本發(fā)明涉及一種評估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒及其使用方法，屬于醫(yī)學和生物學檢測領域。

背景技術(shù)：
據(jù)世界衛(wèi)生組織評估，目前每7對夫婦中約有1對夫婦存在生殖障礙問題，主要表現(xiàn)為流產(chǎn)或不孕。關(guān)注生殖健康是國家發(fā)展的重要部分。研究表明，子宮內(nèi)膜容受性的改變可能是導致生殖障礙的主要因素之一。子宮內(nèi)膜容受性是指子宮內(nèi)膜接受胚胎的能力，指子宮內(nèi)膜處于一種允許胚胎定位、黏附和侵入的狀態(tài)。該時期又被稱為子宮內(nèi)膜的種植窗期。如果種植窗期子宮內(nèi)膜對胚胎的容受性發(fā)生異常，其對胚胎發(fā)生排斥反應，進而不允許胚胎正常著床發(fā)育，這一狀態(tài)將會導致流產(chǎn)或不孕等不良妊娠結(jié)局。因此，子宮內(nèi)膜容受性的評估對于生殖障礙患者的診治具有重要意義。目前，臨床中子宮內(nèi)膜容受性的評估手段主要是形態(tài)學評估。其評估指標包括三大類：(1)子宮內(nèi)膜厚度、回聲和血流等超聲形態(tài)；(2)腺體大小、間質(zhì)疏密和血管豐度等組織活檢形態(tài)；(3)子宮內(nèi)膜胞飲突。然而，形態(tài)學評估子宮內(nèi)膜容受性存在一定爭議。因為，子宮內(nèi)膜容受性由一系列細胞和細胞因子相互作用調(diào)控，細胞及其分泌的細胞因子在與胚胎接觸過程中發(fā)揮重要作用。但是，子宮內(nèi)膜的形態(tài)學表征并不能準確反映其細胞和細胞因子的表達情況。在此背景下，子宮內(nèi)膜活檢結(jié)合分子檢測等新的評估手段開始發(fā)展。因此，子宮內(nèi)膜容受性生物標記物的研究越來越受到重視。研究表明，子宮內(nèi)膜免疫細胞在其容受性調(diào)控中發(fā)揮重要作用。子宮內(nèi)膜免疫細胞主要包括自然殺傷細胞、巨噬細胞、T細胞和樹突狀細胞等四大類。并且，各類免疫細胞又分為不同的亞群，在子宮內(nèi)膜容受性調(diào)節(jié)中發(fā)揮不同的作用。自然殺傷細胞作為子宮內(nèi)膜中主要的免疫細胞，通過促進滋養(yǎng)層細胞侵入、支持螺旋動脈重構(gòu)以及調(diào)控自身殺傷能力等途徑調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性，參與胚胎種植。巨噬細胞在子宮內(nèi)膜局部及系統(tǒng)激素的調(diào)節(jié)下可以進行亞群的轉(zhuǎn)換，在種植過程中既可以清除病原體，又可以誘導子宮內(nèi)膜對胚胎的免疫耐受，進而維持成功妊娠。T細胞主要包括輔助性T細胞、殺傷性T細胞以及調(diào)節(jié)性T細胞。其中，輔助性T細胞主要通過分泌細胞因子，調(diào)控子宮內(nèi)膜的分化，為胚胎種植做好準備；殺傷性T細胞主要通過調(diào)控滋養(yǎng)層細胞侵入與分泌毒性顆粒的平衡參與種植過程；而調(diào)節(jié)性T細胞發(fā)揮免疫抑制作用，其通過抑制子宮內(nèi)膜對胚胎的過度炎癥反應，進而維持繼續(xù)妊娠。樹突狀細胞作為重要的抗原提呈細胞，根據(jù)其成熟程度可以分為兩類：未成熟樹突狀細胞和成熟樹突狀細胞。未成熟樹突狀細胞在妊娠中發(fā)揮免疫耐受作用，而成熟樹突狀細胞在妊娠中發(fā)揮免疫排斥作用，因此，兩者的平衡在子宮內(nèi)膜接受胚胎過程中同樣發(fā)揮著必不可少的作用。以上研究結(jié)果表明，子宮內(nèi)膜容受性的調(diào)控因素并不是單一的，而是各種免疫細胞相互作用，相互平衡的結(jié)果。