一種同時(shí)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶a2與c反應(yīng)蛋白含量的檢測(cè)方法及試劑盒的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種同時(shí)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含量的檢測(cè)方法及試劑盒，可用于缺血性腦卒中發(fā)生后評(píng)價(jià)神經(jīng)功能損傷程度和梗死體積的雙指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)。該試劑盒是以血漿脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)與C反應(yīng)蛋白(CRP)為檢測(cè)指標(biāo)，基于多孔板的雙抗體夾心法，標(biāo)記物為熒光物質(zhì)，例如熒光染料、鑭系元素或者量子點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)雙指標(biāo)的同時(shí)分析。
【專(zhuān)利說(shuō)明】-種同時(shí)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含量的 檢測(cè)方法及試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種采用板式發(fā)光法同時(shí)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂 酶A2(Lp-PLA2)與C反應(yīng)蛋白（CRP)含量的檢測(cè)試劑盒，從而對(duì)缺血性腦卒中的預(yù)防、病情 評(píng)估和/或預(yù)后進(jìn)行輔助判斷的試劑盒，其中，CRP的檢測(cè)下限為0. 1 μ g/ml，是一種高靈敏 度的CRP分析方法，具體地涉及一種同時(shí)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含量的 檢測(cè)方法及試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 缺血性腦卒中是臨床上的一種常見(jiàn)病、多發(fā)病，其常見(jiàn)的病因?yàn)閯?dòng)脈粥樣硬化導(dǎo) 致管腔狹窄和腦血栓形成，造成局部腦供血區(qū)血流中斷，發(fā)生腦組織缺血、缺氧、軟化壞死。 大量研究標(biāo)明動(dòng)脈粥樣硬化本身是一個(gè)炎癥的過(guò)程，持續(xù)的低水平炎癥預(yù)示著心腦血管疾 病發(fā)生的可能性。Lp-PLA2為新近發(fā)現(xiàn)的炎癥標(biāo)志物，屬于磷脂酶A2超家族中的非鈣離子 依賴(lài)型磷酸酯酶，主要由炎癥細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等）分泌，并受炎癥介質(zhì)的調(diào)節(jié)。 CRP是由肝臟合成的一種全身性炎癥反應(yīng)急性期的非特異性標(biāo)志物，是心腦血管疾病最強(qiáng) 有力的預(yù)測(cè)因子之一，對(duì)心血管、腦血管以及外周血管疾病有著最好的預(yù)測(cè)及預(yù)后效果。
[0003] 有研究表明，缺血性腦卒中發(fā)生后，患者LP-PLA2及CRP水平都明顯升高，其水平 隨神經(jīng)功能缺損程度增加而呈遞增趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)血清CRP水平對(duì)預(yù)測(cè)腦 梗死體積也具有重要意義。Lp-PLA2及CRP的同時(shí)檢測(cè)有助于更加全面地判斷腦梗的嚴(yán)重 程度并對(duì)其防治與預(yù)后提供實(shí)驗(yàn)室參考。
[0004] 目前對(duì)缺血性腦卒中的診斷尚未出現(xiàn)將LP-PLA2與CRP兩個(gè)指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合的檢測(cè) 方法。本發(fā)明通過(guò)對(duì)兩個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)實(shí)現(xiàn)對(duì)腦梗死體積和神經(jīng)功能缺損程度的判斷，為評(píng) 價(jià)病情及判斷預(yù)后提供了幫助。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明目的：本發(fā)明在于提供一種同時(shí)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含 量的檢測(cè)方法及試劑盒，通過(guò)建立一種雙指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的免疫分析方法，為缺血性腦卒中 的臨床分析，包括神經(jīng)功能缺損程度以及梗死體積大小的判斷，提供一種靈敏度高、精確性 好并且方便快速的試劑盒分析方法。
