1~1000mmα-酮戊二酸二鈉鹽水合物、0.001~1000u/ml尿素酶、0.001~1000u/ml谷氨酸脫氫酶和ph5~9的磷酸鹽緩沖液（磷含量1~2000mm）。測(cè)試方法：將緩沖液和樣品牛奶按1:9~9:1加入凍干試劑中，混合后于4~90℃加熱反應(yīng)1~60分鐘，待恢復(fù)室溫后，取一滴用商品化血糖儀進(jìn)行尿素氮含量測(cè)定。測(cè)得血糖儀讀數(shù)經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到尿素氮含量結(jié)果如下（每個(gè)樣品三次測(cè)量平均值）：序號(hào)某檢測(cè)中心測(cè)試尿素氮含量（mg/dl）本發(fā)明測(cè)試尿素氮含量（mg/dl)偏差113.2313.20.23%213.1013.4-2.24%313.3713.6-1.69%413.2513.4-1.12%513.4213.7-2.04%613.5213.31.65%713.4113.6-1.40%813.6614.3-4.48%913.7114.0-2.07%1013.6813.23.64%1113.7214.4-4.72%1213.6613.7-0.29%1313.4613.21.97%1413.6213.32.41%1513.6913.42.16%1613.6913.60.66%1713.6713.23.56%1813.8513.61.84%1913.6013.23.03%2012.6612.8-1.09%2110.6010.9-2.75%具體實(shí)施方式1.本發(fā)明的配方中nadh濃度與商品化血糖儀讀數(shù)的線性關(guān)系如圖1所示，證明可以用血糖儀讀數(shù)與nadh等輔酶濃度存在定量關(guān)系，而酶反應(yīng)發(fā)生后，nadh的消耗量與樣品中尿素或氨的濃度相關(guān)，因此可以通過(guò)血糖儀讀數(shù)來(lái)定量尿素或氨的濃度。2.本發(fā)明的配方中凍干粉的試劑穩(wěn)定性隨時(shí)間變化曲線如圖2所示，其測(cè)試方法如下：試劑凍干置于冰箱4℃保存，從凍干時(shí)間起，每隔一段時(shí)間取一個(gè)凍干試劑加入緩沖液，用電信號(hào)檢測(cè)儀進(jìn)行測(cè)試并記錄結(jié)果。3.本發(fā)明所提供的測(cè)試試劑及檢測(cè)儀器示意圖如圖3所示。4.以檢測(cè)牛奶中尿素含量為例，本發(fā)明的配方包含以下配制方法及使用方法：如圖4所示，將試劑各組分包括：0.5~500mmnadh鈉鹽、1~1000mmα-酮戊二酸二鈉鹽水合物、0.001~1000u/ml尿素酶、0.001~1000u/ml谷氨酸脫氫酶和ph5~9的磷酸鹽緩沖液（磷含量1~2000mm）。緩沖液?jiǎn)为?dú)保存，其他組分用水配制后凍干作為保存試劑。該試劑可于4℃下保存半年以上不變質(zhì)。取一凍干試劑，加入1:9~9:1體積比的緩沖液和牛奶，混合均勻后置于4~90℃加熱反應(yīng)1~60分鐘，待恢復(fù)至室溫，取一滴混合液，用商品化血糖儀直接進(jìn)行分析測(cè)定。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果：1.本發(fā)明的配方制備的試劑，可以與簡(jiǎn)單易得的商品化血糖儀連用，簡(jiǎn)便快速的測(cè)定牛奶、血液、尿液中尿素和氨的含量，測(cè)定結(jié)果與傳統(tǒng)測(cè)試方法結(jié)果基本一致2.本發(fā)明的檢測(cè)方法成本低廉，操作簡(jiǎn)單，可用于奶牛或病人現(xiàn)場(chǎng)便攜式檢測(cè)尿素和氨含量，操作人員無(wú)需具備專業(yè)技能。當(dāng)前第1頁(yè)12