但是，目前國內(nèi)外以子宮內(nèi)膜免疫細胞作為其容受性評估指標時，多是檢測其中一種免疫細胞，并且檢測方法各異，分析結(jié)果不統(tǒng)一、波動性大。根據(jù)這些結(jié)果，臨床醫(yī)生不能對患者子宮內(nèi)膜容受性進行準確評估，故而無法制定完善的治療方案。因此，開發(fā)穩(wěn)定可靠的子宮內(nèi)膜多種免疫細胞檢測試劑盒可以對子宮內(nèi)膜容受性進行準確評估，為患者的診療提供可靠依據(jù)。目前針對子宮內(nèi)膜免疫細胞數(shù)量的檢測方法主要有流式細胞術(shù)和免疫組織化學檢測兩種方法。但是，流式細胞術(shù)不能對子宮內(nèi)膜細胞的定位情況進行分析，并且在制備細胞懸液的過程中存在細胞和抗原丟失等問題。因此，免疫組織化學染色方法成為了更好的選擇。在臨床上，免疫組織化學染色已經(jīng)在腫瘤病理診斷中得到了廣泛應用，涉及領域包括腫瘤組織起源的鑒別、未分化惡性腫瘤性質(zhì)的判定、各種形態(tài)系統(tǒng)腫瘤鑒別、確定腫瘤原發(fā)部位等。其原理是用標記的抗體對細胞或組織內(nèi)的相應抗原進行定位、定性或定量檢測，經(jīng)過組織化學的呈色反應而呈現(xiàn)醒目的陽性色彩，在光學顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下進行人工計數(shù)，或者采用顯微鏡采集圖像并結(jié)合病理圖片分析軟件對其進行定量分析。但迄今為止，市面上尚未用于評估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的，是提供一種評估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒及其使用方法。該試劑盒用于評估子宮內(nèi)膜容受性，具有操作簡單、靈敏性高、特異性強等特點，且檢測結(jié)果準確、客觀、快捷。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種評估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒，包括盒體和設置在所述盒體側(cè)面開口處的盒蓋，所述盒體的底部和四周側(cè)壁設有隔熱板，所述盒蓋內(nèi)壁設有隔熱板，在盒體、盒蓋的外端面上相對應的分別設有磁性下鎖扣與磁性上鎖扣，所述盒體內(nèi)部設有泡沫墊和1份使用說明書，所述泡沫墊上設有2個對照標準品、21瓶試劑、抗原修復粉劑、pH試紙、載玻片和蓋玻片，2個對照標準品分別為陽性對照標準品和陰性對照標準品，21瓶試劑分別為8瓶一抗儲存液、1瓶二抗儲存液、1瓶抗體稀釋液、1瓶PBS片劑、1瓶吐溫-20、1瓶過氧化物酶失活劑儲存液、1瓶非特異性蛋白阻斷粉劑、1瓶顯色液儲存液、1瓶顯色液稀釋液、4瓶復染液和1瓶封片劑。在上述技術(shù)方案的基礎上，本發(fā)明還可以做如下改進。進一步，所述泡沫墊包括位于盒體內(nèi)部靠上的第一泡沫墊、位于盒體內(nèi)部居中的第二泡沫墊和位于盒體內(nèi)部靠下的第三泡沫墊，且所述第一泡沫墊、第二泡沫墊和第三泡沫墊上下平行設置，所述第一泡沫墊上開設有6個分別放置pH試紙、載玻片、蓋玻片、陽性對照標準品、陰性對照標準品和抗原修復粉劑且與上述物品的長度相適配的腔體，在腔體的長度方向的壁體上并且在彼此對應的位置各凹設有兩個指腔，所述第二泡沫墊上開有14個分別放置8瓶一抗儲存液、二抗儲存液、PBS片劑、過氧化物酶失活劑儲存液、非特異性蛋白阻斷粉劑、顯色液儲存液和封片劑的圓形的凹槽，所述第三泡沫墊上開有7個分別放置抗體稀釋液、吐溫-20、顯色液稀釋液和4瓶復染液的圓形的凹槽。進一步，每個所述指腔形狀均為半球形。進一步，所述陽性對照標準品為正常育齡婦女子宮內(nèi)膜組織石蠟塊，所述陰性對照標準品為不含一抗的5％BSA孵育的子宮內(nèi)膜組織石蠟塊。