[0006] 技術(shù)方案：為解決上述技術(shù)目的，本發(fā)明提出一種同時(shí)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶 A2與C反應(yīng)蛋白含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟：在同時(shí)包被有抗Lp-PLA2單克隆抗體a與 抗CRP單克隆抗體c的微孔板上，加入Lp-PLA2與CRP標(biāo)準(zhǔn)品或EDTA抗凝血液離心后得到 的血清樣本到各自的微孔中，振蕩反應(yīng)后洗滌，加入熒光物質(zhì)標(biāo)記的抗Lp-PLA2單克隆抗 體b和熒光物質(zhì)標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體d，振蕩反應(yīng)，洗滌液洗滌；用熒光儀測(cè)定其熒光 強(qiáng)度cps，熒光強(qiáng)度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線即可確定樣品中Lp-PLA2與CRP含量。
[0007] 其中，所述的熒光物質(zhì)為熒光染料、鑭系螯合物或量子點(diǎn)中的任意一種。
[0008] 所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b分別識(shí)別Lp-PLA2的 不同表位且互不影響，其中，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b通 過(guò)單克隆雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備得到或者通過(guò)噬菌體抗體技術(shù)篩選得到。
[0009] 所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d分別識(shí)別CRP的不同表位且互 不影響，其中，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d通過(guò)單克隆雜交瘤細(xì)胞技 術(shù)制備得到或者通過(guò)噬菌體抗體技術(shù)篩選得到。
[0010] 所述的洗滌液為含〇· 05wt% TWEEN-20的0· 01M磷酸鹽緩沖液（1 XPBST)。
[0011] 具體地，抗Lp-PLA2單克隆抗體a和抗CRP單克隆抗體c混合后包被于板孔內(nèi)的 任意位置，且抗Lp-PLA2單克隆抗體b和抗Lp-PLA2單克隆抗體d用不同的熒光物質(zhì)標(biāo)記； 或者，抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c分別包被于板孔內(nèi)的不同位置，且抗 Lp-PLA2單克隆抗體b和抗Lp-PLA2單克隆抗體d用相同的熒光物質(zhì)標(biāo)記。
[0012] 本發(fā)明同時(shí)提供了一種一種同時(shí)檢測(cè)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白 含量的試劑盒，其包括如下部分：同時(shí)包被有抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體 c的微孔板、標(biāo)記熒光物質(zhì)的抗Lp-PLA2單克隆抗體b與標(biāo)記熒光物質(zhì)的抗CRP單克隆抗體 d溶液、Lp-PLA2與CRP陽(yáng)性質(zhì)控血清、Lp-PLA2與CRP陰性質(zhì)控血清和濃縮洗液。
[0013] 其中，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b分別識(shí)別 Lp-PLA2的不同表位且互不影響，其中，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克 隆抗體b通過(guò)單克隆雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備得到或者通過(guò)噬菌體抗體技術(shù)篩選得到。
[0014] 所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d分別識(shí)別CRP的不同表位且互 不影響，其中，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單克隆抗體d通過(guò)單克隆雜交瘤細(xì)胞技 術(shù)制備得到或者通過(guò)噬菌體抗體技術(shù)篩選得到。
[0015] 所述的Lp-PLA2與CRP陽(yáng)性質(zhì)控血清是在正常人血清中分別添加中添加 Lp-PLA2 與CRP標(biāo)準(zhǔn)品制得，添加量為正常血清中Lp-PLA2和CRP含量的臨界值的3倍；其中，正常 血清Lp-PLA2Lp-PLA2和CRP含量的的臨界值分別為175ng/ml和1 μ g/ml ;所述的Lp-PLA2 與CRP陰性質(zhì)控血清是正常人血清，其中，Lp-PLA2含量低于175ng/ml，CRP含量低于1 μ g/ ml 〇
[0016] 其中，所述方法或試劑盒中的濃縮洗液為含lwt % TWEEN-20的0. 2Μ磷酸鹽緩沖液 (20XPBST)。所述的洗滌液為含0. 05wt% TWEEN-20的0. 01M磷酸鹽緩沖液（1 XPBST)。
[0017] 有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有優(yōu)點(diǎn)：
