一種快速定量檢測(cè)gal-3 的免疫熒光試紙條的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型公開(kāi)了一種快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試紙條，它包括試紙條支撐片以及試紙條支撐片上順次搭接粘貼的樣品墊片、檢測(cè)膜和吸水墊片，樣品墊片和檢測(cè)膜之間設(shè)有偶合物墊片，偶合物墊片一端上方設(shè)有第一層玻璃纖維墊片，其一端下方設(shè)有第二層玻璃纖維墊片或者偶合物墊片一端上方僅設(shè)有第一層玻璃纖維墊片或者不設(shè)有任一墊片，所述檢測(cè)膜上設(shè)有檢測(cè)線(xiàn)，所述檢測(cè)線(xiàn)包被有半乳糖凝集素-3（GAL-3）抗體，所述檢測(cè)線(xiàn)另一邊設(shè)有控制線(xiàn)，控制線(xiàn)包被有抗鏈霉親和素（SAV）抗體，所述偶合物墊片上涂布有熒光標(biāo)記的GAL-3單克隆抗體或多克隆抗體偶合物。該試紙具有方便快捷、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適于臨床快速診斷。
【專(zhuān)利說(shuō)明】-種快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試紙條

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型屬于臨床醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，具體涉及一種用于定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒 光試紙條。

【背景技術(shù)】
[0002] 半乳糖凝集素-3( Galectin-3，Gal_3)也稱(chēng)半乳糖結(jié)合蛋白-3,分子量為31kD，是 半乳糖凝集素家族的重要成員之一。Galectin家族的成員需要滿(mǎn)足兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)：第一對(duì)-半 乳糖的親和力；第二在糖識(shí)別域（the carbohydrate recognition domain, CRD)有顯著序 列相似性。Galectin-3有兩個(gè)功能域：羧基端是糖識(shí)別域，包含了 135個(gè)氨基酸殘基；氨 基端包含100?150個(gè)氨基酸殘基，由富含脯氨酸和甘氨酸的9個(gè)氨基酸殘基串聯(lián)重復(fù)組 成。Galectin-3主要在巨噬細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及肥大細(xì)胞中表達(dá)。其功能依據(jù) 其在細(xì)胞內(nèi)的定位。在靜止細(xì)胞內(nèi)主要存在于胞漿，而在增殖細(xì)胞中則主要存在于細(xì)胞核。 Galectin-3參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)，抗凋亡，介導(dǎo)細(xì)胞黏附，參與血管形成及炎癥反應(yīng)等生物學(xué) 功能。研究表明半乳糖凝集素-3是心肌纖維化標(biāo)志物，與心力衰竭的發(fā)生和死亡風(fēng)險(xiǎn)增加 相關(guān)。心室功能障礙患者的半乳糖凝集素-3含量會(huì)升高，而且含量于心衰的嚴(yán)重程度直接 相關(guān)?？焖俣繖z測(cè)患者的半乳糖凝集素-3水平具有重大的臨床意義。
[0003] 目前，檢測(cè)半乳糖凝集素-3 (Gal-3)的方法目前主要是酶聯(lián)免疫技術(shù)（ELISA)， ELISA技術(shù)存在以下缺點(diǎn)：檢測(cè)設(shè)備要求高，成本高；干擾因素較多，重復(fù)性不好；檢測(cè)時(shí)間 長(zhǎng)。因此酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測(cè)半乳糖凝集素-3不適合臨床快速診斷。目前尚無(wú)快速的定量 檢測(cè)方法，因此如何能夠制作出快速的定量檢測(cè)試紙成為需要迫切解決的問(wèn)題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種能快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試 紙條，本實(shí)用新型所述快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試紙具有方便快捷、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果 準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適于臨床快速檢測(cè)。