進一步，所述一抗儲存液為100×抗人自然殺傷細胞表面分子CD56的抗體、100×抗人巨噬細胞表面分子CD68的抗體、100×抗人T細胞表面分子CD3的抗體、100×抗人輔助性T細胞表面分子CD4的抗體、100×抗人殺傷性T細胞表面分子CD8的抗體、100×抗人調(diào)節(jié)性T細胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的抗體、100×抗人未成熟樹突狀細胞表面分子CD1a的抗體、100×抗人成熟樹突狀細胞表面分子CD83的抗體，所述二抗儲存液為100×辣根過氧化物酶標記的IgG抗體，所述過氧化物酶失活劑儲存液為30％v/v過氧化氫溶液，所述非特異性蛋白阻斷粉劑為白蛋白粉，所述顯色液儲存液為50×DAB溶液，所述復染液為蘇木素，所述封片劑為中性樹膠，所述抗原修復粉劑為Tris/EDTA。進一步，所述陽性對照標準品為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述陰性對照標準品為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述一抗儲存液為黑色帽的白色PE塑料管，所述二抗儲存液為黑色帽的白色PE塑料管，所述抗體稀釋液為紅色帽的黑色PE塑料瓶，所述PBS片劑為灰色帽的紅色PE塑料瓶，所述吐溫-20為黃色帽的灰色PE塑料瓶，所述過氧化物酶失活劑儲存液為綠色帽的黃色PE塑料管，所述非特異性蛋白阻斷粉劑為藍色帽的綠色PE塑料瓶，所述顯色液儲存液為紫色帽的藍色PE塑料管，所述顯色液稀釋液為白色帽的紫色PE塑料瓶，所述復染液為綠色帽的黑色PE塑料瓶，所述封片劑為紅色帽的黃色PE塑料管。進一步，所述pH試紙為100張，所述載玻片為400張，所述蓋玻片為400張，所述陽性對照標準品為1塊，7g，所述陰性對照標準品為1塊，7g，所述一抗儲存液為8管，每管各50μL，所述二抗儲存液為1管，300μL，所述抗體稀釋液為1瓶，50mL，所述PBS片劑為1瓶，15片，所述吐溫-20為1瓶，10mL，所述過氧化物酶失活劑儲存液為1管，5mL，所述非特異性蛋白阻斷粉劑為1瓶，10g，所述顯色液儲存液為1管，600μL，所述顯色液稀釋液為1瓶，30mL，所述復染液為4瓶，20mL/瓶，所述封片劑為1管，10mL，所述抗原修復粉劑分為20個試劑袋袋裝，每袋1.58g。一種如上任一項所述的試劑盒的使用方法，包括如下步驟：(1)工作液配制：片劑、粉劑溶解，儲存液稀釋如下：a、PBS片劑溶解：將1片PBS片劑溶于1000mL超純水中，得到1×PBS溶液，將1片PBS片劑溶于1000mL超純水中，加500uL吐溫-20，得到1×PBST溶液；b、非特異性蛋白阻斷粉劑溶解：取0.5g白蛋白粉溶于10mL步驟(1)a所得1×PBST溶液中，得到5％v/v的非特異性蛋白阻斷劑工作液；c、抗原修復粉劑溶解：取1袋1.58gTris/EDTA溶于1000mL超純水中，加入0.5mL吐溫-20，用pH試紙監(jiān)測溶液pH值，調(diào)整pH至9.0，得到抗原修復劑工作液；d、一抗儲存液稀釋：分別取100×抗人自然殺傷細胞表面分子CD56的抗體、100×抗人巨噬細胞表面分子CD68的抗體、100×抗人T細胞表面分子CD3的抗體、100×抗人輔助性T細胞表面分子CD4的抗體、100×抗人殺傷性T細胞表面分子CD8的抗體、100×抗人調(diào)節(jié)性T細胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的抗體、100×抗人未成熟樹突狀細胞表面分子CD1a的抗體、100×抗人成熟樹突狀細胞表面分子CD83的抗體，加抗體稀釋液稀釋100倍，得到一抗工作液；e、二抗儲存液稀釋：取100