[0018] (1)板式發(fā)光法檢測(cè)LP-PLA2和CRP兩個(gè)指標(biāo)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度高 的特點(diǎn)，相比ELISA方法可以定量，相比膠乳增強(qiáng)免疫比濁法成本更低。
[0019] (2) Lp-PLA2單獨(dú)檢測(cè)對(duì)缺血性腦卒中只能提示神經(jīng)功能的缺損程度，不能反映梗 死體積的大小。CRP為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，與損傷關(guān)系密切，研究表明可作為預(yù)測(cè)腦梗死體 積大小與嚴(yán)重程度的指標(biāo)。因此，這兩個(gè)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)缺血性腦卒中患者更具有臨床 意義。
[0020] (3)基于板式發(fā)光法的雙指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)方法統(tǒng)一了兩個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)方法，使得它 們可以在同一反應(yīng)體系中被檢測(cè)出來(lái)，節(jié)約了樣本的消耗量，同時(shí)也節(jié)省了人力、物力與財(cái) 力。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1為以不同的熒光物質(zhì)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)示意圖。
[0022] 圖2為以板孔內(nèi)位置編碼進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0023] 實(shí)施例1血清Lp-PLA2和CRP兩聯(lián)板式發(fā)光法檢測(cè)試劑盒的制備。
[0024] -種用于同時(shí)檢測(cè)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含量的試劑盒，包括 如下部件：同時(shí)包被有抗Lp-PLA2單克隆抗體a (下文中簡(jiǎn)稱(chēng)單抗a)與抗CRP單克隆抗體 c (下文中簡(jiǎn)稱(chēng)單抗c)的96孔板、標(biāo)記熒光物質(zhì)的抗Lp-PLA2單克隆抗體b (下文中簡(jiǎn)稱(chēng) 單抗b)與標(biāo)記熒光物質(zhì)的抗CRP單克隆抗體d (下文中簡(jiǎn)稱(chēng)單抗d)溶液、Lp-PLA2與CRP 陽(yáng)性質(zhì)控血清、Lp-PLA2與CRP陰性質(zhì)控血清和濃縮洗液。其中，Lp-PLA2與CRP陽(yáng)性質(zhì)控 血清是在正常人血清中分別添加中添加 Lp-PLA2與CRP標(biāo)準(zhǔn)品制得，添加量為正常血清中 Lp-PLA2和CRP含量的臨界值的3倍；其中，正常血清Lp-PLA2Lp-PLA2和CRP含量的的臨界 值分別為175ng/ml和1 μ g/ml ;Lp-PLA2與CRP陰性質(zhì)控血清是正常人血清，其中，Lp-PLA2 含量低于175ng/ml，CRP含量低于1 μ g/ml。
[0025] 其中，各個(gè)部分通過(guò)如下方法制備：
[0026] ⑴識(shí)別Lp-PLA2不同位點(diǎn)的單抗a與單抗b的制備：兩種單克隆抗體均可以通 過(guò)單克隆雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備得到（通過(guò)增量培養(yǎng)法擴(kuò)增保藏雜交瘤細(xì)胞株，然后通過(guò)辛 酸-飽和硫酸銨法純化培養(yǎng)液中的單克隆抗體）或者通過(guò)噬菌體抗體技術(shù)篩選得到（將由 篩選后得到的高親和力克隆構(gòu)建而成的表達(dá)載體經(jīng)轉(zhuǎn)染、表達(dá)、提純后得到高親和力的單 克隆抗體）。本發(fā)明中，Lp-PLA2單克隆抗體A選擇抗人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA 2)單克 隆抗體（貨號(hào)CLM0019006,購(gòu)買(mǎi)自深圳市常量醫(yī)學(xué)工程有限公司），Lp-PLA2單克隆抗體B 選擇抗人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA 2)單克隆抗體（貨號(hào)CLM0019005,購(gòu)買(mǎi)自深圳市常量醫(yī) 學(xué)工程有限公司），兩種單克隆抗體分別識(shí)別Lp-PLA2的不同表位。當(dāng)然，兩種單克隆抗體 可以交換使用，只要保證兩種單克隆抗體識(shí)別Lp-PLA2的不同表位即可。
