本發(fā)明涉及一種ns5a蛋白酶抑制劑雷迪帕韋的純度及其雜質(zhì)含量的檢測(cè)方法。技術(shù)背景雷迪帕韋(methyln-[(2s)-1-[(6s)-6-[5-[9,9-difluoro-7-[2-[(1s,2s,4r)-3-[(2s)-2-(methoxycarbonylamino)-3-methylbutanoyl]-3-azabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl]-3h-benzimidazol-5-yl]fluoren-2-yl]-1h-imidazol-2-yl]-5-azaspiro[2.4]heptan-5-yl]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]carbamate)是一種ns5a蛋白酶抑制劑，其cas號(hào)為：1256388-51-8，分子式為c49h54f2n8o6，分子量為：889.00，化學(xué)結(jié)構(gòu)為：雷迪帕韋是由吉利德公司新開發(fā)的一種具有pmol級(jí)活性的ns5a蛋白酶抑制劑。2014年2月10日，用于治療基因1型丙型肝炎的雷迪帕韋/索非布韋的固定劑量組合的片劑被美國(guó)藥典收錄，2014年10月10日組合產(chǎn)品雷迪替韋/索非布韋獲得美國(guó)fda批準(zhǔn)。作為剛剛上市的新藥，雷迪帕韋對(duì)丙型肝炎具有非常高的治療指數(shù)，但雷迪帕韋的藥物結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，它具有多個(gè)對(duì)映和非對(duì)映異構(gòu)體雜質(zhì)，現(xiàn)有的相關(guān)技術(shù)發(fā)明對(duì)其合成工藝和可能存在的雜質(zhì)已有說(shuō)明，但目前在雷迪帕韋的質(zhì) 量控制上尚無(wú)已公開的檢測(cè)方法，故本發(fā)明旨在提供一種雷迪帕韋的質(zhì)量控制方法，用于檢測(cè)雷迪帕韋的純度及其雜質(zhì)含量。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：作為剛剛上市的新藥，雷迪帕韋的藥物結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，它具有多個(gè)對(duì)映和非對(duì)映異構(gòu)體雜質(zhì)，目前，關(guān)于雷迪帕韋的合成工藝及其制劑工藝已有多篇相關(guān)的技術(shù)報(bào)道，對(duì)其可能存在的雜質(zhì)亦有相關(guān)研究，但在雷迪帕韋的質(zhì)量控制上尚無(wú)已公開的檢測(cè)方法，故本發(fā)明旨在提供一種能有效的控制雷迪帕韋的純度及其多個(gè)雜質(zhì)的含量的檢測(cè)方法。具體技術(shù)方案如下：在高效液相色譜儀上，用以八烷基硅烷鍵合硅膠或十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的反相色譜柱進(jìn)行分析，以酸水溶液和有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，對(duì)雷迪帕韋的樣品溶液進(jìn)行梯度洗脫，按面積歸一化法計(jì)算雷迪帕韋的純度及其多個(gè)雜質(zhì)含量；其中，洗脫梯度如下：洗脫時(shí)間(分鐘)酸水溶液有機(jī)溶劑0100～500～50a50～050～100b50～050～100c100～500～50其中，0＜a≤60分鐘，60＜b≤100分鐘，100＜c≤150分鐘。優(yōu)選洗脫梯度為：洗脫時(shí)間(分鐘)酸水溶液有機(jī)溶劑090～7010～30a35～1565～85b35～1565～85c90～7010～30其中，10＜a≤35分鐘，35＜b≤55分鐘，55＜c≤80分鐘。其中，色譜柱的填料粒徑為3.0μm～5.0μm之間，色譜柱長(zhǎng)為150mm～250mm之間，色譜柱直徑為2.0nm～4.6nm之間的色譜柱，優(yōu)選以八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，粒徑為3.5μm，色譜柱長(zhǎng)250mm，色譜柱直徑為4.0nm的色譜柱。其中，酸水溶液為三氟乙酸水溶液、甲酸水溶液、磷酸水溶液、甲烷磺酸水溶液中的一種或多種；有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、乙腈、異丙醇、四氫呋喃中的一種或多種，優(yōu)選乙腈和異丙醇。其中，酸水溶液的濃度為0.01％～90％之間，優(yōu)選濃度為0.01％～20％的酸水溶液；所述有機(jī)溶劑的濃度為1％～100％之間。樣品配制成含雷迪帕韋約0.5mg/ml的供試品溶液，照高效液相色譜法在配有dad檢測(cè)器的反相高效液相色譜儀上進(jìn)行檢測(cè)，用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，粒徑為3.5μm，色譜柱長(zhǎng)150mm，色譜柱直徑為4.6nm的色譜柱進(jìn)行分析，在以甲烷磺酸/三氟乙酸/水為流動(dòng)相a，以甲醇/異丙醇/水為流動(dòng)相b的流動(dòng)相體系下進(jìn)行梯度洗脫，其中甲烷磺酸/三氟乙酸/水的體積比為10/1/89，甲醇/異丙醇/水的體積比為90/1/9，洗脫梯度如下：洗脫時(shí)間a相(％)b相(％)0min841625min257550min257560min8416檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫35℃，流速為0.8ml/min，取供試品溶液5ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計(jì)算雷迪帕韋的純度。