×辣根過氧化物酶標記的IgG抗體，加抗體稀釋液稀釋100倍，得到二抗工作液；f、過氧化物酶滅活劑儲存液稀釋：取30％v/v的過氧化氫溶液，加超純水稀釋10倍，得到3％v/v的過氧化物酶滅活劑工作液；(2)石蠟切片脫蠟：將取自活體的人體的子宮內(nèi)膜的待測樣本、陽性對照標準品和陰性對照標準品的各8張切片先放入250mL二甲苯中浸泡10min，再放入另一份250mL二甲苯中浸泡5min，無水酒精與二甲苯等體積混合溶液中浸泡3min，得到脫蠟后切片；(3)水化：將步驟(2)所得脫蠟后切片，依次放入100％酒精浸泡2min，95％酒精浸泡2min，另一份95％酒精浸泡2min，80％酒精浸泡2min，然后用步驟(1)a所述的1×PBS溶液沖洗3min，得到水化后的切片；(4)內(nèi)源性過氧化物酶失活：將步驟(3)所得水化后的切片，甩去多余的液體，浸泡在步驟(1)f所得過氧化物酶滅活劑工作液中15min，再用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到內(nèi)源性過氧化物酶滅活后的切片；(5)抗原修復：將步驟(1)c所得抗原修復劑工作液放入耐高溫容器中，再將步驟(4)所得內(nèi)源性過氧化物酶滅活后的切片置于其中，煮沸15min，放置室溫冷卻，然后用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到抗原修復后的切片；(6)封閉：將步驟(5)所得抗原修復后切片，甩去多余的液體，滴加步驟(1)b所得非特異性蛋白阻斷劑工作液，室溫孵育20min，得到非特異性蛋白封閉后的切片；(7)一抗孵育：將步驟(6)所得非特異性蛋白封閉切片，除陰性對照標準品外，待測樣本和陽性對照標準品的各8張切片均甩去步驟(1)b所得非特異性蛋白阻斷劑工作液，并分別滴加步驟(1)d所得一抗工作液，37℃水浴孵育60min，然后用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，然后用步驟(1)a所得1×PBST溶液沖洗3min，得到一抗后的切片；(8)二抗孵育：將步驟(7)所得一抗后的切片，甩去多余的液體，滴加步驟(1)e所得二抗工作液，37℃水浴孵育30min，甩去二抗工作液，然后使用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到二抗后的切片；(9)顯色：a、顯色液儲存液稀釋：取50×DAB溶液，加顯色液稀釋液稀釋50倍，得到顯色液工作液；b、將步驟(8)所得二抗后的切片，甩去多余的液體，滴加步驟(9)a所得顯色液工作液進行顯色，得到顯色后的切片；(10)復染、分化、返藍：將步驟(9)所得顯色后的切片，甩去顯色液工作液，滴加復染液復染4min、1％v/v鹽酸酒精分化20s、1％v/v氨水中返藍30s，得到返藍后的切片；(11)脫水、透明化：將步驟(10)所得返藍后的切片，依次放入70％酒精浸泡2min、80％酒精浸泡2min、95％酒精浸泡2min、100％酒精浸泡2min，脫水后轉(zhuǎn)入二甲苯溶液浸泡3min，再轉(zhuǎn)入另一份二甲苯溶液10min，最后轉(zhuǎn)入另一份二甲苯溶液5min進行透明化處理，得到透明化后的切片；(12)封片：將步驟(11)所得透明化后的切片，甩去多余的液體，用封片劑封片，得到免疫組織化學染色切片，然后采用成像顯微鏡和病理圖片分析軟件分析結(jié)果，評估子宮內(nèi)膜容受性是否異常。在上述技術(shù)方案的基礎上，本發(fā)明還可以做如下改進。進一步，步驟(2)所述待測樣品為取自活體的人體的子宮內(nèi)膜。本發(fā)明的有益效果是：1.