[0027] ⑵識(shí)別CRP不同位點(diǎn)的單抗c與單抗d的制備：兩種單克隆抗體亦可以通過(guò)單克 隆雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備得到（通過(guò)增量培養(yǎng)法擴(kuò)增保藏雜交瘤細(xì)胞株，然后通過(guò)辛酸-飽 和硫酸銨法純化培養(yǎng)液中的單克隆抗體）或者通過(guò)噬菌體抗體技術(shù)篩選得到（將由篩選后 得到的高親和力克隆構(gòu)建而成的表達(dá)載體經(jīng)轉(zhuǎn)染、表達(dá)、提純后得到高親和力的單克隆抗 體）。本發(fā)明中分別選用抗CRP單克隆抗體c (貨號(hào)CLM0032003,購(gòu)買(mǎi)自深圳市常量醫(yī)學(xué)工 程有限公司）和抗CRP單克隆抗體d (貨號(hào)CLM0032005,購(gòu)買(mǎi)自深圳市常量醫(yī)學(xué)工程有限公 司），兩種單抗分別識(shí)別CRP的不同表位且互不影響。
[0028] (3) 96微孔板的抗體包被：
[0029] 方法1)兩種單抗固定在一個(gè)微孔內(nèi)的任意位置，參照?qǐng)D1。用0. 1M pH值為6. 0 的MES緩沖液配制成包被濃度為Ing/mL的單抗a與單抗c包被液，并將包被液負(fù)載于微孔 板，2-8°C包被18-24小時(shí)。
[0030] 方法2)兩種單抗固定在一個(gè)微孔內(nèi)的固定位置，參照?qǐng)D2。用0. 1M pH值為6. 0 的MES緩沖液配制成包被濃度為Ing/mL的單抗a包被液，并將包被液負(fù)載于微孔板的位 置A處，同樣的包被方法制成單抗c包被液，將其負(fù)載于微孔板的位置B處。2?8°C包被 18-24小時(shí)。
[0031] (4)單抗b和單抗d的熒光標(biāo)記：
[0032] 對(duì)應(yīng)于上一步驟（3)，若采用方法1)，則單抗b用Cy3染料標(biāo)記，單抗d用Cy5標(biāo) 記；若采用方法2)，則單抗b與單抗d可共同采用Cy3染料進(jìn)行標(biāo)記。
[0033] 以單抗b的Cy3染料標(biāo)記標(biāo)記為例，具體操作方法為：將單抗b溶液裝入透析袋 中，置于含Cy3的0. 01M pH9. 4碳酸鹽中反應(yīng)過(guò)夜即可。
[0034] (5)Lp-PLA2與CRP的質(zhì)控血清：陽(yáng)性質(zhì)控血清是在正常人血清（Lp-PLA2低于 175ng/ml，CRP低于1 μ g/ml)中添加 Lp-PLA2與CRP標(biāo)準(zhǔn)品制得，添加量為3倍的臨界值 (分別為175ng/ml和1 μ g/ml)。陰性質(zhì)控血清是正常人血清（Lp-PLA2低于175ng/ml，CRP 低于 1 μ g/ml)。
[0035] (6)濃縮洗滌液：lwt % TWEEN-20的0· 2M磷酸鹽緩沖液（20 X PBST)
[0036] 工作過(guò)程和原理：
[0037] 本發(fā)明采用板式發(fā)光法利用上述試劑盒聯(lián)合檢測(cè)Lp-PLA2和CRP的含量，如圖1 所示，包括如下步驟：
[0038] 1)將單抗a與單抗c同時(shí)包被在微孔的任意位置；
[0039] 2)在7個(gè)連續(xù)板孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品1-5和陽(yáng)性、陰性質(zhì)控血清，37°C孵育 30min。標(biāo)準(zhǔn)品 1-5 中 Lp-PLA2 和 CRP 的含量分別為① 50ng/ml 和 100ng/ml，② 300ng/ml 和 400ng/ml，③ 800ng/ml 和 1000ng/ml，④ 1500ng/ml 和 2000ng/ml，⑤ 3 μ g/ml 和 3. 5 μ g/ ml ；
[0040] 3)洗板后加入不同熒光物質(zhì)標(biāo)記的單抗b與單抗d，37°C孵育30min。其中，單抗 b用Cy3染料標(biāo)記，單抗d用Cy5染料標(biāo)記；
[0041] 4)反應(yīng)結(jié)束后洗滌，然后分別讀取不同激發(fā)光（554nm和648nm)下的發(fā)射光強(qiáng)度， 并分別繪制Lp-PLA2和CRP的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0042] 實(shí)施例2血清Lp-PLA2和CRP兩聯(lián)板式發(fā)光法檢測(cè)試劑盒的準(zhǔn)確度、精確度和穩(wěn) 定性測(cè)試。
[0043] (1)準(zhǔn)確度和精密度
[0044] 選擇高、中、低三個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，各含有Lp-PLA2和CRP濃度為800ng/ml和 1000ng/ml，300ng/ml和450ng/ml, 50ng/ml和100ng/ml。用本發(fā)明設(shè)計(jì)的板式發(fā)光試劑 盒和市場(chǎng)上的常規(guī)檢測(cè)試劑盒（檢測(cè)Lp-PLA2用ELISA法，檢測(cè)CRP用膠乳增強(qiáng)免疫比濁 法）進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，每個(gè)濃度檢測(cè)10次，將所得結(jié)果進(jìn)行比較，確定本試劑盒的準(zhǔn)確度和精 密度，得到的檢測(cè)結(jié)果如下表：
[0045] 表1. Lp-PLA2檢測(cè)結(jié)果比較
[0046]

【權(quán)利要求】