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型提供了一種快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光 試紙條，它包括試紙條支撐片以及試紙條支撐片上順次搭接粘貼的樣品墊片、檢測(cè)膜和吸 水墊片，所述樣品墊片和檢測(cè)膜之間設(shè)有偶合物墊片，偶合物墊片一端上方設(shè)有第一層玻 璃纖維墊片，其一端下方設(shè)有第二層玻璃纖維墊片或者偶合物墊片一端上方僅設(shè)有第一層 玻璃纖維墊片或者不設(shè)有任一墊片，所述檢測(cè)膜上設(shè)有檢測(cè)線(xiàn)，所述檢測(cè)線(xiàn)包被有半乳糖 凝集素-3 (GAL-3)抗體，所述檢測(cè)線(xiàn)另一邊設(shè)有控制線(xiàn)，控制線(xiàn)包被有抗鏈霉親和素（SAV) 抗體，所述偶合物墊片上涂布有熒光標(biāo)記的半乳糖凝集素-3單克隆抗體或多克隆抗體偶 合物。
[0006] 所述控制線(xiàn)與檢測(cè)線(xiàn)平行設(shè)置于檢測(cè)膜上，并與偶合物墊片部分重疊或不重疊。
[0007] 采用如上技術(shù)方案后，其有益效果為：
[0008] 本實(shí)用新型所述的快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試紙的工作原理是：采用免疫 側(cè)流反應(yīng)原理，通過(guò)雙抗體夾心法制備而成。檢驗(yàn)時(shí)樣本中的GAL-3抗原首先與偶合墊上 的GAL-3抗體偶合物發(fā)生免疫反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物。其后免疫復(fù)合物隨著樣本在檢測(cè)膜 上層析流動(dòng)，當(dāng)免疫復(fù)合物層析至檢測(cè)膜上的檢測(cè)區(qū)（GAL-3檢測(cè)線(xiàn)）時(shí)，與預(yù)先包被在檢 測(cè)膜上的抗GAL-3抗體發(fā)生反應(yīng)從而被固定在檢測(cè)膜的檢測(cè)線(xiàn)上。樣本中的GAL-3越多， 檢測(cè)線(xiàn)上的復(fù)合物越多，條帶上的光密度值就越高。同時(shí)，在檢測(cè)過(guò)程中，未與GAL-3抗原 結(jié)合的熒光標(biāo)記的GAL-3抗體偶合物，當(dāng)層析至檢測(cè)膜的控制線(xiàn)時(shí)，免疫熒光偶合物會(huì)與 預(yù)先包被在檢測(cè)膜上的抗SAV抗體發(fā)生反應(yīng)從而被固定在對(duì)照區(qū)(控制線(xiàn)）上。
[0009] 當(dāng)反應(yīng)結(jié)束后，利用免疫熒光檢測(cè)儀將控制線(xiàn)和檢測(cè)線(xiàn)的光密度進(jìn)行分析，并將 所分析得到的結(jié)果進(jìn)行運(yùn)算，從而得到相對(duì)光密度值（RI)。然后檢測(cè)儀根據(jù)已預(yù)先設(shè)置在 檢測(cè)儀內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)GAL-3的濃度進(jìn)行計(jì)算并顯示結(jié)果，以ng/mL為單位表示。
[0010] 綜上所述，本實(shí)用新型所述快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試紙條，該試紙具有 方便快捷、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適于臨床快速診斷。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0011] 圖1是本實(shí)用新型所述快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0012] 其中：1_樣品墊片、2-檢測(cè)膜、3-吸水墊片、4-支撐片、5偶合物墊片、6-1第一層 玻璃纖維墊片、6-2第二層玻璃纖維墊片、7-檢測(cè)線(xiàn)、8-控制線(xiàn)。

【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，不能理解為是對(duì)本實(shí) 用新型的限制；