安全性高：本發(fā)明的試劑盒，在第一泡沫墊上上設置腔體，可供物品容納并對物品限定，以避免在運輸之類的環(huán)節(jié)中震損諸如載玻片、蓋玻片這些易損物品；通過在腔體的對應壁體上凹設的指腔，可有利于操作人員方便而可靠地拿取這些物品。2.密封性好：本發(fā)明的試劑盒，在盒蓋和盒體相應設置了磁性鎖合裝置，試劑盒的密封性好，便于移動和運輸。3.使用方便：本發(fā)明的試劑盒，盒體的開口設在側(cè)面，有利于試劑的取出，用到哪一層的試劑，就取出哪一層的泡沫墊，而不必像頂部開口的試劑盒，要一層層地取出泡沫墊。4.市場前景廣闊：本發(fā)明的試劑盒，具有操作簡單、靈敏性高、特異性強等特點，且檢測結(jié)果準確、客觀、快捷，能大大提高子宮內(nèi)膜容受性的評估效率，且結(jié)構(gòu)簡單、設計合理、容易制造，市場需求量大，適于規(guī)?；a(chǎn)。附圖說明圖1為本發(fā)明打開盒蓋后的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中，各標號所代表的部件列表如下：1、盒體，2、盒蓋，3、隔熱板，4、磁性下鎖扣，5、磁性上鎖扣，6、泡沫墊，61、第一泡沫墊，62、第二泡沫墊，63、第三泡沫墊，7、pH試紙，8、載玻片，9、蓋玻片，10、陽性對照標準品，11、陰性對照標準品，12、一抗儲存液，13、二抗儲存液，14、抗體稀釋液，15、PBS片劑，16、吐溫-20，17、過氧化物酶失活劑儲存液，18、非特異性蛋白阻斷粉劑，19、顯色液儲存液，20、顯色液稀釋液，21、復染液，22、封片劑，23、抗原修復粉劑。圖2為本發(fā)明在子宮內(nèi)膜容受性評估中的檢測應用。圖中，(A)為子宮內(nèi)膜自然殺傷細胞染色圖片，(B)為子宮內(nèi)膜巨噬細胞染色圖片，(C)為子宮內(nèi)膜T細胞染色圖片，(D)為子宮內(nèi)膜輔助性T細胞染色圖片，(E)為子宮內(nèi)膜殺傷性T細胞染色圖片，(F)為子宮內(nèi)膜調(diào)節(jié)性T細胞染色圖片，(G)為子宮內(nèi)膜未成熟樹突狀細胞染色圖片，(H)為子宮內(nèi)膜成熟樹突狀細胞染色圖片。具體實施方式以下結(jié)合附圖對本發(fā)明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。如圖1所示，一種評估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒，包括盒體1和設置在所述盒體1側(cè)面開口處的盒蓋2，所述盒體1的底部和四周側(cè)壁設有隔熱板3，所述盒蓋2內(nèi)壁設有隔熱板3，在盒體1、盒蓋2的外端面上相對應的分別設有磁性下鎖扣4與磁性上鎖扣5，所述盒體1內(nèi)部設有泡沫墊6和1份使用說明書，所述泡沫墊6上設有2個對照標準品、21瓶試劑、抗原修復粉劑23、pH試紙7、載玻片8和蓋玻片9，2個對照標準品分別為陽性對照標準品10和陰性對照標準品11，21瓶試劑分別為8瓶一抗儲存液12、1瓶二抗儲存液13、1瓶抗體稀釋液14、1瓶PBS片劑15、1瓶吐溫-2016、1瓶過氧化物酶失活劑儲存液17、1瓶非特異性蛋白阻斷粉劑18、1瓶顯色液儲存液19、1瓶顯色液稀釋液20、4瓶復染液21和1瓶封片劑22。所述泡沫墊6包括位于盒體1內(nèi)部靠上的第一泡沫墊61、位于盒體1內(nèi)部居中的第二泡沫墊62和位于盒體1內(nèi)部靠下的第三泡沫墊63，且所述第一泡沫墊61、第二泡沫墊62和第三泡沫墊63上下平行設置，所述第一泡沫墊61上開設有6個分別放置pH試紙7、載玻片8、蓋玻片9、陽性對照標準品10、陰性對照標準品11和抗原修復粉劑23且與上述物品的長度相適配的腔體611，在腔體611的長度方向的壁體上并且在彼此對應的位置各凹設有兩個指腔6111，所述第二泡沫墊62上開有14個分別放置8瓶一抗儲存液12、二抗儲存液13、PBS片劑15、過氧化物酶失活劑儲存液17、非特異性蛋白阻斷粉劑18、顯色液儲存液19和封片劑22的圓形的凹槽，所述第三泡沫墊63上開有7個分別放置抗體稀釋液14、吐溫-2016、顯色液稀釋液20和4瓶復染液21的圓形的凹槽。