1. 一種同時(shí)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含量的檢測(cè)方法，其特征在于， 包括如下步驟：在同時(shí)包被有抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c的微孔板上， 加入Lp-PLA2與CRP標(biāo)準(zhǔn)品或EDTA抗凝血液離心后得到的血清樣本到各自的微孔中，振蕩 反應(yīng)后洗滌，加入熒光物質(zhì)標(biāo)記的抗Lp-PLA2單克隆抗體b和熒光物質(zhì)標(biāo)記的抗CRP單克 隆抗體d，振蕩反應(yīng)，洗滌液洗滌；用熒光儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度cps，熒光強(qiáng)度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線 即可確定樣品中Lp-PLA2與CRP含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的熒光物質(zhì)為熒光染料、鑭系螯 合物或量子點(diǎn)中的任意一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗 Lp-PLA2單克隆抗體b分別識(shí)別Lp-PLA2的不同表位且互不影響，其中，所述的抗Lp-PLA2 單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b通過(guò)單克隆雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備得到或者通過(guò)噬 菌體抗體技術(shù)篩選得到。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP 單克隆抗體d分別識(shí)別CRP的不同表位且互不影響，其中，所述的抗CRP單克隆抗體c和 抗CRP單克隆抗體d通過(guò)單克隆雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備得到或者通過(guò)噬菌體抗體技術(shù)篩選得 到。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的洗滌液為含0.05wt % TWEEN-20 的 0. 01M 磷酸鹽緩沖液（1 XPBST)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，抗Lp-PLA2單克隆抗體a和抗CRP單 克隆抗體c混合后包被于板孔內(nèi)的任意位置，且抗Lp-PLA2單克隆抗體b和抗Lp-PLA2單 克隆抗體d用不同的突光物質(zhì)標(biāo)記；或者，抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c 分別包被于板孔內(nèi)的不同位置，且抗Lp-PLA2單克隆抗體b和抗Lp-PLA2單克隆抗體d用 相同的熒光物質(zhì)標(biāo)記。
7. -種同時(shí)檢測(cè)測(cè)定血漿中脂蛋白磷脂酶A2與C反應(yīng)蛋白含量的試劑盒，其特征在 于，包括如下部分：同時(shí)包被有抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗CRP單克隆抗體c的微孔板、 標(biāo)記熒光物質(zhì)的抗Lp-PLA2單克隆抗體b與標(biāo)記熒光物質(zhì)的抗CRP單克隆抗體d溶液、 Lp-PLA2與CRP陽(yáng)性質(zhì)控血清、Lp-PLA2與CRP陰性質(zhì)控血清和濃縮洗液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的抗Lp-PLA2單克隆抗體a與抗 Lp-PLA2單克隆抗體b分別識(shí)別Lp-PLA2的不同表位且互不影響，其中，所述的抗Lp-PLA2 單克隆抗體a與抗Lp-PLA2單克隆抗體b通過(guò)單克隆雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備得到或者通過(guò)噬 菌體抗體技術(shù)篩選得到。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP單 克隆抗體d分別識(shí)別CRP的不同表位且互不影響，其中，所述的抗CRP單克隆抗體c和抗CRP 單克隆抗體d通過(guò)單克隆雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備得到或者通過(guò)噬菌體抗體技術(shù)篩選得到。
10. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的Lp-PLA2與CRP陽(yáng)性質(zhì)控血 清是在正常人血清中分別添加中添加 Lp-PLA2與CRP標(biāo)準(zhǔn)品制得，添加量為正常血清中 Lp-PLA2和CRP含量的臨界值的3倍；其中，正常血清Lp-PLA2Lp-PLA2和CRP含量的的臨 界值分別為175ng/ml和1 μ g/ml ;所述的Lp-PLA2與CRP陰性質(zhì)控血清是正常人血清，其 中，Lp-PLA2含量低于175ng/ml，CRP含量低于1 μ g/ml。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK104280556SQ201410605080
【公開(kāi)日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】楊子學(xué) 申請(qǐng)人:楊子學(xué)