10、根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于：樣品配制成含雷迪帕韋約0.5mg/ml的供試品溶液，照高效液相色譜法在配有dad檢測(cè)器的反相高效液相 色譜儀上進(jìn)行檢測(cè)，用以八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，粒徑為3.5μm，色譜柱長(zhǎng)250mm，色譜柱直徑為4.0nm的色譜柱進(jìn)行分析，在以5％磷酸水溶液為流動(dòng)相a，以乙腈為流動(dòng)相b的流動(dòng)相體系下進(jìn)行梯度洗脫，洗脫梯度如下：洗脫時(shí)間a相(％)b相(％)0min722832min307040min307050min7228檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫30℃，流速為0.9ml/min；取供試品溶液20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計(jì)算雷迪帕韋的純度。其中，多個(gè)雜質(zhì)分別為：雜質(zhì)1：雜質(zhì)2：雜質(zhì)3：雜質(zhì)4：有益效果：由上述各雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式及現(xiàn)有的已公開的雷迪帕韋的合成路線可知這些雜質(zhì)均是在合成工藝中可能產(chǎn)生的，且較難通過優(yōu)化工藝完全去除。鑒于目前尚無(wú)公開的關(guān)于雷迪帕韋的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明提供的技術(shù)方案，在發(fā)明過程中，顯示出對(duì)雷迪帕韋的多個(gè)雜質(zhì)的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)，故本發(fā)明可以為雷迪帕韋的純度及其雜質(zhì)含量的測(cè)定提供了一種準(zhǔn)確的、高效的檢測(cè)方法。附圖說(shuō)明圖1為實(shí)施例1的檢測(cè)結(jié)果示意圖，其中rt＝2.9min為雜質(zhì)1的峰，rt＝7.8min為雜質(zhì)4的峰，rt＝8.1min為雷迪帕韋的峰，rt＝9.2min為雜質(zhì)3的峰，rt＝13.1min為雜質(zhì)2的峰，其它均為未知雜質(zhì)峰；圖2為實(shí)施例2的檢測(cè)結(jié)果示意圖，其中，rt＝9.8min為雜質(zhì)1的峰，rt＝10.3min為雷迪帕韋的峰，rt＝10.5min為雜質(zhì)2的峰，rt＝11.0min為雜質(zhì)4的峰，rt＝11.2min為雜質(zhì)3的峰，其它均為未知雜質(zhì)峰；圖3為實(shí)施例3的檢測(cè)結(jié)果示意圖，其中，rt＝10.5min為雜質(zhì)2的峰，rt＝11.5min為雜質(zhì)1的峰，rt＝14.1min為雜質(zhì)4的峰，rt＝15.2min為雷迪帕韋的峰，rt＝15.8min為雜質(zhì)3的峰，其它均為未知雜質(zhì)峰。圖4為雜質(zhì)1的質(zhì)譜圖。圖5為雜質(zhì)2的質(zhì)譜圖。圖6為雜質(zhì)3的質(zhì)譜圖。圖7為雜質(zhì)4的質(zhì)譜圖。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不限于本實(shí)施的范圍。實(shí)施例1高效液相色譜儀：戴安u3000-dad檢測(cè)器流動(dòng)相：a相：甲烷磺酸/三氟乙酸/水(10/1/89)b相：甲醇/異丙醇/水(90/1/9)洗脫梯度：洗脫時(shí)間a相(％)b相(％)0min841625min257550min257560min8416色譜柱：kromasil100-5-c84.6*250mm檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm流速：0.8ml/min柱溫：35℃進(jìn)樣量：5ul樣品溶液配制：精密稱取樣品約10mg，置于20ml量瓶中，加初始流動(dòng)相溶液稀釋刻度，搖勻。檢測(cè)結(jié)果：結(jié)果參見附圖1，經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用，可得出圖4～圖7的質(zhì)譜圖分別為雜質(zhì)1～雜質(zhì)4，故可知在本實(shí)施例中rt＝2.9min為雜質(zhì)1的峰，rt＝7.8min為雜質(zhì)4的峰，rt＝8.1min為雷迪帕韋的峰，rt＝9.2min為雜質(zhì)3的峰，rt＝13.1min為雜質(zhì)2的峰，其它均為未知雜質(zhì)峰。實(shí)施例2高效液相色譜儀：agilent1100-dad檢測(cè)器流動(dòng)相：a：15％甲酸水溶液b：甲醇/乙腈(20/80)洗脫梯度：洗脫時(shí)間a相(％)b相(％)0min752545min109060min109065min7525色譜柱：agilentextend-c185um2.1*150mm檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm流速：0.5ml/min柱溫：30℃進(jìn)樣量：20ul樣品溶液配制：精密稱取樣品約25mg，置于50ml量瓶中，加初始流動(dòng)相溶液稀釋刻度，搖勻。檢測(cè)結(jié)果：結(jié)果參見附圖2，其中，rt＝9.8min為雜質(zhì)1的峰，rt＝10.3min為雷迪帕韋的峰，rt＝10.5min為雜質(zhì)2的峰，rt＝11.0min為雜質(zhì)4的峰，rt＝11.2min為雜質(zhì)3的峰，其它均為未知雜質(zhì)峰。實(shí)施例3高效液相色譜儀：agilent1260-dad檢測(cè)器流動(dòng)相：a：5％磷酸水溶液b：乙腈洗脫梯度：洗脫時(shí)間a相(％)b相(％)0min722832min307040min307050min7228色譜柱：kromatuniversilc184.0*150mm,3.5um檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm流速：0.9ml/min柱溫：30℃進(jìn)樣量：10ul樣品溶液配制：精密稱取樣品約15mg，置于25ml量瓶中，加初始流動(dòng)相溶液稀釋刻度，搖勻。檢測(cè)結(jié)果：結(jié)果參見附圖3，其中，rt＝10.5min為雜質(zhì)2的峰，rt＝11.5min為雜質(zhì)1的峰，rt＝14.1min為雜質(zhì)4的峰，rt＝15.2min為雷迪帕韋的峰，rt＝15.8min為雜質(zhì)3的峰，其它均為未知雜質(zhì)峰。當(dāng)前第1頁(yè)12