每個所述指腔6111形狀均為半球形所述陽性對照標準品10為正常育齡婦女子宮內(nèi)膜組織石蠟塊，所述陰性對照標準品11為不含一抗的5％BSA孵育的子宮內(nèi)膜組織石蠟塊。所述一抗儲存液12為100×抗人自然殺傷細胞表面分子CD56的抗體、100×抗人巨噬細胞表面分子CD68的抗體、100×抗人T細胞表面分子CD3的抗體、100×抗人輔助性T細胞表面分子CD4的抗體、100×抗人殺傷性T細胞表面分子CD8的抗體、100×抗人調(diào)節(jié)性T細胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的抗體、100×抗人未成熟樹突狀細胞表面分子CD1a的抗體、100×抗人成熟樹突狀細胞表面分子CD83的抗體，所述二抗儲存液13為100×辣根過氧化物酶標記的IgG抗體，所述過氧化物酶失活劑儲存液17為30％v/v過氧化氫溶液，所述非特異性蛋白阻斷粉劑18為白蛋白粉，所述顯色液儲存液19為50×DAB溶液，所述復染液21為蘇木素，所述封片劑22為中性樹膠，所述抗原修復粉劑23為Tris/EDTA。所述陽性對照標準品10為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述陰性對照標準品11為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述一抗儲存液12為黑色帽的白色PE塑料管，所述二抗儲存液13為黑色帽的白色PE塑料管，所述抗體稀釋液14為紅色帽的黑色PE塑料瓶，所述PBS片劑15為灰色帽的紅色PE塑料瓶，所述吐溫-2016為黃色帽的灰色PE塑料瓶，所述過氧化物酶失活劑儲存液17為綠色帽的黃色PE塑料管，所述非特異性蛋白阻斷粉劑18為藍色帽的綠色PE塑料瓶，所述顯色液儲存液19為紫色帽的藍色PE塑料管，所述顯色液稀釋液20為白色帽的紫色PE塑料瓶，所述復染液21為綠色帽的黑色PE塑料瓶，所述封片劑22為紅色帽的黃色PE塑料管。所述pH試紙7為100張，所述載玻片8為400張，所述蓋玻片9為400張，所述陽性對照標準品10為1塊，7g，所述陰性對照標準品11為1塊，7g，所述一抗儲存液12為8管，每管各50μL，所述二抗儲存液13為1管，300μL，所述抗體稀釋液14為1瓶，50mL，所述PBS片劑15為1瓶，15片，所述吐溫-2016為1瓶，10mL，所述過氧化物酶失活劑儲存液17為1管，5mL，所述非特異性蛋白阻斷粉劑18為1瓶，10g，所述顯色液儲存液19為1管，600μL，所述顯色液稀釋液20為1瓶，30mL，所述復染液21為4瓶，20mL/瓶，所述封片劑22為1管，10mL，所述抗原修復粉劑23分為20個試劑袋袋裝，每袋1.58g。一種如上任一項所述的試劑盒的使用方法，包括如下步驟：(1)工作液配制：片劑、粉劑溶解，儲存液稀釋如下：a、PBS片劑15溶解：將1片PBS片劑15溶于1000mL超純水中，得到1×PBS溶液，將1片PBS片劑15溶于1000mL超純水中，加500uL吐溫-2016，得到1×PBST溶液；b、非特異性蛋白阻斷粉劑18溶解：取0.5g白蛋白粉溶于10mL步驟(1)a所得1×PBST溶液中，得到5％v/v的非特異性蛋白阻斷劑工作液；c、抗原修復粉劑23溶解：取1袋1.58gTris/EDTA溶于1000mL超純水中，加入0.5mL吐溫-2016，用pH試紙7監(jiān)測溶液pH值，調(diào)整pH至9.0，得到抗原修復劑工作液；d、一抗儲存液12稀釋：分別取100×抗人自然殺傷細胞表面分子CD56的抗體、100×抗人巨噬細