[0014] 制備快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試紙條：
[0015] 如圖1所示的免疫熒光試紙條結(jié)構(gòu)，一種快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試紙條， 它包括試紙條支撐片4以及試紙條支撐片上順次搭接粘貼的樣品墊片1、檢測(cè)膜2和吸水墊 片3,所述樣品墊片1和檢測(cè)膜2之間設(shè)有偶合物墊片5,偶合物墊片5 -端上方設(shè)有第一 層玻璃纖維墊片6-1，其一端下方設(shè)有第二層玻璃纖維墊片6-2或者偶合物墊片5 -端上 方僅設(shè)有第一層玻璃纖維墊片6-1或者不設(shè)有任一墊片，所述檢測(cè)膜2上設(shè)有檢測(cè)線(xiàn)7,所 述檢測(cè)線(xiàn)7包被有半乳糖凝集素-3 (GAL-3)抗體，所述檢測(cè)線(xiàn)7另一邊設(shè)有控制線(xiàn)8,控制 線(xiàn)8包被有抗鏈霉親和素（SAV)抗體，所述偶合物墊片5上涂布有熒光標(biāo)記的半乳糖凝集 素-3單克隆抗體或多克隆抗體偶合物。
[0016] 所述控制線(xiàn)8與檢測(cè)線(xiàn)7平行設(shè)置于檢測(cè)膜2上，并與偶合物墊片5部分重疊或 不重疊。
[0017] 其中，檢測(cè)膜2在熒光試紙中用于固定包被抗體，同時(shí)也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處；檢 測(cè)線(xiàn)7是將半乳糖凝集素-3 (GAL-3)抗體使用1*PBS、甲醇等緩沖液稀釋后，劃線(xiàn)于所述檢 測(cè)膜2上，干燥及烘烤后，即得；控制線(xiàn)8是將抗鏈霉親和素（SAV)抗體使用1*PBS、甲醇等 緩沖液稀釋后，劃線(xiàn)于所述檢測(cè)膜2上，干燥及烘烤后，即得。
[0018] 其中，所述偶合物墊片5的原材料為玻璃纖維濾膜，將用于制備偶合物墊片的玻 璃纖維濾膜放入預(yù)封閉緩沖液中浸泡后取出，干燥后，用包膜儀器將熒光標(biāo)記的半乳糖凝 集素-3單克隆抗體或多克隆抗體偶合物涂布在偶合物墊片5上，干燥即得。
[0019] 另外，所述樣品墊片1可對(duì)液態(tài)樣品起到初步過(guò)濾作用。將樣本墊片1用封閉液 浸泡后，干燥即得。
[0020] 將上述各組成部件按圖1所示結(jié)構(gòu)粘貼在支撐墊片4上，獲得快速定量檢測(cè)GAL-3 的免疫熒光試紙條。
[0021] 按以下步驟進(jìn)行檢測(cè)：1)抽取的病人血清、血漿或全血等待檢樣本，如低溫保存 樣本需恢復(fù)至室溫。2)將待測(cè)樣品加入樣本墊片1上，反應(yīng)。3)判讀，將所述免疫熒光試 紙置于免疫熒光檢測(cè)儀中判定結(jié)果。
【權(quán)利要求】
1. 一種快速定量檢測(cè)GAL-3的免疫熒光試紙條，它包括試紙條支撐片（4)以及試紙條 支撐片上順次搭接粘貼的樣品墊片（1)、檢測(cè)膜（2)和吸水墊片（3)，所述樣品墊片（1)和 檢測(cè)膜（2)之間設(shè)有偶合物墊片（5)，偶合物墊片（5)-端上方設(shè)有第一層玻璃纖維墊片 (6-1 )，其一端下方設(shè)有第二層玻璃纖維墊片（6-2)或者偶合物墊片（5) -端上方僅設(shè)有第 一層玻璃纖維墊片（6-1)或者不設(shè)有任一墊片，其特征在于：所述檢測(cè)膜（2)上設(shè)有檢測(cè)線(xiàn) (7 )，所述檢測(cè)線(xiàn)（7 )包被有半乳糖凝集素-3 (GAL-3)抗體，所述檢測(cè)線(xiàn)（7 )另一邊設(shè)有控制 線(xiàn)（8)，控制線(xiàn)（8)包被有抗鏈霉親和素（SAV)抗體，所述偶合物墊片（5)上涂布有熒光標(biāo)記 的半乳糖凝集素-3單克隆抗體或多克隆抗體偶合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫熒光試紙條，其特征在于：所述控制線(xiàn)（8)與檢測(cè)線(xiàn)（7) 平行設(shè)置于檢測(cè)膜（2)上，并與偶合物墊片（5)部分重疊或不重疊。
【文檔編號(hào)】G01N33/66GK203909046SQ201420197148
【公開(kāi)日】2014年10月29日 申請(qǐng)日期:2014年4月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月22日
【發(fā)明者】劉紅劍, 威廉姆.努特, 何小紅, 劉麗萍, 張丹 申請(qǐng)人:瑞萊生物科技（江蘇）有限公司