胞表面分子CD68的抗體、100×抗人T細胞表面分子CD3的抗體、100×抗人輔助性T細胞表面分子CD4的抗體、100×抗人殺傷性T細胞表面分子CD8的抗體、100×抗人調(diào)節(jié)性T細胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的抗體、100×抗人未成熟樹突狀細胞表面分子CD1a的抗體、100×抗人成熟樹突狀細胞表面分子CD83的抗體，加抗體稀釋液14稀釋100倍，得到一抗工作液；e、二抗儲存液13稀釋：取100×辣根過氧化物酶標記的IgG抗體，加抗體稀釋液14稀釋100倍，得到二抗工作液；f、過氧化物酶滅活劑儲存液17稀釋：取30％v/v的過氧化氫溶液，加超純水稀釋10倍，得到3％v/v的過氧化物酶滅活劑工作液；(2)石蠟切片脫蠟：將取自活體的人體的子宮內(nèi)膜的待測樣本、陽性對照標準品10和陰性對照標準品11的各8張切片先放入250mL二甲苯中浸泡10min，再放入另一份250mL二甲苯中浸泡5min，無水酒精與二甲苯等體積混合溶液中浸泡3min，得到脫蠟后切片；(3)水化：將步驟(2)所得脫蠟后切片，依次放入100％酒精浸泡2min，95％酒精浸泡2min，另一份95％酒精浸泡2min，80％酒精浸泡2min，然后用步驟(1)a所述的1×PBS溶液沖洗3min，得到水化后的切片；(4)內(nèi)源性過氧化物酶失活：將步驟(3)所得水化后的切片，甩去多余的液體，浸泡在步驟(1)f所得過氧化物酶滅活劑工作液中15min，再用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到內(nèi)源性過氧化物酶滅活后的切片；(5)抗原修復：將步驟(1)c所得抗原修復劑工作液放入耐高溫容器中，再將步驟(4)所得內(nèi)源性過氧化物酶滅活后的切片置于其中，煮沸15min，放置室溫冷卻，然后用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到抗原修復后的切片；(6)封閉：將步驟(5)所得抗原修復后切片，甩去多余的液體，滴加步驟(1)b所得非特異性蛋白阻斷劑工作液，室溫孵育20min，得到非特異性蛋白封閉后的切片；(7)一抗孵育：將步驟(6)所得非特異性蛋白封閉切片，除陰性對照標準品11外，待測樣本和陽性對照標準品10的各8張切片均甩去步驟(1)b所得非特異性蛋白阻斷劑工作液，并分別滴加步驟(1)d所得一抗工作液，37℃水浴孵育60min，然后用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，然后用步驟(1)a所得1×PBST溶液沖洗3min，得到一抗后的切片；(8)二抗孵育：將步驟(7)所得一抗后的切片，甩去多余的液體，滴加步驟(1)e所得二抗工作液，37℃水浴孵育30min，甩去二抗工作液，然后使用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到二抗后的切片；(9)顯色：a、顯色液儲存液19稀釋：取50×DAB溶液，加顯色液稀釋液20稀釋50倍，得到顯色液工作液；b、將步驟(8)所得二抗后的切片，甩去多余的液體，滴加步驟(9)a所得顯色液工作液進行顯色，得到顯色后的切片；(10)復染、分化、返藍：將步驟(9)所得顯色后的切片，甩去顯色液工作液，滴加復染液21復染4min、1％v/v鹽酸酒精分化20s、1％v/v氨水中返藍30s，得到返藍后的切片；(11)脫水、透明化：將步驟(10)所得返藍后的切片，依次放入70％酒精浸泡2min、80％酒精浸泡2min、95％酒精浸泡2min、100％酒精浸泡2min，脫水后轉(zhuǎn)入二甲苯溶液浸泡3min，再轉(zhuǎn)入另一份二甲苯溶液10min，最后轉(zhuǎn)入另一份二甲苯溶液5min進行透明化處理，得到透明化后的切片；(12)封片：將步驟(11)所得透明化后的切片，甩去多余的液體，用封片劑22封片，得到免疫組織化學染色切片，然后采用成像顯微鏡和病理圖片分析軟件分析結(jié)果，評估子宮內(nèi)膜容受性是否異常。采用成像顯微鏡和病理圖片分析軟件評估子宮內(nèi)膜容受性是否異常，具體操作如下：采用成像顯微鏡采集不重疊的20個視野的200倍圖片；將所得8種免疫細胞的圖片導入病理圖片定量分析系統(tǒng)中進行分析。在病理圖片定量分析系統(tǒng)中，設定細胞的大小為55～400像素，細胞核的蘇木素染色強度需大于0.15，系統(tǒng)綜合兩個指標對所采集圖片中總細胞進行識別并計數(shù)；組織中陽性細胞呈現(xiàn)醒目的棕黃色，系統(tǒng)將顯示陽性細胞棕黃色的光密度值，系統(tǒng)將大于此值的所有細胞識別為陽性細胞并計數(shù)；根據(jù)陽性細胞數(shù)和總細胞數(shù)計算陽性細胞率。將待測樣本的8種免疫細胞率與參考范圍進行比較，進而判斷待測樣本的子宮內(nèi)膜容受性。其中，自然殺傷細胞率參考范圍為0.97～21.15％；巨噬細胞率參考范圍為0.5～2.65％，T細胞率參考范圍為1.12～9.10％，輔助性T細胞率參考范圍為0.10～0.50％，殺傷性T細胞率參考范圍為0.81～5.45％，調(diào)節(jié)性T細胞率參考范圍為0.05～0.26％，未成熟樹突狀細胞率參考范圍為0.006～0.140％，成熟樹突狀細胞率參考范圍為0.07～4.01％。當待測樣本的任一免疫細胞率超過其參考范圍時，提示該待測樣本的子宮內(nèi)膜容受性異常。如圖2所示，子宮內(nèi)膜免疫細胞定量檢測試劑盒在子宮內(nèi)膜容受性評估中的應用，其中，(A)為自然殺傷細胞，其細胞核周圍呈現(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞中，細胞率為5.82％；(B)為巨噬細胞，其細胞核周圍呈現(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞中，細胞率為0.7％；(C)為T細胞，其細胞核周圍呈現(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞中，細胞率為2.19％；(D)為輔助性T細胞，其細胞核周圍呈現(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞中，細胞率為0.3％；(E)為殺傷性T細胞，其細胞核周圍呈現(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞中，細胞率為1.64％；(F)為調(diào)節(jié)性T細胞，其細胞核內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色，零星分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞中，細胞率為0.02％；(G)為未成熟樹突狀細胞的，其細胞核周圍呈現(xiàn)棕黃色，分布于靠近腺體的位置，細胞率為0.044％；(H)為成熟樹突狀細胞，其細胞核周圍呈現(xiàn)棕黃色，并且細胞呈現(xiàn)兩種分布方式，即單個細胞分布以及成簇分布，細胞率為3.04％。其中，調(diào)節(jié)性T細胞率為0.02％，低于參考范圍0.05～0.26％，提示該樣本的子宮內(nèi)膜容受性異常。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)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